陈佩
- 作品数：7 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：卫生部艾滋病防治应用性研究项目中国综合性艾滋病研究项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 全基因组SHIV-KB9克隆的构建及其在人、猴外周血单核细胞中的复制(英文)被引量：7
- 2004年
- 将分别携带SHIV-KB9 (SIV/HIV-1 KB9) 基因组的3′端和5′端的两个半长克隆,体外连接成SHIV-KB9全基因组克隆。含有全长基因的质粒培养时易发生同源重组和缺失,采用JM109作为宿主菌以及30℃、低转速的培养条件,可保持质粒的稳定性。通过PCR , RT-PCR 和猴免疫缺陷病毒(SIV) gag p27 核心抗原滴度检测表明:感染性克隆SHIV-KB9可有效在人、恒河猴及食蟹猴的外周血单核细胞中复制。
- 吴颖运洪坤学陈佩陈启明耿运琪邵一鸣
- 关键词：克隆基因组质粒恒河猴食蟹猴外周血单核细胞
- 重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化被引量：3
- 2009年
- 目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。
- 孙静傅晶晶霍烛陈佩胡云章刘勇郝彦玲
- 关键词：HIV-1包涵体纯化
- HIV-1 GP120主要抗原性片段的制备及其在HIV诊断中的应用被引量：7
- 2006年
- 目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后的蛋白用狭缝电转技术转印硝酸纤维素膜,利用HIV参考品血清检测其灵敏度和特异性。结果目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%左右。纯化后其纯度高于95%,HIV参考品血清检测显示出良好的灵敏度和特异性,检测8份阳性临床标本无一漏检,而7份阴性临床标本无交叉反应。结论已研制出具有良好灵敏度和特异性的HIV-1GP120主要抗原性片段。为开发HIV抗体检测试剂创造了条件。
- 郝彦玲张梦华黄云坚袁国亮陈佩朱旭辉傅晶晶刘勇邵一鸣
- 关键词：HIV-1GP120
- HIV整合酶在大肠杆菌中的表达纯化及其应用被引量：1
- 2006年
- 采用pThioHisB系统表达HIV-1整合酶P31蛋白,目的蛋白的表达量达到菌体蛋白的30%左右。通过包涵体洗涤和离子交换层析,蛋白纯度高于95%。用纯化后的P31抗原制备成条带免疫试纸条,检测HIV参考品血清时表现了很好的灵敏度和特异性。本研究为进一步开发HIV-1血清学诊断试剂盒奠定了基础。
- 刘连兴郝彦玲袁国亮许斌陈佩傅晶晶刘勇邵一鸣
- 关键词：HIV-1整合酶纯化
- 体内电穿孔在质粒介导的基因转移及DNA免疫中的应用被引量：3
- 2010年
- 目的 研究体内电穿孔技术对于质粒DNA介导的体内基因表达以及HIV-1 Env DNA疫苗免疫效果的影响.方法 将携带荧光素酶Luciferase基因的表达质粒p1.0-Luc和携带HIV-1 CN54 env基因的DNA疫苗质粒p1.0-gp1455m通过单独肌肉注射或肌肉注射后加电穿孔两种不同方法 注射小鼠.用IVIS（R）活体成像系统实时检测Luciferase报告基因在体内的表达情况.用ELISA检测HIV-1 Env特异的抗体反应,用IFN-γ ELISPOT检测HIV-1 Env特异的T细胞免疫反应.结果 体内电穿孔技术可以显著提高Luciferase在小鼠体内的表达水平,幅度达35倍.HIV-1 Env DNA疫苗免疫结果 显示,8μg质粒剂量电穿孔途径诱导的体液和细胞免疫应答强于40μg质粒剂量单纯肌肉注射组;体内电穿孔途径免疫2次与单纯肌肉注射途径免疫3次诱导的体液和细胞免疫应答水平相当.结论 体内电穿孔技术可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗的免疫应答.
- 张舟徐智勇陈佩周芳张宪省刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达免疫应答
- 质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响被引量：3
- 2010年
- 目的研究质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响。方法构建携带HIV-1 Env gp145基因的DNA疫苗质粒p1.0-Env,分别采用肌肉注射和基因枪方法免疫BALB/c小鼠。其中,基因枪免疫采用不同剂量或不同次数。ELISA法检测小鼠体内Env特异性抗体水平。结果基因枪免疫小鼠诱导的抗体水平显著高于肌肉注射免疫。在0.1～2.25μg剂量范围内,基因枪免疫小鼠体内的Env特异性抗体水平随疫苗剂量的增加不断提高。加大免疫剂量至5μg和10μg,不能提高体液免疫反应水平。基因枪免疫1次和2次所诱导的特异性抗体水平很弱,免疫3次可诱导高水平的抗体应答。结论基因枪免疫能有效提高DNA疫苗所诱导的抗体应答,小鼠的最适免疫剂量约为2.25μg,2.25μg免疫3次可诱导较强的体液免疫反应。
- 徐智勇张舟陈佩周芳邵一鸣刘勇王立良
- 关键词：疫苗DNA免疫次数
- HIV-1 Gag蛋白在大肠杆菌表达系统中诱导和纯化条件的优化被引量：4
- 2008年
- 为探讨诱导温度对于HIV-1Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30oC和37oC诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同。将30oC诱导的目的蛋白分别用2mol/L和8mol/L尿素溶解后做层析分离,比较两者的分离效果。结果发现,与37oC相比,30oC诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素,并且更容易复性。与8mol/L尿素溶解相比,30oC诱导的包涵体用2mol/L尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果。这提示低温诱导的Gag包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白,而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象。从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考。
- 傅晶晶孙静陈佩霍烛范文玲郝彦玲刘勇
- 关键词：HIV-1GAG包涵体变性剂
