谢勇恩
- 作品数：66 被引量：141H指数：6
- 供职机构：川北医学院更多>>
- 发文基金：四川省重点科技攻关项目国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展被引量：3
- 2017年
- 鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性杆菌,同时也是医院获得性感染的主要致病菌之一。由于其广泛的耐药性,普通抗生素对其治疗效果已不明显。近年来,国内外学者尝试通过研制抗菌疫苗的手段来防治鲍曼不动杆菌感染,主要有灭活全菌体疫苗、外膜囊泡、重组蛋白亚单位疫苗、荚膜多糖候选疫苗、联合疫苗等。现就鲍曼不动杆菌疫苗的研究进展进行了综述。
- 郭三君谢勇恩
- 关键词：鲍曼不动杆菌联合疫苗
- 结核杆菌多价核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究被引量：10
- 2007年
- 目的构建包含结核杆菌3种抗原蛋白Ag85A、ESAT-6和CFP-10真核表达质粒的多价DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析。方法PCR扩增获得结核杆菌ag85 a、esat-6和cfp-10基因片段,分别克隆入真核表达质粒VR1020的BamHⅠ位点构建DNA疫苗,以此多价DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内的特异性抗体应答和细胞免疫反应,并与BCG免疫组、质粒VR1020免疫组和生理盐水对照组相比较。结果多价DNA疫苗免疫小鼠后能产生特异性的细胞和体液免疫应答,DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞IFN-γ的表达量显著高于BCG免疫组,而DNA疫苗免疫组小鼠所产生的特异性抗体水平低于BCG免疫组。结论成功构建了结核杆菌多价DNA疫苗,免疫小鼠后检测到特异性细胞和体液免疫应答。
- 谢勇恩
- 关键词：结核杆菌免疫原性
- 重组杜氏利什曼原虫Pxn1、TryP、假定蛋白CAJ07026和GDPMP蛋白刺激BALB/c小鼠的免疫应答状态被引量：3
- 2017年
- 目的观察重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)过氧化物还原酶1(peroxidoxin-1,Pxn1)、锥虫氧化还原过氧化物酶(tryparedoxin peroxidase,Try P)、假定蛋白CAJ07026(hypothetical protein CAJ07026.1,Hyp07026)和甘露糖-1-磷酸胍氨酸转移酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GDPMP)蛋白刺激BALB/c小鼠免疫应答状况。方法逆转录PCR(RT-PCR)分别扩增杜氏利什曼原虫Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因,克隆入质粒p QE30,构建重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP,转化至大肠埃希菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。采用NTA-Ni盐凝胶层析柱,自然条件方式纯化重组蛋白rPxn1和rTry P,变性条件方式纯化重组蛋白rHyp07026和rGDPMP。25只BALB/c小鼠随机均分成5组,即rPxn1、rTry P、rHyp07026、rGDPMP免疫组及PBS对照组,免疫组小鼠分别以相应重组蛋白进行免疫,第1周免疫组小鼠皮下注射100μg相应的重组蛋白,隔周以50μg相应的重组蛋白加强免疫3次,对照组小鼠注射等量PBS。第3次加强免疫后1周,将各组小鼠脱颈处死,制备单个脾细胞,提取抗原刺激后小鼠脾细胞总RNA,用q RT-PCR微阵列检测抗原刺激后小鼠脾细胞内反映免疫应答的细胞因子转录水平表达谱。结果Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因经PCR扩增,其产物大小分别为570、610、1 040和1 200 bp;经测序证实,与Gen Bank中的相关序列一致。重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP经IPTG诱导后均可在大肠埃希菌内高效表达,rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026蛋白相对分子质量(Mr)分别为45 000、22 000、23 000和38 000。rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026免疫小鼠的脾细胞内84个细胞因子基因的m RNA表达中,与PBS对照小鼠脾细胞比较,高水平表达的IL-1f6分别是对照组的96.22、271.54、108.51和250.15倍,IL-17f分别是对照组的105.54、35.71、53.38和53.57倍,IL-10分别是对照组的21.68、27.51、24.45�
- 敬保迁谢勇恩胡为民杨健王朝莉冯莉
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- 临床耐药革兰氏阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶及新型酶抑制剂研究
- 凌保东谢勇恩雷军张翔刘毅刘刚李苌清
- 该项目采用基因治疗技术对脱氧核酶作为新型酶抑制剂的抑制效应进行了初步研究。结果发现：⑴临床G-B产生ESBLs是导致其对第三代头孢菌素产生耐药性的主要机制之一，且呈现多重耐药和多基因耐药的特性。⑵本地区产ESBLs菌株通...
