邵明龙
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目温州市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学更多>>
- 人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化被引量：7
- 2010年
- 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。
- 王会岩田海山赵宏鑫张耀方万晓姗邵明龙杨苹肖业臣李校堃
- 关键词：成纤维细胞生长因子21
- 重组人成纤维细胞生长因子-21的表达及纯化工艺的优化被引量：2
- 2009年
- 目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等。纯化产物经SDS-PAGE和HPLC鉴定纯度。结果在诱导温度为37℃,诱导时间为4h,IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高,达20.5%;罐发酵收菌量可达66g/L,目的蛋白的表达量达20.2%;纯化后的rhFGF-21纯度达96%以上。结论优化了rhFGF-21的表达条件及纯化工艺,为rhFGF-21用于新药开发奠定了基础。
- 赵宏鑫邵明龙杨苹张耀方万晓姗孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：SUMO纯化
- 新疆红花组织培养与快速繁殖的研究被引量：12
- 2009年
- [目的]筛选新疆红花组织培养的调控体系,以获得离体培养的再生植株。[方法]将无菌材料置于不同的培养基上培养构建愈伤组织无性系,进行继代培养,最终将生根的炼苗移栽至基质中使其生长。[结果]子叶是用于红花再生较理想的材料,愈伤组织的分化能力在不同培养基上明显不同。筛选出的适合红花建立再生体系的最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+2.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂,分化培养基为MS+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂,生根培养基为1/2 MS+2mg/L IBA+0.2 mg/L BA。[结论]该研究为红花的资源保护、扩大繁殖和进一步推广应用及利用其作受体系统研究植物生物反应器奠定了基础。
- 杨晶邵明龙李天航李校堃
- 关键词：红花培养基
- FGF21[Tyr^(20)]突变体的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法:以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20],克隆至BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,SephadexG-50除盐。结果:通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20]经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符。经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21[Tyr20]突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21[Tyr20]突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应。结论:成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21[Tyr20]的突变体基因,获得FGF21[Tyr20]蛋白。
- 张耀方万晓珊赵宏鑫邵明龙杨苹孔祥鑫刘敏李校堃王会岩
- 关键词：原核表达纯化
- 人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastorisGS115和SMD1168。MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子。甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白。结果:PCR扩增出约569bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达。结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastorisSMD1168中获得表达。
- 邵明龙赵宏鑫杨苹万晓珊孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：毕赤酵母PPIC9K基因克隆
- 成纤维细胞生长因子-21[Arg^(59)]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化被引量：2
- 2010年
- 目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础。方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析。结果:PCR扩增出约546bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59]重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。结论:成功构建FGF21[Arg59]突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59]突变体蛋白。
- 万晓珊赵宏鑫张耀方张海淼邵明龙王会岩李校堃
- 关键词：突变体纯化
- 植物生物反应器与药物研发被引量：1
- 2009年
- 随着基因工程、细胞工程、酶工程的发展。生物技术不断影响着人类生活的方方面面，不仅体现出巨大的经济价值，也提供了不可替代的社会服务。其中。利用植物生物反应器表达生产具有临床应用价值的药用蛋白（包括疫苗、抗体）已成为生物制药产业的热点领域，在抢占生物经济制高点、促进国民经济持续稳定发展进程中显示了越来越重要的作用。具有极大的市场前景和商业价值，日益引起人们的关注。
- 杨晶曲勍邵明龙李校堃
- 关键词：转基因植物
- 分子生物学技术在植物生物反应器领域的应用被引量：3
- 2009年
- 简述了分子生物学技术、植物生物反应器研究现状及利用植物生物反应器生产外源蛋白质的研究进展。重点阐述了应用植物表达系统生产疫苗、抗体和医用蛋白的情况。
- 杨晶李天航邵明龙尹锐刘秀明庞实峰
- 关键词：分子生物学植物生物反应器药用蛋白
