郑飞
- 作品数：36 被引量：120H指数：5
- 供职机构：湖北医药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PEP-1-SOD1融合蛋白抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ型胶原的合成被引量：3
- 2013年
- 目的研究穿透肽(PEP-1)介导的铜-锌超氧化物歧化酶1(SOD1)(PEP-1-SOD1)融合蛋白对血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFbs)Ⅰ型胶原合成的影响,并探讨其机制。方法利用基因工程技术表达和纯化PEP-1-SOD1融合蛋白。提取原代大鼠CFbs并传代培养,采用2～5代细胞进行实验,实验分为对照组、ANGⅡ诱导组、SOD1预处理组和PEP-1-SOD1预处理组。SOD1预处理组和PEP-1-SOD1预处理组细胞分别以2μmol.L-1的SOD1和PEP-1-SOD1预处理2 h后,再给1μmol.L-1的ANGⅡ诱导24 h,用免疫荧光法检测细胞内超氧阴离子(O2-)水平,微量丙二醛(MDA)检测试剂盒检测各组细胞MDA含量。结果 Western blot和细胞免疫荧光结果显示PEP-1-SOD1成功穿透入CFbs;Western blot结果显示,与ANGⅡ诱导组比较,PEP-1-SOD1预处理组Ⅰ型胶原和α平滑肌肌动蛋白表达显著降低(P<0.01),细胞内O2-和MDA水平也显著降低(P<0.01)。结论 PEP-1-SOD1融合蛋白穿透入大鼠心脏CFbs内,通过降低细胞内O2-水平,抑制CFbs的激活,减少Ⅰ型胶原的合成。
- 杨波谭利国张蕾郑飞孔霞郭凌郧杨建业王家宁
- 关键词：心脏成纤维细胞
- VEGF通过细胞外信号调节激酶途径促进骨髓源间充质干细胞的增殖被引量：15
- 2010年
- 本研究旨在探索血管内皮生长因子(VEGF)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响及其可能的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以培养的第3代MSC(P3MSC)为实验材料,采用MTT法分析20ng/ml的VEGF作用12、36、72小时对MSC增殖的影响;随后以细胞外信号调节激酶(ERK1/2)阻断剂50μmol/L PD98059或丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂30μmol/L SB203580等分别处理P3MSC,观察VEGF是否通过p38MAPK或ERK1/2途径影响MSC的增殖。结果表明:培养的P3MSC表达PDGFR-α、PDGFR-β和NRP1,不表达VEGF-R(Flk1和Flt1)。P3MSC呈现CD90(96.7%)和CD29(94.6%)强阳性以及CD34(0.79%)和CD45(0.84%)阴性特征,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;20ng/ml VEGF作用于MSC后,随着时间的延长,MSC增殖也逐渐增强,在72小时达峰值。在50μmol/L PD98059或30μmol/L SB203580处理后,VEGF所介导的MSC增殖效应被阻断,且在对照水平以下。PD98059阻断效应明显强于SB203580的阻断效应。结论:VEGF可能主要通过细胞外信号调节激酶途径调节MSC的增殖。
- 孔霞郑飞郭凌郧杨建业张蕾唐俊明黄永章王家宁
- 关键词：血管内皮生长因子间充质干细胞细胞外信号调节激酶P38丝裂原活化蛋白激酶
- PEP-1-CAT预处理对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用
- 2012年
- 目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导的人过氧化氢酶(catalase,CAT)对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用基因工程方法表达和纯化His-tag-PEP-l-CAT融合蛋白,将H9c2细胞随机分为正常对照组(CTL)、缺氧复氧组(H/R)、H/R加CAT组(H/R+CAT)、H/R加PEP-1-CAT组(H/R+PEP-1-CAT)。分别向H/R+PEP-1-CAT及H/R+CAT组加入2 mol/L的PEP-1-CAT及CAT500μl处理6 h,将各组细胞置于缺氧箱中缺氧21 h,再复氧6 h。采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平;通过流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;通过Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与H/R组相比,H/R+PEP-1-CAT组的细胞的LDH、MDA、细胞的凋亡率及Bax的表达量均明显下降,Bcl-2的表达量升高(P<0.05)。结论:PEP-1-CAT预处理通过抗氧化和抗凋亡的作用发挥对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用。
- 魏双王家宁唐俊明黄永章郭凌郧张蕾郑飞孔霞
