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金晶

作品数：97 被引量：235H指数：7
供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划上海市重大科技攻关项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 96篇期刊文章
  • 1篇专利

领域

  • 91篇医药卫生
  • 8篇生物学

主题

  • 71篇胰腺
  • 41篇胰腺癌
  • 41篇腺癌
  • 38篇肿瘤
  • 36篇胰腺肿瘤
  • 36篇腺肿瘤
  • 32篇细胞
  • 29篇基因
  • 21篇胰腺炎
  • 21篇腺炎
  • 18篇蛋白
  • 17篇癌细胞
  • 16篇胰腺癌细胞
  • 16篇腺癌细胞
  • 11篇坏死
  • 10篇信号
  • 10篇坏死性
  • 9篇胰腺癌细胞株
  • 9篇细胞株
  • 8篇人胰腺癌

机构

  • 97篇第二军医大学
  • 5篇南京医科大学
  • 2篇复旦大学
  • 2篇上海体育学院
  • 2篇苏州大学附属...
  • 2篇赣榆区人民医...
  • 1篇江苏大学附属...
  • 1篇上海交通大学...
  • 1篇温州医学院附...
  • 1篇沈阳军区总医...
  • 1篇解放军第30...
  • 1篇解放军第41...
  • 1篇解放军第94...
  • 1篇解放军第九四...
  • 1篇中国人民解放...

作者

  • 97篇金晶
  • 81篇李兆申
  • 72篇龚燕芳
  • 50篇高军
  • 43篇满晓华
  • 33篇吴红玉
  • 31篇屠振兴
  • 23篇吴洪玉
  • 15篇杜奕奇
  • 10篇许国铭
  • 6篇徐灿
  • 6篇徐克群
  • 6篇徐岷
  • 6篇许爱芳
  • 6篇郭杰芳
  • 6篇金震东
  • 6篇黄浩杰
  • 5篇张玉琦
  • 5篇潘雪
  • 5篇薛乐宁

传媒

  • 38篇中华胰腺病杂...
  • 11篇第二军医大学...
  • 9篇中华消化杂志
  • 9篇胰腺病学
  • 6篇解放军医学杂...
  • 3篇世界华人消化...
  • 3篇胃肠病学
  • 3篇南京医科大学...
  • 1篇中国基层医药
  • 1篇肿瘤研究与临...
  • 1篇中国医学科学...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇中华内科杂志
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇中华消化内镜...
  • 1篇上海医学
  • 1篇重庆医学
  • 1篇海军医学杂志
  • 1篇医学研究生学...
  • 1篇现代肿瘤医学