- 关键词：
- 关键词：酶抑制剂抗菌药物耐药性合理用药
- 耐第三代头孢菌素革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶及耐药基因分析被引量：2
- 2007年
- 目的了解革兰阴性杆菌对第三代头孢菌素耐药的分子机制。方法采用常规琼脂2倍稀释法测定11株(CR01-CR11)临床分离革兰阴性杆菌,对13种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,纸片扩散法检测耐药菌的ESBLs表型,通过PCR扩增检测其耐药基因。结果MIC结果表明,11株病原菌对几种常见的第三代头孢菌素具有明显的耐药性;表型确证实验表明,除CR07外,其余10株均为产ESBLs菌株;酶的水解底物轮廓实验表明,10株产ESBLs株菌所产生的β-内酰胺酶均能高效水解头孢哌酮和头孢孟多,而对头孢他啶水解活性较低。结论10株产ESBLs革兰阴性杆菌的酶活性、等电点及耐药基因在一定程度上揭示了病原菌产ESBLs与其耐药性之间的关系。
- 谢勇恩李苌清凌保东张翔刘刚
- 关键词：革兰阴性杆菌超广谱Β-内酰胺酶耐药基因
- 结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较被引量：1
- 2004年
- 目的 探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法 ,为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法 分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒 ,体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后 ,将其分别用作DNA疫苗给BALB/c小鼠肌内注射 ,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标 ,同时进行动物免疫保护性实验 ,比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果 结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗 ,但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论 粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。
- 谢勇恩鲍朗赵明才张会东赵计林王晓樱
- 关键词：DNA疫苗结核杆菌小鼠AG85A免疫效应粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
- 超广谱-内酰胺酶SHV-5的基因重组表达及酶活性鉴定
- 2005年
- 目的对blaSHV-5进行基因重组表达,为建立SHV类β-内酰胺酶抑制剂筛选模型研究奠定基础。方法以产blaSHV-5肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板,自行设计一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增获得blaSHV-5基因片断,定向克隆入质粒载体pBK-CM V构建重组质粒,对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序鉴定,重组质粒转化大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′后,N itrocefin显色结合SDS-PAGE分析目的基因在大肠埃希菌中的表达及其酶活性。结果PCR扩增获得了大小约为900bp的DNA条带,定向克隆入质粒载体pBK-CM V后筛选到大小约为5.4kb的重组质粒,S acⅠ和E coRⅠ双酶切后可切下大小约900bp的插入片段,DNA测序发现插入片断的基因序列与G enB ank中肺炎克雷伯菌基因序列完全一致,重组质粒转化大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′后可表达分子量约为31500的重组蛋白。重组菌裂解液对n itrocefin显示出较强水解活性。结论超广谱β-内酰胺酶SHV-5在大肠埃希菌XL 1-B lue M RF′中实现了基因重组表达。为进一步进行酶的纯化等相关后续研究奠定了基础。
- 谢勇恩凌保东张翔张效良李苌青
- 关键词：克隆酶活性
- 莱姆病螺旋体原浆柱蛋白基因特异区段的克隆与表达研究
- 该研究从莱姆病螺旋体染色体编码的83kd原浆柱蛋白(p83)基因序列中选择编码近C端单克隆抗体结合部位附近159个氨基酸的基因序列作为扩增和克隆的靶序列,自行设计并合成了一对寡核甘酸引物,以莱姆病螺旋体B31株基因组DN...
- 谢勇恩
- 关键词：莱姆螺旋体
- 同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析被引量：1
- 2006年
- 目的了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测,酶提取物三维实验检测AmpC酶,双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增,将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达,并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药,表型检测AmpC酶为阴性,ESBLs阳性,IEF显示该菌产两种pI分别为8.7及5.4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因,产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药,产CTX-M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药,对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX-M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶,可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。
- 刘刚凌保东谢勇恩周岐新雷军赵廷坤
- 关键词：阴沟肠杆菌超广谱Β-内酰胺酶表型
- 临床分离耐药摩氏摩根菌的β-内酰胺酶表型和基因型分析被引量：8
- 2005年
- 目的探讨临床分离耐药摩氏摩根菌3-87耐药的分子机制。方法采用常规琼脂二倍稀释法对摩氏摩根菌3-87进行15种抗菌药的M IC测定;超声破碎法提取β-内酰胺酶;并用n itrocefin做定性检测,用紫外分光光度计检测酶活性;超薄层等电聚焦测定β-内酰胺酶等电点和酶抑制实验;ESBL s表型鉴定;Am pC酶的检测;纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株;以摩氏摩根菌3-87质粒DNA为模板扩增blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因,以基因组DNA为模板扩增ampC结构基因;ampC结构基因扩增产物的DNA序列测定及同源性分析。结果摩氏摩根菌3-87对10种β-内酰胺类抗生素、2种氟喹诺酮类抗菌药耐药,对哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦、氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感。产酶活性为3727.5U的β-内酰胺酶。产生的pI7.3、8.2及9.6的三种β-内酰胺酶分别能被氯唑西林、克拉维酸、EDTA部分抑制。β-内酰胺酶表型鉴定试验结果显示菌株产ESBL s、Am pC酶及金属β-内酰胺酶三种β-内酰胺酶。blaCTX-M基因引物扩增出阳性扩增条带。ampC结构基因引物扩增阳性扩增带,对扩增产物进行序列分析与已报道的摩氏摩根菌ampC结构基因的核苷酸序列高度同源,推导的氨基酸序列发生了1个氨基酸残基的变异。结论临床分离耐药摩氏摩根菌3-87呈多重耐药,其对β-内酰胺类抗生素耐药的机制是产生了ESBL s、Am pC酶及金属β-内酰胺酶。
- 余娴凌保东谢勇恩周岐新雷军
- 关键词：Β-内酰胺酶ESBLSAMPC酶金属Β-内酰胺酶
