郝东利
- 作品数：18 被引量：32H指数：3
- 供职机构：中国科学院南京土壤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 酿酒酵母株系的一株重组工程菌OsAMT1;1-pYES2/31019b及其制备方法
- 本发明涉及酿酒酵母株系的一株重组工程菌OsAMT1;1-pYES2/31019b及其制备方法，其保藏号为CGMCCNo.7254，是以一种水稻铵转运体基因OsAMT1;1的酵母表达载体OsAMT1;1-pYES2建立的重...
- 杨顺瑛苏彦华丛郁金曼郝东利
- 文献传递
- 光氮互作对拟南芥col-0和CS3721512突变体碳、氮代谢的影响被引量：1
- 2018年
- [目的]本文旨在了解光氮互作对拟南芥碳、氮代谢的影响。[方法]以野生型拟南芥col-0和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS1;1)的T-DNA插入突变体CS3721512为材料,采用水培方法,设置2种光照强度(正常和50%遮阳网遮阳处理)和2种NH_4^+水平(2和20 mmol·L-1NH4Cl),测定拟南芥鲜质量,分析叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、总N量和谷氨酰胺合成酶(GS)与谷氨酸脱氢酶(GDH)活性等生理指标。[结果]正常光照下,增加NH_4^+浓度,植株的鲜质量减少,而叶绿素a与叶绿素b含量增加,可溶性蛋白和可溶性糖含量增加,游离铵含量与总N量增加,GS和GDH活性升高;与col-0相比,CS3721512对高NH_4^+更为敏感,铵同化能力受到抑制,植株的长势更弱。弱光胁迫下,拟南芥的鲜质量下降,叶绿素a含量和叶绿素总量降低,可溶性糖和可溶性蛋白含量减少,游离铵含量与总N量降低,GS和GDH活性降低。弱光胁迫下增加NH_4^+浓度,可以增加拟南芥鲜质量、叶绿素a含量、游离铵含量和植株总N量,提高叶片中GS和GDH活性。[结论]光、氮及其互作对拟南芥的碳、氮代谢有影响,弱光胁迫条件下增加NH_4^+浓度可以增加叶片叶绿素含量,在一定程度上缓解弱光对植株的生长胁迫。与col-0相比,弱光下增加NH_4^+浓度,对CS3721512的生长更为有利。
- 李祎杨顺瑛郝东利苏彦华
- 关键词：拟南芥氮碳代谢氮代谢
- 外源蔗糖对高NH4^+胁迫下拟南芥碳氮代谢的影响被引量：1
- 2020年
- 以拟南芥col-0、amt1.1和amt1.3为试验材料,采取基质培养的方法,以常规营养液(4 mmol/L NH4+)处理为对照,设置高NH4+(20 mmol/L)营养液中分别添加0%蔗糖(T1)、5%蔗糖(T2)处理,通过测定植株地上部分的鲜重,叶绿素、游离NH4+、可溶性糖、可溶性蛋白、矿质元素含量及谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)酶活性等指标,研究外源蔗糖对NH4+胁迫拟南芥碳氮代谢的影响。结果表明:与CK相比,T1处理下,3个拟南芥株系植株生长均受到严重的抑制。鲜重及GS、GDH活性降低,游离NH4+、叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白含量增加;植株的氮、磷、钾、钙含量增加,镁、铁含量减少。其中col-0植株在T1处理下受到的抑制比amt1.1和amt1.3植株更为显著。与T1处理相比,T2处理增加了拟南芥植株的鲜重,显著提高了可溶性糖和可溶性蛋白含量,提高了GS和GDH活性;降低了叶绿素和游离NH4+的含量,提高了植株的氮、磷、钾、钙、镁含量,降低了植株铁含量,其中,外源蔗糖对col-0植株高NH4+毒害的缓解较两个突变体植株更为显著。
- 李祎杨顺瑛郝东利苏彦华
- 关键词：拟南芥碳代谢氮代谢
- 杜梨铵转运蛋白基因的克隆表达及在梨属植物中的SNP分析被引量：6
- 2011年
- 利用EST并结合RACE方法从杜梨幼苗克隆获得1个AMT基因(PbAMT1;2).分析显示,PbAMT1;2cDNA全长1 811 bp,开放阅读框为1 515 bp,其对应基因组DNA序列不含内含子.PbAMT1;2编码的蛋白由504个氨基酸组成,具有11个跨膜域,1个N-糖基化位点、3个酪蛋白激酶磷酸化位点和8个蛋白激酶C磷酸化位点.同源性分析发现,PbAMT1;2与其他植物的AMT具有较高的一致性,其中与百脉根LjAMT1;2的一致性为80.23%,与拟南芥AtAMT1;2的一致性为78.68%,与番茄LeAMT1;2的一致性为77.80%.系统进化树分析表明,PbAMT1;2属于AMT1亚家族.半定量RT-PCR结果显示,PbAMT1;2主要在根部表达,而在茎和叶中几乎没有表达.以杜梨、豆梨、砂梨、白梨、秋子梨和西洋梨等6种梨属植物的DNA为模板,高保真Taq酶PCR扩增AMT1;2基因ORF区DNA序列,发现6种梨属植物的AMT1;2 ORF区DNA序列长度均为1 515 bp,相似性高达99.48%,但在44个核苷酸位点中存在SNPs,导致18个氨基酸位点发生变异,多态性频率为1SNP/34.43 bp,核苷酸变异度为2.9%,氨基酸变异度为3.57%.
