郑红玉
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒S1基因的克隆及在腺病毒中的表达被引量：3
- 2014年
- 为了研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1基因在腺病毒中的表达,试验采用RT-PCR方法,获得S1目的基因序列,并将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,再与BJ5183细菌内的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得携带猪流行性腹泻病毒S1基因的重组腺病毒质粒pAd-S1;该重组质粒经PacⅠ酶切、转染AD-293细胞,获得具有感染性的重组腺病毒rAd-S1;病毒效价在传至第6代时可达到1×108.3TCID50/mL,同时经PCR检测,目的基因在重组腺病毒rAdS1传代过程中稳定存在;间接免疫荧光检测和Western-blot检测,rAd-S1在AD-293细胞中成功表达出分子质量约为100 ku猪流行性腹泻病毒S1蛋白。说明构建的重组腺病毒rAd-S1能够稳定地表达PEDV S1蛋白。
- 项林盛郑红玉唐丽云黄毓茂
- 关键词：猪流行性腹泻病毒重组腺病毒S1蛋白
- 口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 为研制口蹄疫病毒(FMDV)的新型重组腺病毒疫苗,本研究通过RT-PCR扩增FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因,分别构建重组腺病毒穿梭质粒,并在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183E.coli中同源重组获得腺病毒重组质粒pAd-3C、pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得含有目的基因的重组腺病毒。将具有感染能力的复制缺陷型重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1、rAd-P1-2A、rAd-L-P1、rAd-L-2A共感染Vero细胞,裂解细胞收集细胞上清液并进行小鼠免疫试验。经ELISA检测表明,重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1-2A、rAd-L-2A共感染Vero细胞上清液能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。
- 张春红郭春和项林盛唐丽云郑红玉姜后全黄毓茂
- 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒免疫原性
- 猪圆环病毒2型ORF2优化基因在酵母中的表达被引量：1
- 2013年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白亚单位疫苗,试验采用优化过的ORF2基因,成功构建了酵母重组表达质粒pGAPZaA-ORF2,用BlnⅠ对其进行线性化,通过电击转化,将其整合入毕赤酵母X33基因组中,ZeocinTM抗性筛选获得转化子pGAPZaA-ORF2-X33,通过PCR、SDS-PAGE和Western-blot进行分析鉴定。结果表明:Cap蛋白在酵母菌中成功分泌表达。
- 姜后全郑红玉项林盛唐丽云黄毓茂
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因毕赤酵母分泌表达
- 重组抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析
- 2013年
- 为了在毕赤酵母Pichia pastoris表达系统中表达猪源Cecropin P1并分析其生物活性,根据Cecropin P1的氨基酸序列和毕赤酵母的密码子偏嗜性设计引物,通过SOEing法合成全基因片段载入到PpicZαA质粒中,酶切线性化重组质粒PpicZαA-cecropin P1后电穿孔导入毕赤酵母X-33中进行整合,经Zection筛选和PCR检测获得高拷贝的转化子.发酵表达后将表达产物经加热预处理和Sephadex G-25层析及冻干浓缩后,Tricine-SDS-PAGE显示明亮单一条带.采用琼脂扩散法对纯化后的抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性、耐胰酶和胃蛋白酶稳定性进行了生物活性分析,结果表明Cecropin P1具有较强的热稳定性、酸稳定性及胃蛋白酶稳定性,但是在碱性环境下和胰酶作用下抑菌活性明显下降.
- 唐丽云郭春和郑红玉项林盛刘德辉黄毓茂焦茂兴
- 关键词：抗菌肽纯化生物活性
- 黑曲霉分泌表达载体的构建以及绿色荧光蛋白的表达被引量：1
- 2013年
- 采用PCR扩增得到糖化酶基因启动子(PglaA-g)、色氨酸合成酶基因终止子(TtrpC)和潮霉素抗性筛选标记基因,依次连接这些基因元件,获得黑曲霉Aspergillus niger分泌表达载体pPHT.EGFP基因与黑曲霉表达载体pPHT连接,得到重组表达载体pPHT-EGFP.pPHT-EGFP表达载体通过原生质体转化法转化黑曲霉,经潮霉素抗性筛选、基因组PCR鉴定阳性重组转化子.荧光显微镜观察表明,绿色荧光蛋白成功表达,而且荧光的分布具有一定的规律,主要集中在菌丝顶端、膈膜以及培养基中;固体培养基发出绿色荧光,表明绿色荧光蛋白分泌到培养基中,属于分泌性表达,蛋白分泌的部位主要位于菌丝顶端.
- 郑红玉黄毓茂余希尧钟泽民项林盛唐丽云
- 关键词：EGFP基因黑曲霉
- O型FMDV多抗原表位在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析被引量：3
- 2014年
- 为了研制口蹄疫的新型多肽疫苗，试验以l株0型口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因为模板，根据毕赤酵母密码子偏嗜性，设计合成了含有T细胞表位（21～40aa）和B细胞表位（129～169aa）的多肽基因TB60，通过基因工程技术克隆到pGAPZαA质粒中，构建成分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA—TB60，并经线性化后用电穿孔法转入毕赤酵母X33中，经博莱霉素（Zeocin）抗性筛选及PCR检测后，获得高拷贝转化子；再对重组毕赤酵母pGAPZαA—TB60-X33的分泌表达产物进行Tricine—SDS—PAGE和Western-blot分析。结果表明：重组多肽TB60的分子质量约为8．0ku，其在上清液中的表达量为70mg／L。此多肽能诱导机体产生特异性的体液免疫应答，有良好的免疫原性。
- 项林盛王强郑红玉黄毓茂
- 关键词：口蹄疫病毒毕赤酵母免疫原性
