陈京
- 作品数：103 被引量：167H指数：6
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- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- G蛋白偶联受体寡聚化检测技术——共振能量转移技术和蛋白质片段互补技术被引量：1
- 2012年
- 蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interactions,PPIs)在细胞内信号途径的分子机制中具有重要作用,文章叙述了活细胞中以非侵入性荧光和生物发光为基础检测特异性PPIs的方法如FRET、BRET、BiFC和BiLC,上述技术广泛应用于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)寡聚化的研究,单独或联合应用这些新技术是研究两个蛋白或多个蛋白PPIs的最佳方法,文章描述了上述生物技术的最新进展及其优缺点,着重阐述在PPIs方面的应用。
- 程葆华白波亚白柳陈京
- 关键词：G蛋白偶联受体
- miRNA在肿瘤中的研究
- miRNA是一类分布广泛的内源性非编码小分子RNA,在转录或翻译水平上调节相关基因表达,参与细胞发育、增殖、分化、凋亡等一系列生物学过程.近年来发现,miRNA具有类似癌基因或抑癌基因的作用,在肿瘤的发生发展中起着重要的...
- 刘明慧陈京白波
- 关键词：恶性肿瘤发病机制基因表达
- 食欲素和强啡肽在抑郁症病理机制中的研究进展被引量：6
- 2013年
- 抑郁症是一种常见病的多发病，患者多表现为严重而持续的沮丧、绝望、快感缺乏、易怒、注意力难以集中及失眠等症状。除了自杀引起死亡外，抑郁症患者更容易患冠状动脉疾病和糖尿病，抑郁症还会使多种慢性疾病的预后症状更加复杂化，对患者的社会功能及生存条件存在持续性的伤害。据调查我国有2600万患者，发病率为3％～5％。抑郁症以其慢性和不断复发的特性给全球造成巨大的经济负担。
- 张如敏王春梅潘衍有白波陈京
- 关键词：抑郁症病理机制强啡肽食欲素慢性疾病经济负担
- pRluc-hKOR-pcDNA3.1真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达被引量：5
- 2009年
- 目的:构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor,KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法:以质粒pcD-NA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney293,HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果:扩增出了1条约1.2kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论:构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。
- 李雅林白波陈京刘有旺刘海青路海
- 关键词：HEK293细胞
- 食欲素2型受体点突变体表达载体的构建
- 2017年
- 目的构建带有黄色荧光蛋白突变体Venus标签的食欲素2型受体(Orexin type 2 receptor,OX2R)点突变的真核表达载体,拟用于后续明确突变位点在OX2R介导的信号通路中的作用。方法先根据OX2R的基因序列设计带有点突变及酶切位点(Hind Ⅲ和Bam HI)的特异性引物,然后利用聚合酶链式反应(PCR)技术,以Human OX2R为模板,构建OX2R的突变体。用Hind Ⅲ和Bam HI对产物及质粒pVenus-N1进行双酶切,然后回收,连接,转化,获得重组的突变体质粒。并对重组质粒进行酶切与测序鉴定。最后将突变质粒转染HEK293T细胞,利用超高分分辨率显微镜观察突变质粒的表达及定位。结果 PCR扩增到预期的目的基因片段,酶切与测序结果显示OX2R的突变载体构建成功。超高分分辨率显微镜观察到突变质粒与野生质粒均可在HEK293T细胞膜上表达。结论成功构建了OX2R点突变的表达载体,为进一步研究OX2R的关键位点及针对OX2R新药的开发奠定了基础。
- 刘明慧王春梅陈京
- 关键词：点突变
- 生物发光共振能量转移技术及其应用被引量：10
- 2009年
- 生物发光共振能量转移(BRET)技术是近10年来出现的一种新的检测蛋白质-蛋白质相互作用的技术.它的最大优势是能在活细胞中实时进行检测,因此能够进行相互作用动力学的研究.本文系统阐述了BRET的原理和方法,综述了BRET技术的最新进展,以及该技术在G蛋白偶联受体(GPCRs)信号转导及药物发现中的应用.
