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肝癌缺失基因-1基因结构域调控人结肠癌HT29细胞增殖的实验研究: 2012年; 目的探讨肝癌缺失基因-1（DLC-1）基因主要结构域在调控人结肠癌HT29细胞增殖中的作用。方法分别构建DLC-1基因Rho蛋白GTP酶活化蛋白（RhoGAP）、SAM、START结构域敲除的亚克隆重组质粒，并转染至人结肠癌HT29细胞，另设野生型HT29细胞组（对照组）、pcDNA3．1-HT29细胞组（空载体组）和pcDNA3．1-HT29-DLC-1细胞组（全长转染组）作为对照。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、平板克隆实验检测细胞增殖的改变；流式细胞术检测细胞凋亡；pull-down方法分析RhoA蛋白活性。组间差异采用方差分析。结果转染成功48h后，与对照组及空载体组相比，全长转染组细胞增殖（F=146．36）及RhoA蛋白活性（F=698．08）明显抑制（P均〈0．05），细胞早期凋亡增加（F=294．08，P〈O．05）。敲除RhoGAP转染组细胞的增殖能力（F=0．99）、细胞凋亡（F=0．049）及RhoA蛋白活性（F=5．769）与对照组及空载体组相比差异均无统计学意义（P均〉0．05）；敲除SAM转染组细胞比DLC-1基因全长转染组更显著地抑制了细胞增殖（F=31．00，P〈0．05），使Rh0A蛋白活性下调（F=92．57，P〈0．05），凋亡增加（F=130．44，P〈0．05）；敲除START转染组相对于DLC-1基因全长转染组，细胞增殖能力增强（F=15．47，P〈0．05），凋亡细胞减少（F=110．23，P〈0．06），RhoA蛋白活性上调（F=199．39，P〈0．05）。结论DLC-1基因抑制HT29细胞增殖具有RhoGAP依赖性，SAM结构域可能是内源性RhoGAP活性的自身抑制区域，START结构域可能协助RhoGAP结构域而起作用。; 吴平平吴鹏龙启强李楠金治田晓强黄培林; 关键词：结肠肿瘤质粒密码子起动

EGFR/AKT信号转导通路在调控结肠癌LoVo细胞生物学行为中的作用研究被引量：1: 2009年; 目的:探讨EGFR/AKT(表皮生长因子受体/蛋白激酶B)信号转导通路在调控人结肠癌细胞株LoVo生物学行为中的作用机制方法:用EGFR抑制剂AG1478处理人结肠癌细胞LoVo;用免疫细胞化学法检测p-EGFR及p-AKT蛋白表达;用MTT法检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞的凋亡水平;用Transwell小室观察体外细胞迁移能力;用Transwell小室结合Matrigel胶检测肿瘤细胞侵袭能力结果:AG1478(20μmol/L)处理后,p-EGFR及p-AKT的表达水平明显降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。结论:EGFR与人结肠癌细胞LoVo的增殖、凋亡、迁移和侵袭性密切相关,并可能通过AKT信号转导通路调控人结肠癌的发展。; 徐佳佳郭英李楠商延芳夏海鸣金治吴鹏黄培林; 关键词：AG1478 细胞增殖细胞迁移细胞侵袭

RhoGAP结构域在DLC-1基因抑制人结肠癌HT29细胞增殖、侵袭中的作用被引量：3: 2010年; 目的:探讨Rho蛋白GTP酶活化蛋白(Rho GTPase activation protein,RhoGAP)结构域在肝癌缺失基因1(frequentlydeleted in liver,DLC-1)抑制人结肠癌HT29细胞的增殖、侵袭中的作用。方法:脂质体转染DLC-1基因及RhoGAP结构域缺失的ΔDLC-1亚克隆至大肠癌HT29细胞株;应用MTT、平板克隆实验检测细胞增殖的改变;Transwell实验观察细胞侵袭迁移能力的改变;流式细胞术检测细胞周期。结果:转染成功后,全长DLC-1基因转染组(pcDNA3.1-DLC1-HT29)与野生型及空载组相比,细胞增殖能力下降,侵袭能力减弱,细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,而ΔDLC-1亚克隆转染组(pcDNA3.1-ΔDLC1-HT29)对细胞增殖、侵袭及细胞周期均无明显影响。结论:DLC-1基因可能是通过其内在的RhoGAP结构域抑制人结肠癌细胞HT29的增殖和侵袭。; 吴鹏吴平平金治李楠杨琳黄培林; 关键词：肝癌缺失基因-1 转染

DLC-1基因及其介导的Rho/ROCK信号转导通路对结直肠癌HT-29细胞生物学行为的影响: [目的]　　构建重组质粒pcDNA3.1/DLC-1并转染至DLC-1基因阴性表达细胞以探讨DLC-1基因对细胞增殖、克隆形成、侵袭能力以及细胞凋亡水平的影响，同时研究DLC-1基因及其介导的Rho/ROCK信号转导...; 金治; 关键词：结直肠癌 HT-29细胞生物学行为; 文献传递

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制被引量：10: 2009年; 目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。; 吴平平苏昀金治吴鹏徐佳佳黄培林; 关键词：肝癌缺失基因-1 RHO A蛋白 CYCLIN P21基因

pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达被引量：1: 2010年; 目的构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒。方法用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有XbaⅠ和BamHⅠ两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达。结果重组质粒经XbaⅠ和BamHⅠ双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达。结论成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达。; 吴平平金治吴鹏金月玲黄培林; 关键词：DLC-1 重组质粒结直肠癌基因转染

5-Aza-CdR对HT29细胞DLC-1基因表达及生物学行为的影响被引量：2: 2009年; 目的研究去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌HT29细胞株生物学行为及肝癌缺失基因1(DLC-1)表达的影响。方法5-Aza-CdR处理HT29细胞72 h;RT-PCR检测DLC-1 mRNA的表达;MTT、平板克隆实验、Transwell小室实验分别检测药物处理前后的HT29细胞增殖、侵袭、迁移能力的变化。结果经5-Aza-CdR作用后,HT29细胞DLC-1恢复表达,细胞增殖活性降低,侵袭能力与迁移能力下降。结论5-Aza-CdR可抑制HT29细胞增殖、侵袭、迁移,可能与DLC-1基因恢复表达有关。; 吴平平金月玲商延芳金治吴鹏黄培林; 关键词：5-氮杂胞苷

ROCK通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞侵袭中的作用被引量：1: 2010年; 目的观察肝癌缺失基因1(DLC-1)对HT-29细胞侵袭能力的影响。方法用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-DLC-1转染HT-29细胞;应用Rho激酶(ROCK)特异性抑制剂Y27632处理HT-29细胞;Westernblot检测p-MLC蛋白表达;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果野生型HT-29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系;与对照组及空载组HT-29细胞相比,转染组和ROCK抑制剂组p-MLC蛋白表达均下调,细胞侵袭能力受到抑制(P<0.05)。结论转染DLC-1基因可能通过抑制ROCK活性,从而抑制HT-29细胞的侵袭能力。; 金治吴鹏梁舜之吴平平黄培林; 关键词：RHO激酶肌球蛋白轻链

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金治

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