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陈时锦: 作品数：13 被引量：24H指数：3; 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金广西科技基础条件平台建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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广西巴马小型猪α-1,3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定: 目的：通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因，分析其序列的机构特点并构建真核表达载体，为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础。方法：根据NCBI上发布的猪α-1,3半乳糖转移酶基因cDNA序列（AF221...; 郭晓萍陈时锦兰干球蒋钦杨郭亚芬; 关键词：巴马小型猪真核表达载体 CDNA序列; 文献传递

广西巴马小型猪α-1，3半乳糖转移酶基因过表达载体和RNAi载体的构建及其沉默效率检测: α-1,3半乳糖转移酶/(α-1,3-galactosyltransferase, a-1,3GT/)基因又被称为GGTA1基因,其编码的α-1,3半乳糖转移酶负责催化细胞表面Galα1-3Gal-β1-4GlcNAc-...; 陈时锦; 关键词：巴马小型猪基因沉默; 文献传递

miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响被引量：2: 2021年; 本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制miR-486-5p的表达,利用荧光定量PCR法检测miR-486-5p过表达和抑制效率,同时检测过表达和抑制miR-486-5p后IGF-1、INSR、IRS1、PI3K、PI3KR1、PDK1、AKT1、PTEN、Fox O1、m TOR、4EBP1基因的mRNA变化。荧光定量PCR结果显示24 h过表达倍数和抑制效率分别为2.8倍和35%,48 h过表达倍数和抑制效率分别为1.4倍和15%。过表达miR-486后,24 h和48 h时INSR、PDK1、PTEN、AKT1、FoxO1、4EBP1基因均显著下调;抑制miR-486后,24 h时4EBP1显著上调,48 h时IGF-1显著上调,4EBP1显著下调。本研究表明过表达miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达受到抑制,抑制miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达上升,这可能是肥胖患者血清miR-486-5p升高损害胰岛素信号引起葡萄糖摄取能力降低,从而导致胰岛素抵抗发生的原因。; 郭晓萍陈时锦张名媛蒋钦杨兰干球; 关键词：C2C12细胞

广西巴马小型猪小RNA启动子U6和7SK的克隆及功能验证被引量：2: 2012年; 为了探讨巴马小型猪启动子U6和7SK的功能以及为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础,文章克隆并分析了siRNA启动子U6和7SK,并分别连接pMD18-shEGFP载体,分别与PEGFP-N1共转猪肾细胞,进行RNAi实验。以pMD18-hU6-shEGFP为阳性对照,无启动子的pMD18-shEGFP载体为阴性对照,单独转染PEGFP-N1为第一组空白对照,以ddH2O替代质粒为第二组空白对照组,验证这两种启动子在猪细胞中的功能。结果表明:广西巴马小型猪RNA聚合酶III型siRNA启动子U6和7SK的序列全长分别为553 bp和437bp。成功构建了pMD18-pU6-shEGFP和pMD18-p7SK-shEGFP干扰载体,转染猪源PK-15细胞,证明U6以及7SK两个启动子具有较高的siRNA表达活性,可以用于α-1,3半乳糖转移酶等猪源基因的沉默实验。; 陈时锦范晶蒋钦杨兰干球郭晓萍郭亚芬; 关键词：广西巴马小型猪启动子

广西巴马小型猪MyoG基因克隆及外显子3多态性分析被引量：4: 2012年; 为了解RT-PCR扩增广西巴马小型猪肌细胞生成素(MyoG)cDNA序列,并分析与其他物种间的聚类关系,试验采用PCR-SSCP技术分析广西巴马小型猪、长白猪、杜洛克猪、大约克猪MyoG基因外显子3多态性,根据GenBank中已发表的猪MyoG基因序列设计PCR引物,以广西巴马小型猪肌肉组织总RNA为模板进行RT-PCR,所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序;从4个猪种的耳组织中分别提取30个个体的基因组DNA,采用PCR的方法扩增出外显子3并进行SSCP分析。结果表明:克隆得到广西巴马小型猪MyoG基因编码区长675 bp,与四川野猪、人、奶牛、小鼠同源序列相似性分别为99.7%、93.8%、91.7%、90.5%,且不同物种间保守性较强;与四川野猪相比,克隆得到的广西巴马小型猪MyoG cDNA序列在第233位点及第642位点上发生基因突变;广西巴马小型猪MyoG基因的基因型只有AA型,而长白猪、杜洛克猪、大约克猪MyoG基因的基因型只有AB型,各群体内无多态性。; 张名媛韦珏郭亚芬蒋钦杨陈时锦兰干球蒋和生; 关键词：广西巴马小型猪

广西巴马小型猪U6和7SK小RNA启动子的克隆及功能验证: 目的：探讨巴马小型猪U6和7sk的沉默效应，为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础。方法：本研究克隆并分析了巴马小型猪siRNA启动子U6和7SK，并利用PMD18-shEGFP载体对PEGFP-N1在猪肾细胞...; 陈时锦范晶蒋钦杨兰干球郭晓萍郭亚芬; 关键词：巴马小型猪基因启动子沉默效应; 文献传递

广西巴马小型猪psp-intron-appa载体的构建及在细胞上的鉴定: 引言随着畜牧业的迅速发展,我国畜禽养殖业特别是集约化畜禽养殖业的粪污已成为我国环境污染的主要来源之一。饲料中70%以上的总磷为植酸磷,而猪鸡等单胃动物不能分泌植酸酶,所以不能利用饲料中的植酸磷,大量的磷从粪中排出,严重影...; 张名媛陈时锦陈宝剑蒋钦杨郭亚芬兰干球韦英明蒋和生; 文献传递

广西草龟GH基因全序列克隆及测序分析被引量：1: 2012年; 【目的】了解广西草龟生长激素(GH)基因全序列结构特点及其与其他物种间的关系,为进一步研究GH基因的结构、功能、遗传变异规律及其与生产性能的关系提供科学依据。【方法】根据GenBank上已公布的黄喉拟水龟GH基因序列设计合成9对特异性引物,以广西草龟基因组DNA为模板进行PCR扩增,所获得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序后,用Vector NTI Advance10软件将各扩增序列拼接,获得草龟生长激素基因全序列,并用DNASTAR软件MegAlign程序中的Alignment Report和NCBI的BLAST对草龟GH基因全序列进行同源性比对分析及构建基于GH基因编码序列的物种间亲缘进化树。【结果】广西草龟GH基因全长8538bp,与黄喉拟水龟GH基因全长8517bp相比,二者的同源性高达98%,其中有118个碱基发生突变,插入37个碱基,14个位点发生碱基缺失;与鸡、鸭、鹌鹑、鸵鸟、红树林蛇的同源性分别为88%、83%、87%、86%和84%。【结论】GH基因编码序列具有较高的保守性。; 郭晓萍杨秀荣陈时锦郭亚芬兰干球蒋钦杨蒋和生; 关键词：生长激素基因克隆

广西巴马小型猪α-1,3-半乳糖转移酶基因RNAi载体构建与检测被引量：5: 2015年; α-1,3-半乳糖转移酶基因(α-1,3 GT)在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用,本研究旨在构建α-1,3-半乳糖转移酶基因的干扰载体,在m RNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列,设计合成3对特异性单链si RNA序列以及一对阴性序列,构建GGTA1 RNA干扰载体分别命名为p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2、p LLU2G-sh GGTA1-3和p LLU2G-sh GGTA1-NC。将构建好的载体分别转染转染PK15细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测GGTA1 m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示本研究成功构建了3个重组RNAi表达载体,与转染p LLU2G-NC和空白组相比,p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2和p LLU2G-sh GGTA1-3转染组的GGTA1 m RNA和蛋白表达量均明显下降,对m RNA表达的抑制效率分别为85.02%、86.05%和83.85%。本研究成功获得有效抑制广西巴马小型猪GGTA1基因表达的RNAi载体,为下一步生产沉默GGTA1基因广西巴马小型猪奠定基础。; 郭晓萍陈时锦张笠蒋钦杨兰干球郭亚芬; 关键词：巴马小型猪 RNAI

广西巴马小型猪α-1，3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2012年; 目的通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因，分析其序列的结构特点并构建真核表达载体。为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础。方法根据NCBI上发布的猪α-1，3半乳糖转移酶基因cDNA序列（AF221508），设计合成一对含有HindⅢ和BamHI酶切位点的特异性引物，以广西巴马小型猪肝脏组织总RNA为模板进行RT-PCR，所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序；将目的基因与pEGFP-N1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-GGTA1，通过测序，双酶切鉴定。结果所克隆的广西巴马小型猪GGTA1基因存在缺失第五外显子（81．116）的GGTA1序列。序列全长1080bp和未缺失第五外显子的GGTA1序列，全序列为1116bp。构建两个表达载体（缺失第五外显子pEGFP．GGTA1-1、未缺失第五外显子pEGFP-GGTA1-2）。结论广西巴马小型猪GGTA1基因存在第五外显子缺失的现象，通过对GGTA1基因克隆序列进行分析以及构建两个真核表达载体，为后面在猪源PK-15细胞中对其进行表达鉴定以及巴马小型猪α-1,3半乳糖转移酶基因的沉默实验奠定基础。; 郭晓萍陈时锦兰干球蒋钦杨郭亚芬; 关键词：广西巴马小型猪真核表达载体

陈时锦

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