- 丛郁杨顺瑛宋志忠郝东利苏彦华
- 关键词：杜梨克隆梨属植物单核苷酸多态性
- OsAKT2/3基因的生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- Shaker类型K+通道在植物钾的吸收、转运及其他生理过程中发挥着重要作用。AKT2/3是Shaker类型K+通道中唯一既主导K+内流,又允许去极化情况下K+渗漏性外流的通道。水稻Os AKT2/3蛋白的生物信息学分析表明,Os AKT2/3蛋白含有K+通道的标志性序列Txx Tx GYGD;该基因分子式为C4219H6693N1179O1233S35,理论等电点为6.64,氨基酸残基组成中亮氨酸残基含量最高;有一定的亲水性,为跨膜蛋白;可能存在31个翻译后修饰位点、5种结构域、52个磷酸化位点,不含信号肽;序列主要构件为α-螺旋和折叠延伸;该蛋白与其他植物的AKT2/3家族成员具有较高的同源性。试验结果为Os AKT2/3基因生理功能的深入研究提供一定依据。
- 高南李俊林郝东利苏彦华
- 关键词：水稻磷酸化位点系统进化
- 豆梨铵转运蛋白基因PcAMT1-1和PcAMT1-2的克隆与功能鉴定被引量：6
- 2013年
- 为探明豆梨(Pyrus calleryana Dcne.)铵转运蛋白基因家族成员的序列特征、生理功能和表达特点,以豆梨幼苗为材料,运用电子克隆与3′-RACE技术获得2个铵转运蛋白基因PcAMT1-1和PcAMT1-2,采用酵母互补和半定量RT-PCR方法研究它们的生理功能与表达特点。结果表明:PcAMT1-1和PcAMT1-2开放阅读框为1 518 bp和1 515 bp,编码的蛋白分别含505和504个氨基酸残基。PcAMT1-1和PcAMT1-2分别与甜橙×枳后代CpAMT(ABI52423)和茶CsAMT1;2(AB114913)的同源性最高(81.96%和78.31%)。PcAMT1-1和PcAMT1-2转入酵母均能使铵转运体缺失突变菌株31019b恢复NH4+吸收能力,在酸性条件下(pH 4.8或5.8)PcAMT1-1和PcAMT1-2对31019b的互补效果均优于中性条件(pH 6.8)。NH4+有毒类似物MeA+可以显著抑制转PcAMT1-1酵母31019b的生长,该物质对转PcAMT1-2酵母31019b无抑制效果;谷氨酰胺合成酶抑制剂MSX可有效抑制PcAMT1-2对酵母31019b的互补效果,对PcAMT1-1的互补效果无显著影响。正常供铵,PcAMT1-1主要在叶中表达,PcAMT1-2主要在根中表达;无氮处理后,PcAMT1-1和PcAMT1-2在根中的表达先上调后下降;重新供铵后,它们的表达量恢复;地上部的表达对上述处理无显著响应。综上所述,PcAMT1-1和PcAMT1-2在豆梨中具有吸收或转运NH4+的功能,并可能具备不同的调控机制。
- 丛郁杨顺瑛金曼郝东利苏彦华
- 关键词：豆梨克隆
- 电生理试验中记录微小电流的方法
- 本发明公开一种电生理试验中记录微小电流的方法，其具体步骤如下：外源转运蛋白在细胞中表达后，将细胞钳制于‑70 mV，每隔70 S施加时长1.5 S、电压区间从‑160 mV到+20 mV变化的ramp程序以获取转运蛋白在...
- 苏彦华郝东利杨顺瑛
- 文献传递
- 一种定量测定水稻铵转运体蛋白OsAMT1;1 NH4<Sup>+</Sup>吸收速率的方法
- 本发明公开一种定量测定水稻铵转运体蛋白OsAMT1;1NH<Sub>4</Sub><Sup>+</Sup>吸收速率的方法：利用保藏号为CGMCCNo.7254的酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）重...
- 杨顺瑛苏彦华丛郁金曼郝东利
- 文献传递
- 空心莲子草铵转运体ApAMT1;3基因的克隆及功能鉴定
- 2015年
- 近年来,空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)因其对水体富营养化尤其是水体铵积累有潜在的修复能力而受到人们的关注。然而,目前对空心莲子草吸铵的分子生物学研究甚少。本研究利用简并引物和RACE技术分离了一条铵转运体cDNA,命名为ApAMT1;3;实时定量结果表明,ApAMT1;3主要在地上部表达,缺铵处理显著增强了ApAMT1;3在根、茎及叶部的表达水平;酵母功能互补试验表明,ApAMT1;3是一个功能型的铵转运体。本研究结果为研究空心莲子草NH4+的吸收和利用提供了新的基因资源,同时也为研究水生植物NH4+的吸收转运及调控机制奠定了分子生物学基础。
- 宋志忠杨顺瑛郝东利岳光振苏彦华
- 关键词：空心莲子草
- 水稻铵转运蛋白OsAMT1;1功能特性研究
- 本文以日本晴为试验材料，克隆获得OsAMT1：1cDNA全长。将OsAMT1：1构建在卵母细胞表达载体上。注射重组质粒入蛙卵表达2-3天，用双电极电压钳技术进行检测，研究其功能特性。利用clampfit10.3及sigm...
- 郝东利杨顺瑛丛郁苏彦华
- 关键词：水稻功能特性细胞表达
- 文献传递
