高月
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- TSA对甲状腺鳞癌细胞株Akt、p21、mTOR基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株Akt、mTOR和p21基因表达的影响,探讨TSA抗甲状腺癌的作用机制。方法体外培养SW579细胞,用CCK-8法检测TSA对SW579的生长抑制作用,计算半数抑制浓度。实验分为对照组、TSA组、Wortmannin组、Wortmannin+TSA组、Rapamycin组,用RT-PCR方法检测SW579细胞Akt、p21及mTOR的mRNA表达,分析各处理组Akt、p21及mTOR基因表达变化。结果 CCK-8结果显示,TSA可明显抑制SW579的增殖,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度约为147nmol/L。RT-PCR检测结果表明,与对照组相比,TSA组、Wortmannin组和Wortmannin+TSA组Akt、mTOR mRNA表达水平明显降低,TSA组p21表达显著上调,Wortmannin组p21表达明显降低,各组mTOR表达均明显降低。结论 TSA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与TSA降低SW579细胞Akt、mTOR基因的表达,进而再上调p21的表达有关。
- 赵颂申静琳孙小涵闫纪亮高月王翠瑶肖建英
- 关键词：曲古抑菌素A甲状腺鳞癌AKTP21MTOR
- 白藜芦醇对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长及CDC25B蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的通过观察白藜芦醇对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长及CDC25B蛋白(cell division cycle 25B)表达的影响,探讨白藜芦醇的抗癌作用机制。方法取对数生长期SW579细胞培养12h后,按浓度梯度25、50、100、200、400μmol.L-1加入白藜芦醇(实验组),对照组加入等体积含对应浓度DMSO的培养基,应用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化,同时应用Western Blot方法检测CDC25B蛋白表达情况。结果不同浓度(25、50、100、200、400μmol.L-1)白藜芦醇对SW579细胞生长均有抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05),并且改变细胞周期分布,实验组(100μmol.L-1白藜芦醇)S期[(28.55±0.58)%]比例明显高于对照组[(19.49±1.27)%](P<0.05),G2/M期[(8.79±0.74)%]比例显著低于对照组[(15.88±0.81)%](P<0.01),细胞分裂被阻滞。白藜芦醇作用24h后,与对照组(0.421±0.004)相比,实验组(100μmol.L-1白藜芦醇)(0.062±0.012)CDC25B蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论白藜芦醇能够显著抑制SW579细胞株的增殖,使其处于S期阻滞,其抑制作用可能与CDC25B蛋白表达下降有关。
- 高月李玉凤
- 关键词：白藜芦醇甲状腺鳞癌细胞增殖
- PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用
- 2011年
- 目的探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用。方法体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性。结果与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异(P>0.05);Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降(P<0.01),PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调(P<0.01),而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调(P<0.01),MPF活性明显下降(P<0.01)。结论甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响。
- 闫纪亮肖建英赵颂高月王翠瑶张秀梅刘超
- 关键词：甲状腺鳞癌PKBCDC25BMPF
- 双丁酰环腺苷酸对甲状腺鳞癌SW579细胞株增殖的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)对甲状腺鳞癌SW579细胞株增殖的影响。方法:将dbcAMP0.5、1.0、2.0mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24h后,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测SW579细胞增殖的变化;经dbcAMP0.5mmol/L作用24h后,ELISA法检测细胞成熟促进因子(MPF)的活性,WesternBlot方法检测cdc2-Tyr15磷酸化水平,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果:与对照组相比,经不同浓度dbcAMP处理的SW579细胞株的增殖均受抑制。在0.5mmol/LdbcAMP作用下24h,SW579细胞MPF活性为(22.87±2.57)ng/L,远小于对照组的(115.50±7.53)ng/L,差异有统计学意义(t=3.324,P<0.05)。实验组cdc2-pTyr15磷酸化水平(0.258±0.026)高于对照组的(0.142±0.009),差异有统计学意义(t=7.424,P<0.05)。与对照组相比,应用0.5mmol/LdbcAMP处理细胞之后,G0/G1期无显著变化,S期细胞数量减少,G2/M显著增多。结论:dbcAMP能够显著降低甲状腺鳞癌SW579细胞株的活力,使细胞增殖受到明显抑制。
- 高月肖建英赵颂张秀梅刘超王翠瑶刘洋
- 关键词：环AMP甲状腺肿瘤DBCAMP
- 激活蛋白激酶A信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用
- 2012年
- 目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞株的生长抑制作用及机制。方法利用PKA特异性激活剂双丁酰环化腺苷酸(dbcAMP)0.5、1.0和2.0 mmol/L作用于甲状腺鳞癌SW579细胞24、48和72 h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测SW579细胞的生长活性;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h后PKA、成熟促进因子(message processing fac-tor,MPF)的活性;免疫印迹法(Western blotting法)检测经dbcAMP 1.0 mmol/L作用48 h CDC25B-pS323(celldivision cycle 25B-pS323)磷酸化水平。结果 MTT法结果显示,在dbcAMP作用下,SW579细胞活力呈逐渐下降趋势,随dbcAMP剂量的增加和作用时间的延长,其作用越明显。ELISA法显示,dbcAMP使PKA活性升高而使MPF活性下降。未加dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(32.5±2.49)nmol/L和(115.5±7.53)ng/L;dbcAMP组PKA、MPF活性分别为(436.33±12.85)nmol/L和(22.87±2.57)ng/L,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting显示,dbcAMP能够使CDC25B-pS323磷酸化水平上调。未加dbcAMP组和dbcAMP组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用dbcAMP激活PKA信号通路,可以抑制甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖,其抑制作用可能与PKA/CDC25B/MPF信号通路的调控有关。
- 高月肖建英赵颂张秀梅刘超王翠瑶贾昂
- 关键词：甲状腺鳞癌蛋白激酶A成熟促进因子
- pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达
- 2011年
- 目的构建人钠碘转运体(hNIS)基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况。方法采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS。分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒(实验组)和pEGFP-C3(对照组)瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平。结果序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列(序列号:NM-000453)相似性达99.90%。转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组。结论成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达。
- 徐华肖建英刘超张秀梅高月王翠瑶
- 关键词：胃肿瘤基因克隆转染
