陈雷
- 作品数：15 被引量：68H指数：6
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大肠杆菌F1菌毛表达条件的初探被引量：7
- 2000年
- F1菌毛在体外表达受到许多因素的影响。为了对 F1菌毛的进一步研究 ,本试验以只产F1菌毛的菌株 C60 0为对象 ,从培养基、温度、p H、通氧等条件进行了摸索 ,实验结果表明 :培养条件的限制极为显著 ,在 MD- 1肉汤 ( p H6.8～ 7.2 )中、37℃、静止培养 48h可使 F1菌毛获得较好表达 ;通入氧气将有利于
- 陈雷成大荣徐建生李俊宝董国雄
- 关键词：禽大肠杆菌致病菌体外表达
- 鸡大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研制被引量：6
- 2002年
- 将菌毛化的大肠杆菌 C60 0 (fim+ )经 0 .3 %甲醛灭活后作为免疫原 ,经淋巴细胞杂交瘤技术 ,用间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)筛选获得 1 F4 -1和 2 C3 2株抗 F1菌毛 a或 b因子抗原单抗和 1株抗 F1 c 因子抗原单抗 ,它们均为 Ig G1。免疫印迹试验结果表明 :3株单抗均能同禽大肠杆菌 1型菌毛反应 ,识别分子质量为 1 7ku左右的菌毛蛋白。同时对沙门氏菌及猪源大肠杆菌进行检测 ,结果均无交叉反应性 ,说明禽病原性大肠杆菌 F1菌毛与沙门氏菌
- 陈雷董国雄李俊宝徐建生成大荣
- 关键词：大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体间接酶联免疫吸附试验
- 志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备被引量：10
- 2003年
- 将表达志贺样毒素II型变异体A亚单位重组蛋白的菌株ppSLT -IIeA在含氨苄青霉素的 2×YTA培养基中培养 ,至对数生长期时加入IPTG诱导 ,诱导的重组菌超声波裂解后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达重组蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白 ,测定纯化蛋白的浓度 ,免疫BALB/c小鼠 ,细胞融合后经ELISA检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞 ,命名为A2 _D3 ,制备的单抗腹水ELISA效价为 2 4log2 ,免疫印迹结果表明此单抗仅与重组蛋白反应 ,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测 13株水肿病菌株 。
- 姜连连陈雷严振龙徐建生董国雄
- 关键词：单抗仔猪水肿病
- 马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核表达产物单抗的制备
- 2001年
- 用大肠杆菌 BL2 1表达了马立克氏病病毒 ( MDV)强毒 GA株的囊膜糖蛋白 B( g B)基因 ,通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS- PAGE)分离表达蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验 ( ELISA)和间接免疫荧光试验( IFA) ,得到 1株 GA株阳性的单克隆抗体杂交瘤细胞株 7C8。该单抗腹水的 ELISA效价为 1∶ 2 1 2 ,IFA效价为 1∶ 80 0 ,与 MDV不同致病型毒株 CVI988、GA、RB1 B、MD1 1、6 48A株感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)均呈IFA阳性。 1∶ 1 0 0稀释时与 GA感染的 CEF在斑点酶联免疫吸附试验 ( dot- EL ISA)中呈阳性。
- 韩凌霞丁家波陈雷崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒GB基因间接免疫荧光试验斑点酶联免疫吸附试验单抗
- 马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核细胞表达产物单克隆抗体的制备被引量：1
- 2002年
- 用大肠杆菌 BL2 1表达了马立克氏病病毒 (MDV)强毒 GA株的囊膜糖蛋白 B(g B)基因 ,通过 SDS- PAGE电泳分离表达蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过 EL ISA和间接免疫荧光试验 (IFA) ,得到 1株阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株 7C8。该单抗腹水的 EL ISA效价为 1∶ 2 1 2 ,IFA效价为 1∶ 80 0 ,与 MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、6 48A株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)均呈 IFA阳性。1∶ 10 0稀释时与 GA株感染的 CEF在斑点酶联免疫吸附试验 (dot- EL ISA)中呈阳性。
- 韩凌霞丁家波陈雷崔治中
- 关键词：原核细胞表达单克隆抗体马立克氏病病毒GB基因
- 抗鸡大肠杆菌F11菌毛单克隆抗体的研制
- 2002年
- 将充分菌毛化的大肠杆菌C1976_79(pap +)经 4‰甲醛灭活作为免疫原免疫BALB/c小鼠 ,经淋巴细胞杂交瘤技术 ,用间接ELISA筛选获得FA1、FB11两株抗FB11菌毛单抗 ,其ELISA效价分别为 18log2 和 15log2 试管凝集价分别为 8log2 和 6log2 。免疫印迹实验表明 :两株单抗均能与鸡大肠杆菌F11菌毛反应 ,识别分子量为 18kD左右的菌毛蛋白。同时对猪病原性大肠杆菌进行检测 ,结果均无交叉反应。这表明F11菌毛是不同于K88、K99、987P、F4 1及F18等粘附素的一种大肠杆菌菌毛。
- 陈雷董国雄李俊宝徐建生成大荣
- 关键词：鸡致病性大肠杆菌单克隆抗体间接ELISA大肠杆菌病
- MDV囊膜糖蛋白Ⅰ原核表达产物单克隆抗体的制备
- 用大肠杆菌BL21表达了马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648A株的囊膜糖蛋白I(gI)完整基因,通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离相应的蛋白条带,切下并磨碎后作为免疫原免疫小鼠,制备单克隆抗体。共得...
- 韩凌霞陈雷丁家波刘岳龙秦爱建
- 关键词：MDVGI基因IFA
- 志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性被引量：3
- 2004年
- 重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射三种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重组表达产物的毒性和免疫原性;在Vero细胞上检测重组菌表达产物对Vero细胞的半数致死量(CD50)及免疫鼠血清对SLT＿Ⅱe毒素的中和实验三方面来比较pGEX＿Ansp、pGEX＿Ade和pGEX＿Amu的生物学特性,结果表明这三种基因工程菌表达产物经腹腔注射后可以诱导机体产生一定程度的保护性抗体。在Vero细胞上,pGEX＿Ansp的表达产物可在一定程度上使Vero细胞产生细胞病变,pGEX＿Amu的表达产物可在一定程度上抑制Vero细胞单层形成时间,而pGEX＿Ade对Vero细胞的生长无影响。
- 徐建生成大荣陈雷董国雄李俊宝
- 关键词：毒性免疫原性
- SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定被引量：1
- 2002年
- PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。
- 严振龙陈雷姜连连成大荣徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：原核系统克隆仔猪水肿瘤
- 类志贺毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因缺失株的构建及表达
- 2004年
- 采用PCR方法分别对类志贺氏菌毒素A亚单位基因第 2 98～ 80 5序列、818～ 12 0 1序列进行了扩增 ,使其第 80 6～ 817序列的碱基 (编码 16 7～ 170位氨基酸 )缺失 ,并将两片段连接后克隆至质粒载体pGEX 6P 1中 ,获得了含有重组质粒 pGEX Ade的重组大肠埃希氏菌 ;经SDS PAGE以及使用特异性抗SLT ⅡeA单克隆抗体的Western blotting ,证明该重组大肠埃希氏菌在IPTG诱导条件下可表达SLT ⅡeA。
- 徐建生陈雷成大荣董国雄李俊宝
- 关键词：水肿病基因缺失