- 李雅林白波陈京
- 关键词：蛋白质-蛋白质相互作用G蛋白偶联受体药物发现
- 吗啡对大鼠尾壳核神经元阿片受体基因表达的影响被引量：5
- 2005年
- 目的探讨较长时间给予吗啡对体外培养大鼠尾壳核神经元的μ、δ型阿片受体mRNA表达的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果吗啡可使μ、δ型阿片受体的mRNA水平显著降低(P<0.01),吗啡作用12h、24h和48h可使μ型阿片受体mRNA由0h时的94.8%分别降至50%、42.7%和67.2%;而对δ型阿片受体,则只有在24h和48h有明显的抑制作用(P<0.01),由0h时的95.8%分别降至59.5%和84.5%;吗啡在10-8mol/L时即可引起μ型阿片受体的mRNA水平显著降低,且该抑制效应在10-8mol/L^10-5mol/L浓度范围内呈明显的剂量依赖性,但对δ型阿片受体则在10-6mol/L时才有效。结论吗啡较长时间作用于原代培养大鼠尾壳核神经元,可明显抑制μ、δ型阿片受体的基因表达。
- 刘海青刘玉红陈京白波
- 关键词：吗啡Μ型阿片受体阿片受体核神经元基因表达
- 共振能量转移(RET)技术的发展及应用
- 2012年
- 蛋白质间的相互作用是生命活动的基本形式之一,这种作用对细胞内信号转导,基因的转录激活等有重要意义。传统的检测方法存在损伤细胞结构、不能实时动态观察蛋白相互作用的缺点。RET技术的发展,解决了上述问题,为我们更好的研究蛋白质相互作用提供了强有力的工具。本文从FRET和BRET的基本原理、新型RET技术的发展等方面进行介绍,并将FRET和BRET进行比较,以便更好的选择研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法。
- 张宁程葆华陈京白波
- 关键词：RETFRET荧光蛋白
- 孤啡肽受体信号转导及功能研究进展被引量：2
- 2017年
- 孤啡肽受体是阿片受体的家族成员,属于G蛋白偶联受体中A类视紫红质样受体,其天然的内源性配体被称为痛敏肽。孤啡肽受体分布广泛,对神经系统疾病有着重要的作用。本文就孤啡肽配体-受体系统生物学作用做简单综述,从而为孤啡肽受体参与相关疾病的发病机制提供理论依据。
- 王正文姜云璐李胜白波陈京
- 关键词：孤啡肽受体
- 脾脏巨噬细胞对凋亡细胞诱导免疫反应的影响被引量：2
- 2016年
- 为研究小鼠脾脏巨噬细胞(Mφ)对凋亡细胞诱导免疫应答的影响,我们用氯磷酸二钠脂质体(clodronate-liposomes,CL)清除小鼠脾脏Mφ,于不同时间点对三组(nave、PBSL、CL)小鼠选择性回输e450标记的DO11.10CD4^+T细胞、凋亡细胞及其相关抗原,然后用流式细胞仪检测小鼠血液与脾脏中免疫细胞的清除率、DO11.10CD4^+T细胞(即KJ126+T细胞)的增殖及Foxp3+Treg细胞的增殖。结果显示:(1)注射CL 1d后,外周血单核细胞的清除率约93%,脾脏中F4/80+Mφ、单核细胞与树突细胞的清除率分别为99%、90%、54%;(2)PBSL组与CL组中,KJ126+T细胞占CD4+T细胞的比率分别为1.32%、0.56%,差异有统计学意义(P<0.0001);Foxp3+T细胞占CD4^+T细胞的比率分别为0.69%、0.89%,差异有统计学意义(P=0.0004)。表明CL可以有效清除血液与脾脏中的免疫细胞;清除脾脏Mφ可以抑制KJ126+T细胞的增殖和促进Foxp3+Treg细胞的增殖。提示脾脏Mφ参与了提呈凋亡细胞相关抗原的过程,参与调节凋亡细胞诱导的抗原特异性T细胞的免疫应答能力及凋亡细胞诱导的免疫耐受。说明脾脏Mφ在凋亡细胞诱导的免疫反应中起着重要的作用。
- 杨春青王春梅薛庆节潘衍有陈京白波
- 关键词：脾脏巨噬细胞凋亡细胞免疫应答免疫耐受
