陈冲
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- Bex2对人脑胶质瘤干细胞增殖、生长和凋亡影响的体外实验研究
- 2008年
- 目的观察Bex2真核表达载体对脑胶质瘤干细胞增殖、生长和凋亡的影响,为胶质瘤治疗提供理论基础。方法采用免疫磁珠系统分离、Nestin免疫组化鉴定人脑胶质瘤干细胞;将RT-PCR法获得的Bex2与质粒pcDNA3.1(+)连接,脂质体法转染胶质瘤干细胞,于转染18h、36h、48h、72h、96h后,采用Western Blot检测Bex2表达,MTT法及Hoechst染色试剂盒检测生长抑制率和凋亡情况。结果分离、培养出人脑胶质瘤干细胞,并成功构建Bex2的真核表达载体。转染后18hBex2即有表达,48h达到高峰,后渐下降;转染36h、48h、72h、96h时,细胞生长抑制率和凋亡率明显高于空载体组和空白对照组(P<0.05);转染72h时,细胞生长抑制率和凋亡率最高(P<0.05)。结论Bex2能够抑制脑胶质瘤干细胞的增殖和生长,诱导胶质瘤干细胞凋亡。
- 于如同刘明峰石琼陈冲饶海承
- 关键词：真核表达载体胶质瘤干细胞
- MDR1 shRNA对人脑胶质瘤干细胞多药耐药性实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡RNA表达质粒,并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的作用。方法培养脑胶质瘤干细胞;根据MDR1的DNA序列设计shRNA,用Siport xp-1脂质体法转染胶质瘤干细胞。分别采用定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达情况;使用活细胞计数试剂盒(CCK-8)对转染后细胞进行药物敏感性试验,评价shRNA对多药耐药性的逆转作用。结果成功构建MDR1 shRNA表达质粒,转染组MDR1 mRNA表达水平有所下降(P<0.05),转染5d组下降最明显;RT-PCR结果显示MDR1 mRNA水平降低,第3、5、7d抑制率分别为78.46%±14.17%,82.02%±11.87%,79.5%±13.27%。Western blot结果显示:shRNA转染组P-糖蛋白(P-gp)的表达降低,第3、5、7d抑制率分别为58.1%±6.5%,39.5%±5.2%,45.8%±8.6%;而药敏实验显示:阿霉素、长春新碱对转染MDR1 shRNA的胶质瘤干细胞的半数抑制浓度(IC50)均有不同程度降低,且出现凋亡峰(P<0.05)。结论MDR1短发卡RNA可在转录后水平对多药耐药进行调节,下调MDR1基因表达,提高药物敏感性,诱导细胞凋亡。
- 于如同陈冲石琼刘明峰饶海承
- 关键词：胶质瘤干细胞SHRNA基因治疗
- 靶向Survivin和FoxM1B的shRNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤于细胞生长和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤干细胞；依据靶基因序列设计siRNA，建立可克隆入pSilencer^TM 3.1-H1 neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统，鉴定正确后扩增质粒；利用脂质体转染法（Lipofectamin^TM 2000）转染脑胶质瘤于细胞，分别采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot在mRNA和蛋白水平检测目的基因的表达，并分别采用噻唑蓝（MTT）法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤于细胞的生长抑制率及凋亡率。结果成功构建Survivin、FoxM1BshRNA表达质粒；RT—PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77．41±10．99、78.10±8．84及72．45±9.59、70.50±9．43、67．94±13．57；Westernblot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72、45±9．59、70．50±9．43、67．94±13．57及76．55±18．01、73．57±15．41、72．05±11．46。而细胞生长抑制率和凋亡率增加，双干扰组较单干扰组较为明显。结论成功构建Survivin，FoxM1BshRNA表达质粒。shRNA转染脑胶质瘤于细胞后，目的基因表达明显下降，从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖，促进凋亡。而双干扰效果更为显著。
- 于如同饶海承石琼陈冲刘明峰
- 关键词：SURVIVIN质粒短发卡RNA
