鞠会艳
- 作品数：16 被引量：55H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：解放军总医院医药卫生科研基金国家自然科学基金国家林业局野生动植物保护管理项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒构建与包装被引量：7
- 2005年
- 为构建表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒,用MluⅠ和SphⅠ双酶切真核表达载体pVAXLPN,获得CDV N基因表达盒,将CDV N基因表达盒克隆入预先用SspⅠ酶切后的线性化质粒pVAXΔE3中,构建含CDV N基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPN。用NruⅠ和SalⅠ双酶切转移质粒pVAXΔE3LPN,回收E3区部分缺失的含CDV N基因表达盒的目的片段,定向克隆入同样酶切处理含CAV-2全基因组的质粒载体ppoly2-CAV-2中,构建E3区部分缺失的包含CDV N基因表达盒的重组质粒pCAV-2-CDVLPN。重组质粒pCAV-2-CDVLPN经AscⅠ酶切获得线性化基因组CAV-2-CDVLPN。此基因组与NruⅠ和SalⅠ分别酶切CAV-2 SY基因组获得的片段混合,利用脂质体介导共转染MDCK细胞,重复转染3次后,出现典型CAV-2病变,经电镜观察和酶切鉴定,证明表达犬瘟热核蛋白的重组犬2型腺病毒包装成功。
- 鞠会艳李彦舫夏咸柱高玉伟杨松涛
- 关键词：犬瘟热病毒犬腺病毒重组病毒
- 表达虎源流感病毒HA蛋白重组犬2型腺病毒的构建与鉴定
- 将虎源H5N1亚型流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2002(简称HAB/01)的HA基因克隆与PVAX1载体中,然后将含有HA基因的表达盒(CMV+HA+PolyA)克隆入pVAX⊿E3的E3缺失处,获得含有...
- 高玉伟夏咸柱扈荣良谢之景杨松涛鞠会艳黄耕
- 关键词：HPAIVHA基因
- 文献传递
- 虎源流感病毒HA基因的系统发生分析及其在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2006年
- 通过对虎源流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)的HA基因进行克隆与序列测定,证明该基因全长为1731bp,读码框由1707个碱基组成,编码568个氨基酸。对HA基因的进化分析表明,该基因与H5亚型流感病毒的HA基因同源性最高,其HA裂解位点由6个碱性氨基酸插入序列(RRRKKR)组成,符合高致病性禽流感病毒的分子特征。将HA基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ,构建重组质粒pFastBacHA;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒BacmidHA;将BacmidHA转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。经Westernblotting检测,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。用感染重组病毒的sf9细胞免疫小鼠,2次免疫后2周可诱导小鼠产生1∶8～1∶16的血凝抑制抗体,表明虎源流感病毒的HA基因在重组杆状病毒系统中得到了正确表达。
- 高玉伟夏咸柱侯小强鞠会艳王承宇王铁成黄耕邹啸环
- 关键词：流感病毒HA基因重组杆状病毒
- 犬瘟热病毒核蛋白基因重组载体的构建与鉴定
- 为构建含犬瘟热病毒核蛋白基因的重组载体质粒,用Mlu I和Sph I双酶切真核表达载体pVAXLPN获得CDV N基因表达盒,将CDV N基因表达盒克隆入预先用Ssp I酶切后的线性化质粒pVAX△E3中,构建含CDV ...
- 鞠会艳夏咸柱高玉伟杨松涛李彦舫
- 关键词：犬瘟热病毒犬腺病毒重组质粒
- 文献传递
- 猫白介素-18基因的分子克隆、序列分析及其表达研究
- 根据GenBank中报道的猫白介素-18基因(IL-18)序列,对用ConA刺激的实验猫外周血单核细胞(PBMCf)进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR产物纯化后克隆入pMD18-T中得到重组质粒pTIL-18,进...
- 乔军夏咸柱杨松涛鞠会艳黄耕
- 关键词：克隆大肠杆菌表达
- 文献传递
- 表达猫瘟热病毒VP2蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究被引量：4
- 2005年
- 为构建能表达FPV VP2蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2)载体。首先用PCR方法从FPV GT-2株细胞培 养物中扩增出了VP2蛋白基因,将其克隆到真核表达质粒pVAX1中构建了含有FPV vp2基因的表达盒(CMV- VP2-PolyA),将该表达盒酶切后定向克隆到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAX△E3中,构建出pVAX △E3VP2。用Sal I+Nru I双酶切pVAX△E3VP2,回收含有目的基因表达盒部分,将其定向克隆入含有CAV-2 全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,构建了重组质粒pCAV-2-FPV-VP2。Cla I+Asc I酶切pCAV-2-FPV- VP2释放出重组基因组,以此转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-VP2。该重组病毒能使MDCK细胞产生 腺病毒样细胞病变。Western blot检测证实,该重组病毒能表达具有免疫学活性的VP2蛋白。该重组病毒可以有 效地诱导免疫猫产生抗FPV和CAV-2抗体。本实验表明该重组病毒有可能成为一个FPV的疫苗株。
- 杨松涛夏咸柱乔军常爽谢之景鞠会艳邹啸环
- 关键词：猫瘟热病毒猫泛白细胞减少症病毒VP2重组腺病毒免疫原性
- 表达虎源流感病毒HA蛋白重组犬2型腺病毒的构建与鉴定
- 将虎源H5N1亚型流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2002(简称HAB/01)的HA基因克隆与PVAX1载体中,然后将含有HA基因的表达盒(CMV+HA+PolyA)克隆入pVAX△E3的E3缺失处,获得含有...
- 高玉伟夏咸柱扈荣良谢之景杨松涛鞠会艳黄耕
- 关键词：流感病毒腺病毒重组疫苗动物免疫学
- 文献传递
- 犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达被引量：1
- 2009年
- 核蛋白基因(N)位于犬瘟热病毒基因组的108-1679位置处,是保守性较强的免疫原性蛋白,因此选择N基因作为目的基因,利用酶切、连接等方法构建了含犬瘟热病毒核蛋白基因的穿梭质粒pVAX△E3LPN。以含CAV-2 SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建了重组质粒pCAV-2-CDVLPN,利用脂质体介导法转染MDCK细胞,转染三次后,细胞出现了典型的腺病毒样病变。电镜负染、切片观察,酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明表达犬瘟热核蛋白基因的重组犬2型腺病毒构建成功,表达的核蛋白分子量为58kDa。
- 鞠会艳夏咸柱高玉伟杨松涛邹啸环黄耕李彦舫
- 关键词：犬瘟热病毒核蛋白犬腺病毒重组病毒
- 猫白介素-18基因的分子克隆、序列分析及其表达研究
- 用猫白介素18基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后猫外周血单核细胞(PBMCC)总RNA进行了RT—PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18一T中进行核苷酸序列测定。结果该基因全长579 bp, 编码192个...
- 乔军夏咸柱杨松涛鞠会艳黄耕
- 关键词：克隆大肠杆菌表达
- 文献传递
- 表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2010年
- 利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变。电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72ku。在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性。
- 鞠会艳高玉伟杨松涛夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒
