邢小翠
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。
- 查欣王晓辉唐刘君李娟邢小翠胡中倩杨晓明汪思应
- 关键词：原发性肝细胞癌
- 细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚肾HEK293细胞,采用Western blot法和Realtime RT-PCR,检测特异性shRNA对CDCA3蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果成功构建靶向CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体;转染HEK293细胞后,可显著下调CDCA3在细胞内的mRNA水平及蛋白表达水平。结论 CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体能显著下调HEK293细胞内的CDCA3蛋白表达。成功构建CDCA3 shRNA表达载体,为进一步研究CDCA3基因的功能提供了实验基础。
- 李娟唐刘君王晓辉查欣胡中倩邢小翠杨晓明汪思应
- 关键词：RNA干扰SHRNA
- DNA-PKcs单链抗体DPK3-scFv的原核表达纯化及生物学作用研究
- 2012年
- 目的原核表达和纯化DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)单链抗体DPK3-scFv,观察其透入细胞及干扰辐射诱发DNA-PKcs磷酸化修饰的生物学作用。方法 PCR扩增DPK3-scFv基因,插入到带有His标签的原核表达载体pET28a,重组质粒转化工程菌BL21、优化表达。免疫荧光显微镜和蛋白免疫印迹观察DPK3-scFv透膜进入HeLa细胞及对电离辐射诱发靶分子DNA-PKcs的磷酸化修饰的影响。结果成功构建单链抗体表达载体pET28a-DPK3-scFv,在2xYT培养基(16 g胰蛋白胨、5 g酵母提取物和10 g NaCl溶于1 L双蒸水中,高压灭菌)、20℃温度、0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)条件下诱导可溶性表达,进一步获得了纯化单链抗体。DPK3-scFv能体外抑制DNA-PKcs激酶活性,纯化的DPK3-scFv可跨膜进入细胞内,并与DNA-PKcs共定位在细胞核。DPK3-scFv对γ射线照射HeLa细胞中DNA-PKcs及其S2056位点(pS2056)的自磷酸化具有显著抑制作用。结论通过优化条件获得了可溶性原核表达的DPK3-scFv单链抗体,具有抑制其靶分子DNA-PKcs的磷酸激酶活性。
- 邢小翠周丽君尚增甫杨天一李兵王豫刘晓丹郑红汪思应周平坤
- 关键词：单链抗体原核表达DNA-PKCS电离辐射磷酸化
- DNA-PKcs单链抗体DPK3-scFv的原核表达纯化及生物学作用研究
- 恶性肿瘤是当今威胁人类生命健康的头号杀手,而放射治疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一。但放射治疗过程中除了具有损伤正常组织包括骨髓毒性副作用外,另外一个主要问题就是肿瘤细胞产生放射耐受性。因此,增强肿瘤放疗的辐射敏感性就成为...
- 邢小翠
- 关键词：肿瘤放射治疗单链抗体原核表达生物学作用
- DNA-PKcs单链抗体DPK3-scFv的原核表达纯化及生物学作用
- 恶性肿瘤是当今威胁人类生命健康的头号杀手，而放射治疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一。但放射治疗过程中除了具有损伤正常组织包括骨髓毒性副作用外，另外一个主要问题就是肿瘤细胞产生放射耐受性。因此，增强肿瘤放疗的辐射敏感性就成为...
- 邢小翠
- 关键词：单链抗体原核表达
- 文献传递
- SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测被引量：3
- 2012年
- 目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。
- 胡中倩汪心怡李菲菲储著朗邢小翠李娟查欣瞿成奎汪思应
- 关键词：SHP-2蛋白酪氨酸磷酸酶真核表达突变