- 关键词：缺氧复氧过氧化氢酶H9C2细胞
- 携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒的构建及其在人血管平滑肌细胞中的表达被引量：6
- 2009年
- 目的:构建携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒质粒pAd-GFP,制备重组腺病毒Ad-GFP,并使GFP在血管平滑肌细胞中得到高效表达。方法:将线性化的穿梭质粒pRNAT-H1.1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183内进行同源重组,并筛选出阳性重组子pAd-GFP;用Pac I酶切线性化pAd-GFP,线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。采用CsC1密度梯度离心进行病毒浓缩和纯化。获得的腺病毒感染人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cell,hVSMC),观察其感染效率和GFP表达水平。结果:通过Pac I酶切证实腺病毒载体构建成功,包装出携带GFP基因的腺病毒,滴度达到4.5×1012pfu/mL,获得的腺病毒对hVSMC的感染效率约为100%。结论:利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒,并能够在hVSMC细胞中高效地表达,为利用GFP作为报告基因的研究奠定了实验基础。
- 张蕾王家宁郭凌郧孔霞杨建业唐俊明黄永章郑飞
- 关键词：报告基因绿色荧光蛋白人血管平滑肌细胞RNA干扰
- hSDF-1α/CXCR4介导骨髓源间充质干细胞迁移的信号转导被引量：5
- 2007年
- 目的:利用Boyden chamber体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其信号转导机制.方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133,CD34,CD90,CD105)等鉴定MSC特征;以P3-MSC为实验材料,利用Boyden chamber体外迁移体系,观察不同浓度的hSDF-1对MSC迁移的影响,以50nmol渥曼青霉素,10mmol LY294002,50mmol PD98059,10mmol U73122,0.1g/L AMD3100等不同处理P3-MSC,观察最适宜浓度的hSDF-1对MSC迁移影响的信号转导机制.结果:培养的MSC呈现出CD90,CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;MSC体外迁移能力随着hSDF-1α浓度(1,10,100,500μg/L)的递增而逐渐增强,并且hSDF-1α浓度在100μg/L时,MSC迁移到滤膜上的细胞数接近于峰值;渥曼青霉素,LY294002,PD98059,U70312,AMD3100,维拉帕米对MSC迁移均有影响,其中U73122,AMD3100对MSC迁移阻断的效应最显著.结论:SDF-1/CXCR4所介导的MSC迁移与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C和蛋白激酶C(PKC)等信号途径有关,且PKC途径可能处于中心环节.
- 王新均唐俊明孔霞郭凌郧杨建业郑飞陈龙黄永章王家宁
- 关键词：间充质干细胞迁移蛋白激酶C信号转导
- 丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞生长及p53蛋白表达水平的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:研究丹参酮Ⅱ A联合顺铂在体外对宫颈癌Hela细胞生长的影响及细胞中p53蛋白表达水平的变化。方法:采用MTT法测定丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞增殖的影响;HE染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定p53蛋白水平的表达。结果:丹参酮ⅡA联合顺铂用药组比同等剂量的两药单用组及对照组对Hela细胞的增殖抑制率高(P<0.05);对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见细胞凋亡;药物处理组均可检测到细胞亚G1峰,两药联合组细胞亚G1峰与单药组差异显著;在只含溶媒组、丹参酮Ⅱ A组、顺铂组及丹参酮Ⅱ A联合顺铂组中p53蛋白水平表达逐步升高。结论:丹参酮Ⅱ A联合顺铂比两药单用能显著抑制Hela细胞的生长;二者通过增加p53蛋白的表达,促进细胞凋亡。
- 周爱枝胡平任青周玉萍黄光荣孔霞郭凌郧郑飞
- 关键词：顺铂P53子宫颈癌
- 不同转染方式对腺病毒介导的基因转染效率的影响
- 2010年
- 目的:研究携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法:将纯化的GFP重组腺病毒分别用单次转染和多次转染两种不同方法转染MSC,观察其感染效率和GFP表达水平。结果:培养的MSC呈CD90和CD105强阳性,且具有成骨、成脂肪等多向分化能力;携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒单次转染和多次转染P3代MSC都呈现出浓度依赖性;单次转染在80MOI时转染效率最高,而多次转染在20MOI时转染效率即已达90%。结论:建立稳定、高效表达Ad-GFP的骨髓间充质干细胞实验体系,为MSC的标记及示踪奠定基础。