年份

  • 1篇2018
  • 1篇2017
  • 3篇2016
  • 4篇2015
  • 5篇2014
  • 7篇2013
  • 5篇2012
  • 9篇2011
  • 9篇2010
  • 10篇2009
  • 6篇2008
  • 7篇2007
  • 6篇2006
  • 15篇2005
  • 9篇2004
共 97 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
原核表达活性内源性血管生成抑制剂canstatin蛋白被引量：1
2006年
目的构建canstatin原核表达载体,表达重组人canstatin蛋白,并验证其生物学活性。方法利用BamH Ⅰ和HindⅢ从重组质粒pUCm-T／canstatin上切下canstatin基因,插入表达质粒 pET-22b(+)相应位点,转化E.coli BL21。异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS- PAGE电泳分析蛋白表达情况。超声破碎菌体,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白,PBS对其透析复性。鸡胚尿囊膜(CAM)实验验证目的蛋白抗血管生成活性。结果重组质粒pUCm-T／canstatin在 BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,电泳证实切下目的基因canstatin cDNA,将其插入质粒pET-22b(+)相应位点,转化E.coli BL21后,琼脂板上生长出多个白色菌落。挑选7个白色菌落做BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,所有菌落均切出分别对应原质粒与目的基因的2条特异性条带,证实均为阳性克隆。IPTG 诱导其中1个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明在相对分子质量24 000左右出现新的蛋白表达条带,诱导后1、2、3、4 h表达蛋白占菌体总蛋白百分比分别为18．2％、18．8％、23．0％和23．4％。Ni- NTA柱亲和层析后,在125、250mmol／L洗脱液中纯化出目的蛋白。CAM实验显示重组人canstatin 蛋白能抑制新生血管形成,且与剂量呈正相关。结论成功构建了canstatin原核表达载体,表达并纯化出有活性的重组人canstatin蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础。
李兆申何小平屠振兴高军潘雪龚燕芳金晶
关键词：血管生成抑制剂
MHCⅡ类转激活因子基因的重组腺病毒载体的构建
2009年
目的构建含有主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ类分子激活物（CⅡTA）基因的重组腺病毒载体。方法回收CⅡTA的PCR产物插入pUC57中，用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切，U—Gene凝胶回收纯化3300bp目的基因片段。用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切质粒载体pShuttle—GFP—CMV，用T4DNA连接酶将上述目的基因片段与pShunle—GFP—CMV片段连接，得到穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA，并经KpnⅠ单酶切及测序鉴定。Ⅰ—CeuⅠ／Ⅰ—SceⅠ双酶切处理，回收目的片段，将pAdxsi载体片段和插入片段进行酶连接，得到腺病毒质粒pAdxsi—GFP—CⅡTA，经XhoⅠ酶切鉴定后转染HEK293细胞并培养出毒。扩增、纯化重组腺病毒AdCⅡTA，并测定病毒滴度。结果重组穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA经KpnⅠ单酶切及测序分析，证实与GeneBank中公布的小鼠CⅡTA（NM_007575）序列完全相符。重组腺病毒pAdxsi—GFP—CⅡTA构建成功后在HEK293细胞中包装产生的重组腺病毒AdCⅡTA对HEK293细胞有致病作用。经多次重复感染并纯化后，病毒滴度达2．0×10^11PFU／ml。结论含小鼠CⅡTA基因的重组腺病毒已成功构建。
张敏敏杨骅金晶吴红玉李兆申
关键词：胰腺肿瘤基因基因疗法
抵抗素在大鼠急性胰腺炎中的表达被引量：3
2009年
目的检测抵抗素在大鼠急性胰腺炎（AP）中的表达，探讨其与胰腺病理改变的关系。方法40只SD大鼠按数字表法随机分为正常组、假手术组、急性水肿性胰腺炎（AEP）组和急性坏死性胰腺炎（ANP）组。AEP组腹腔注射雨蛙素，ANP组腹腔注射精氨酸，正常组未做任何处理，假手术组腹腔注射等容量生理盐水。测定大鼠血清淀粉酶、抵抗素、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白（CRP）水平，记录胰腺／体重比值，观察胰腺组织病理变化，免疫组化法检测胰腺组织抵抗素蛋白表达，实时定量PCR法检测胰腺组织抵抗素mRNA表达。结果抵抗素主要定位于胰腺腺泡细胞的胞质内。AEP组血清淀粉酶水平、胰腺／体重（g／kg）比值、胰腺组织病理评分、抵抗素mRNA表达量及血清抵抗素、IL-1β、TNF-α和CRP水平分别为（4377±343）U／L、（8．67±1．43）、（5．39±0．26）、（2．04±0．19）、（10．21±1．34）ng/ml、（184．18±45．24）pg／ml、（194．24±44．81）pg／ml、（3586±63）ng／ml；ANP组分别为（6750±322）U／L、（9．33±1．76）、（7．81±0．28）、（3．