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陈建山
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第二军医大学长征医院
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相关领域:
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倪武
第二军医大学长征医院
缪晓辉
第二军医大学长征医院
徐文胜
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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与松弛环状DNA对核苷(酸)类药物耐药变异的比较
2012年
目的了解肝细胞内HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)核苷(酸)类药物耐药变异的情况,并比较其与松弛环状DNA(rcDNA)耐药变异的异同。方法取40例慢性HBV感染肝移植患者的部分肝组织,采用十二烷基硫酸钠一蛋白质沉淀法结合DNA提取试剂盒分离提取肝内的HBV cccDNA和rcDNA。将抽提产物用不降解质粒的ATP依赖DNA酶酶切纯化后,用跨HBV基因组双链缺口并涵盖常见核苷类耐药位点(rt169~rt250)的引物行单轮PCR或套式PCR选择性扩增cccDNA。另用不跨双缺口的引物PCR扩增肝组织内的HBV rcDNA和患者肝移植术前的血清HBVrcDNA。用直接测序法对上述扩增产物进行基因测序并分析核苷(酸)类药物耐药位点的检出情况。结果40例患者中,31例肝组织内检测到HBVcccDNA,35例肝组织检测到HBVrcDNA,21例肝移植术前血清中检测到HBVrcDNA。测序结果显示,2例肝组织内cccl)NA、rcDNA和血清rcDNA均检测到rtM204I变异;有2例患者肝内cccDNA、rcDNA分别存在rtM204I、rtQ215H变异,而血清rcDNA未检测到相应变异;3例血清中分别存在rtM204V、rtM204V、rtV173L+rtL180M+rtM204V变异,而肝内cccDNA和rcDNA未检测到相应变异。结论慢性HBV感染者肝细胞内cccDNA可出现核苷(酸)类药物耐药变异,且肝组织内的cccDNA、rcDNA耐药变异株与血清中的rcDNA耐药变异株不完全一致。
陈建山
徐文胜
赵克开
倪武
缪晓辉
关键词:
肝炎病毒
乙型
核苷酸类
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