- 孔霞郭凌郧张蕾郑飞杨建业黄永章唐俊明王家宁
- 关键词：腺病毒绿色荧光蛋白转染骨髓间充质干细胞
- PEP-1介导血红素加氧酶-1导入肝细胞的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的采用体外培养的L02肝细胞株,研究PEP-1肽介导血红素加氧酶-1(PEP-1-HO-1)穿透肝细胞的能力。方法实验分为PEP-1-HO-1组和HO-1组,用基因工程的方法制备并纯化PEP-1-HO-1融合蛋白,将纯化的目的蛋白及HO-1蛋白加入培养的L02肝细胞,通过免疫荧光及western blot来分析其转导能力。结果经测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-HO-1重组成功。SDS-PAGE及western blot结果表明,PEP-1-HO-1在Rosetta(DE3)pLysS菌中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-HO-1,将其加入到体外培养的L02肝细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能持续稳定表达48h,免疫组化显示其主要分布于胞质和胞核中。结论 PEP-1-HO-1融合蛋白能高效地转导入培养肝细胞,为进一步研究肝细胞氧化应激损伤防治的动物模型实验提供了新的途径。
- 曾天才王卫星陈先祥唐俊明郭凌郧郑飞张林菲
- 关键词：血红素加氧酶蛋白转导肝细胞
- 右美托咪定对小鼠成肌细胞C2C12增殖、分化的影响被引量：2
- 2020年
- 目的观察右美托咪定对小鼠成肌细胞C2C12增殖、分化的影响,探究心力衰竭患者骨骼肌病的发病机制。方法用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体的表达特征。将C2C12细胞分为6组:对照组和右美托咪定5个浓度梯度组(5、10、20、40、80 mmol/L)。CCK-8法检测右美托咪定对C2C12细胞增殖的影响。用分化培养基诱导C2C12分化,按单次和连续单次的给药方式给C2C12细胞加药,分化6 d后,用免疫荧光检测不同分组肌球蛋白重链(MYH)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、肌细胞生成蛋白(MyoG)的表达水平,并定量分析C2C12细胞分化、融合为含不同细胞核数的肌管数。将C2C12细胞分为2组:对照组和右美托咪定(20 mmol/L)组,按连续单次的给药方式加药,用免疫荧光检测C2C12细胞分化第2、4、6天的MYH、MEF2C、MyoG表达水平。结果C2C12细胞呈现出α2-肾上腺素能受体表达的特征。CCK-8法显示右美托咪定抑制C2C12细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。单次给药没有连续单次给药抑制C2C12细胞分化的效应明显,且连续单次给药随着浓度的增加,MYH、MEF2C、MyoG的表达水平逐渐降低,C2C12细胞分化为含多细胞核数的肌管逐渐减少(P<0.05)。C2C12细胞分化第2、4、6天,右美托咪定(20 mmol/L组)的MYH、MEF2C、MyoG的表达水平均比对照组低。结论小鼠成肌细胞C2C12上存在α2肾上腺素能受体,右美托咪定可能通过与α2肾上腺素能受体结合抑制C2C12细胞的增殖、分化,且与MEF2C、MyoG表达水平降低密切相关。
- 陈燕燕徐魏向力岳静李兴元王露郑飞唐俊明郑敏
- 关键词：骨骼肌萎缩C2C12细胞增殖分化
- 丹参酮ⅡA对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用被引量：13
- 2009年
- 目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌A2780细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法以四甲基偶氮唑蓝(M TT)法测定TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的增殖抑制;流式细胞仪检测细胞周期。结果TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞的生长具有抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强。实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少。4.0mg/L TanⅡA作用0、24、48、72h后的凋亡率分别为4.52%、19.7%、25.3%、40.4%,随时间的延长而凋亡细胞增多。结论TanⅡA对人卵巢癌A2780细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,且其作用呈时间-剂量依赖性。
- 祝敏陈萍陈丹石小燕孔霞郭凌郧郑飞
- 关键词：TAN卵巢癌