29±0．30）、（15．14±0．84）ng／ml、（349．31±94．54）pg／ml、（315．59±37．04）pg／ml、（4345±244）ng／ml。两组均显著高于假手术组的（1442±183）U／L、（4．34±0．42）、（1．10±0．21）、（0．88±O．08）、（5．13±0．74）ng/ml、（108．74±31．03）pg／ml、（106．44±21．31）pg／ml和（2895±165）ng／ml（P〈0．01），且该两组间差异也有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。血清抵抗素水平与CRP、TNF-α、IL-1β水平及胰腺组织病理评分均呈正相关，相关系数r分别为0．711、0．871、0．794和0．812（P〈0．01）。结论抵抗素与AP的发生、发展有关，其检测结果可能是评估AP严重程度的有价值的指标之一.
徐克群沈云志龚燕芳满晓华吴洪玉金晶
关键词：胰腺炎抵抗素C反应蛋白TNF-ΑIL-1Β
激素性股骨头坏死动物模型建立方法初探被引量：5
2009年
目的:研究激素性股骨头坏死(steroid-induced necrosis of femoral head,SNFH)动物模型的建立方法。方法:12只健康雄性新西兰白兔随机分成甲基泼尼龙组(M组)、甲基泼尼龙+抗生素组(MA组)和对照组(C组),M组和MA组均每周2次,每次肌注甲基泼尼龙琥珀酸钠8 mg/kg,MA组每只每周2次青霉素40万U(0.24 g)肌注,经常性增加动物后肢受力的负荷,激素注射8周后进行股骨头CT和组织病理检查,观察造模效果。结果:M组在激素注射后5周内全部死亡,MA组建模期间全部存活。CT显示MA组无特征性股骨头坏死表现,但局部结构模糊不清,有高亮度影。MA组病理检查肉眼可见股骨头软骨面局部缺损,坏死面暴露,髓腔内大量脂肪组织堆积;光镜下成骨细胞、骨细胞均减少,空骨陷窝增多,微小血栓广泛分布,变形扩大的脂肪细胞挤压正常骨髓组织细胞,骨小梁变细破裂明显。结论:本实验建立SNFH动物模型的方法有效,建模过程必须同时给予适量的抗生素类药物预防感染,CT作为早期股骨头坏死(necrosis of femoral head,NFH)影像学观察和评价手段有一定局限性。
朱嘉方以群金晶杨学东边芸王世锋
关键词：激素股骨头坏死动物模型
胰腺癌中GLI1、PTCH1 mRNA的表达及其与临床指标相关性分析被引量：3
2010年
目的 检测胰腺癌组织中GLI1、PTCH1 mRNA的表达情况,探讨其临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测35例胰腺癌组织及27例癌旁正常胰腺组织中GLI1、PTCH1 mRNA的表达,并分析它们与相关临床指标的关系.结果 胰腺癌组织GLI1 mRNA相对表达量为1.12～3.65,中位数为1.19;PTCH1 mRNA相对表达量为1.82～4.36,中位数为2.36.癌旁正常胰腺组织的GLI1 mRNA相对表达量为0.23～2.76,中位数为0.87;PTCH1 mRNA相对表达量为1.11～2.17,中位数为0.58.癌组织GLI1、PTCH1 mRNA的表达量均显著高于癌旁正常胰腺组织（P＜0.05）,且GLI1 mRNA与PTCH1 mRNA的表达水平呈正相关（r=0.532,P＜0.05）;GLI1 mRNA的表达水平与胰腺癌的分化程度及淋巴结转移相关（P＜0.05）.结论 GLI1、PFCH1基因参与胰腺癌的发生;GLI1的表达与胰腺癌的侵袭及淋巴结转移有关.
郭杰芳高军李兆申龚燕芳金晶满晓华吴红玉
关键词：胰腺肿瘤肿瘤侵袭肿瘤转移
携带幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建被引量：2
2005年
目的　构建含幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法　抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术从基因组DNA扩增ureB基因,克隆入pUCmT载体,检测ureB基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应进行鉴定。重组载体pIRES ureB转入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再次转入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES ureB转染COS 7细胞,SDS PAGE Western 印迹法检测pIRES ureB表达蛋白的免疫原性。结果　扩增出长约1700 bp的ureB基因,测序结果表明扩增出的ureB基因与基因库Hp ureB序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实ureB基因克隆入真核表达载体pIRES,并成功构建了Hp ureB基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,并且Western印迹法检测到特异性的蛋白条带。结论　构建了具有免疫反应性的Hp UreB减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其体内的免疫作用奠定了基础。
徐灿李兆申屠振兴杜奕奇龚燕芳金晶满晓华孙波杨哗许国铭
关键词：减毒鼠伤寒沙门菌幽门螺杆菌尿素酶B亚单位WESTERN印迹法COS-7细胞DNA扩增免疫反应性
DNA甲基转移酶3b和microRNA-29b在胰腺癌细胞株中的表达及其相关性
2012年
目的明确胰腺癌细胞株甲基转移酶（DNMT）3b和microRNA-29b（miR-29b）的表达，分析两者的相关性。方法应用实时定量PCR法检测人胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3bmRNA和miR-29b表达。采用Pearson直线相关分析法分析两者表达量的相关性。结果PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3bmRNA相对表达量分别为0．497±0．184、0．420±0．168、0．439±0．217、0．1224±0．111和0．731±0．387；miR-29b的相对表达量分别为0．745±0．596、0．464±0．430、0．797±1．000、1．836±1．623和0．2164±0．335，DNMT3bmRNA的表达量和miR-29b的表达量呈负相关关系（r=-0．922，P=0．026）。结论DNMT3b和miR-29b均参与了胰腺癌的发生发展，两者呈负相关关系。
王丽华高军杜奕奇吴红玉金晶李淑德李兆申
关键词：胰腺肿瘤DNA甲基转移酶3B微RNAS
稳定沉默GLI1基因的人胰腺癌细胞株的建立
2013年
目的建立稳定转染GLI1siRNA表达质粒的人胰腺癌细胞株,并鉴定其干扰效率。方法采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测5株人胰腺癌细胞中GLI1基因的表达,筛选出GLI1基因表达量最高的细胞作为目标转染细胞。脂质体转染法将构建好的3个干扰质粒pGCsi-U6-GLI1siRNA-1、pGCsi-U6-GLI1siRNA-2、pGCsi-U6-GLI1siRNA-3分别转染入目标细胞,G418抗性筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率。采用qRT-PCR法和蛋白质印迹法检测各组稳定转染细胞中GLI1mRNA及蛋白的表达水平,鉴定干扰效率。结果筛选出GLI1基因表达量最高的Panc-1细胞株作为目标转染细胞;3个干扰质粒均成功转染Panc-1细胞,G418筛选后获得稳定转染细胞Panc-1/GLI1siRNA-1、Panc-1/GLI1siRNA-2、Panc-1/GLI1siRNA-3,荧光显微镜下可见3个质粒的转染效率均在80%以上;qRT-PCR及蛋白质印迹检测证实Panc-1/GLI1siRNA-1、Panc-1/GLI1siRNA-2、Panc-1/GLI1siRNA-3细胞中GLI1mRNA和蛋白的表达水平均显著低于阴性对照质粒(Panc-1/siControl)转染细胞及空白对照细胞(P<0.05),其中Panc-1/GLI1siRNA-1细胞表达量最低。结论成功构建了稳定沉默GLI1基因表达的胰腺癌细胞株Panc-1/GLI1siRNA-1,为后续研究奠定了基础。
郭杰芳高军李兆申龚燕芳金晶吴红玉满晓华
关键词：胰腺肿瘤GLI1小分子干扰RNA
胰腺癌细胞株Hedgehog信号通路活化与K-ras基因突变的相关性研究被引量：1
2013年
目的探讨胰腺癌细胞株中Hedgehog信号通路活化与K-ras基因突变的相关性。方法采用实时定量PCR法检测人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988、CFPAC-1、PANCl、AsPC．1、Capanc-2、BxPC-3的K—ras基因突变状况及Hedgehog信号通路主要成员Glil、SmomRNA的相对表达量。结果PANCl、CFPAC-1、AsPC-1、PaTu8988细胞为12密码子突变型，SW1990细胞为13密码子突变型，BxPC．3、Capanc-2细胞为纯野生型。AsPC-1、CFPAC-1、PANCl、PaTu8988、SW1990、BxPC-3、Capanc-2的GlilmRNA相对表达量分别为7．84±8．92、1．82±3．45、1．00±0．00、0．07±0．10、0．88±I．48、0．52±0．98、0．15±0．19；SmomRNA的相对表达量分别为144．00±58．33、3．48±3．77、1．00±0．00、81．68±28．26、0．72±0．87、0．34±0．60、0．02±0．03。K—ras基因野生型胰腺癌细胞Glil、SmomRNA的表达水平均较突变型胰腺癌细胞株显著降低，其中野生型BxPC-3细胞Glil、SmomRNA表达量显著低于突变型AxPC-1细胞（P值均〈0．05）。结论胰腺癌细胞株中Hedgehog信号通路活化与K-ras基因突变具有相关性。
胡佳佳吴红玉金晶朱春平李兆申高军李淑德
关键词：K-RASHEDGEHOG信号通路
人NPTX2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
2010年
目的构建人神经元正五聚蛋白2（NPTX2）真核表达载体，转染人胰腺癌细胞PANC1，建立稳定转染的细胞系。方法通过双酶切的方法获得人NPTX2全长cDNA，利用NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点将其插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋），经酶切和测序验证后，用脂质体转染法转染PANC1细胞，通过G418筛选，建立稳定转染的PANC1细胞，用实时定量PCR方法筛选NPTX2mRNA高表达克隆。结果成功构建了pcDNA3．1（＋）-NPTX2真核表达载体，并建立了稳定转染的PANC1细胞，成功表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染PANC1细胞系的建立为进一步研究NPTX2基因在胰腺癌细胞的作用奠定了良好的基础。
张玲高军龚燕芳李兆申吴洪玉金晶满晓华
关键词：胰腺肿瘤转染细胞系
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