高正祥
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：攀枝花市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导的脾酪氨酸激酶对血管平滑肌细胞表型转换的影响
- 2010年
- 目的构建脾酪氨酸激酶(Syk)重组腺病毒并感染血管平滑肌细胞(VSMC),观察Syk对VSMC表型转换的影响。方法运用pDC315-GFP腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因Syk腺病毒重组质粒pDC315-GFP-Syk,经过包装、扩增、纯化后获得Syk重组腺病毒;测定病毒滴度并感染体外培养的大鼠VSMC,饥饿处理24 h,用Real-time PCR法和Western blot法对Syk、平滑肌22α蛋白(SM22α)及平滑肌α肌动蛋白(-αSM-actin)表达活性进行检测,观察Syk对平滑肌细胞表型转换的影响。结果成功构建携带Syk基因的重组腺病毒,纯化后滴度为1011pfu/mL,腺病毒感染VSMC后5 d,与空病毒组和对照组相比,Syk mRNA(741638.70±35213.53)和蛋白表达水平(2.14±0.71)增高(P<0.01);-αSM-actin(0.80±0.04)和SM22αmRNA表达水平(1.00±0.01)下降(P<0.05),同时,二者的蛋白表达水平也降低(0.61±0.10和0.18±0.06,P<0.01)。结论在VSMC中,Syk通过对其表型转换进行调控,进而影响平滑肌细胞的增殖和迁移。
- 高正祥曹丽丽罗勤余莉刘瀚旻
- 关键词：脾酪氨酸激酶血管平滑肌细胞腺病毒表型
- 紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞表型和细胞骨架的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨不同浓度的紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其对细胞骨架和表型转化的影响。方法采用MTT、[3H]-胸腺嘧啶掺入法检测不同药物浓度紫杉醇对血小板源性生长因子BB（PDGF—BB）诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响；采用蛋白质免疫印迹法（Westernblot）对平滑肌仅肌动蛋白及平滑肌22α蛋白（SM22v）表达活性进行检测；利用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的改变。结果与PDGF组比较，紫杉醇药物干预组细胞增殖受到明显抑制，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测抑制率分别为40．0％，30．0％，18．0％（P〈0．01），[^3H]-胸腺嘧啶掺人法测得的细胞增殖抑制率分别为45．4％，35．4％，21．6％（P〈0．01），平滑肌α肌动蛋白和SM22α表达均升高，细胞骨架F-肌动蛋白的荧光强度明显下降。结论在PDGF—BB存在的情况下，紫杉醇可剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞的增殖，通过作用于微丝细胞骨架促进血管平滑肌细胞由合成型向收缩型转化，进而影响血管平滑肌细胞的增殖。
- 王小双范志宇王涛谢亮余莉高正祥刘瀚旻
- 关键词：紫杉醇细胞表型
- 脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用
- 2010年
- 目的 观察在血小板源性生长因子（PDGF-BB）诱导增殖的肺血管平滑肌细胞（VSMC）中,脾酪氨酸激酶（syk）的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组（不作任何处理）、对照组（PDGF-BB培养）和药物干预组（PDGF-BB和piceatannol培养）.[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白（α-SM-actin）及平滑肌22α蛋白（SM22α）表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高（2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P〈0.01）;细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA（1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P〈0.05）和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin（0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P〈0.01）和SM22α（0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P〈0.01）的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低（263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P〈0.01）.piceatannol可明显抑制这些生物学效应（药物干预组）.结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.
- 高正祥曹丽丽罗勤余莉王涛王小双康琳敏刘瀚旻
- 关键词：蛋白酪氨酸激酶类表型
- 内源性一氧化碳对肺动脉平滑肌细胞凋亡基因表达谱的影响
- 2010年
- 目的运用芯片技术研究内源性一氧化碳(CO)刺激下血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达谱的变化。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠肺动脉平滑肌细胞进行离体培养,用血小板源性生长因子BB(platelet-de-rived growth factor,PDGF-BB,20ng/mL)和高氯血红素(hemin,20μg/mL)进行刺激后2h,用Affymetrix表达基因谱芯片检测其基因表达谱变化。结果 PDGF刺激后,Map2k3(P38)信号通路中相关差异表达基因Kras、Nras、丝分裂原蛋白激酶的激酶Map2k3、细胞周期素CyclinD1、CyclinH、CyclinL1等的表达显著上调,而周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达显著下调。Hemin刺激后,P53依赖途径中的一些基因如:Gadd45α、P21、Trp53inp1表达显著上调。结论内源性CO所引发的血管平滑肌细胞的凋亡可能与P53调控途径密切相关。
- 孙晓洁余莉王晓琴刘忠强王娟高正祥刘瀚旻
- 关键词：基因芯片血管平滑肌细胞
- 脾酪氨酸激酶对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)在血小板源性生长因子BB(platelet-derivedgrowth factor-BB,PDGF-BB)诱导大鼠肺血管平滑肌细胞(PVSMCs)增殖中的作用。方法体外培养雄性Sprague-Dawley大鼠PVSMCs,经鉴定后选用3～5代细胞,经PDGF-BB诱导细胞增殖后,用3种不同剂量Syk选择性抑制剂piceatannol干预,以MTT比色法测定细胞增殖,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期,荧光定量PCR、Western blot分别检测细胞Syk mRNA和蛋白表达水平。结果 PDGF-BB刺激后,Syk蛋白表达水平明显增高,细胞显著增殖;经Syk抑制剂piceatannol干预后,随着Syk mRNA和蛋白表达水平的降低,细胞的增殖受到明显抑制,其抑制作用与剂量大小具有相关性。结论在PDGF-BB诱导下的大鼠肺血管平滑肌细胞增殖中,Syk可能起促进作用。
- 罗勤高正祥曹丽丽余莉王涛刘瀚旻
- 关键词：脾酪氨酸激酶血管平滑肌细胞细胞增殖血小板源性生长因子
- 磷脂酰肌醇3激酶通路对大鼠肺动脉平滑肌细胞分化状态和增殖活性的调控作用被引量：4
- 2013年
- 目的 研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分化状态和增殖活性的调控作用.方法 体外培养雄性SD大鼠PASMC并传至第3代用于实验,将细胞分为8组：空白对照组,血小板源性生长因子（PDGF）诱导组,二甲基亚砜（DMSO）溶剂对照组,LY294002干预组,小分子干扰RNA（siRNA）干预组,Control-siRNA对照组,空病毒对照组,重组腺病毒诱导组.用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测重组腺病毒及siRNA转染的PASMC中PI3K α调节亚基（PIK3CA）的表达情况,用Western blot检测平滑肌α肌动蛋白（α-SM actin）的表达水平,用RT-qPCR检测α-SM actin mRNA水平,用四甲基偶氮唑盐（MMT）比色实验及噻唑盐细胞计数-8（CCK-8）试剂盒检测PASMC的增殖活性.结果 重组腺病毒诱导组PASMC中PIK3CA mRNA水平高于空白对照组（P＜0.05）,siRNA干预组中PIK3CA mRNA水平低于空白对照组（P＜0.05）.与空白对照组相比,PDGF诱导组α-SM actin的mRNA水平和蛋白表达水平明显降低（P均＜0.05）,增殖活性增高（P＜0.05）,LY294002可阻断PDGF-BB诱导的α-SM actin的基因转录、蛋白表达及PASMC增殖（P＜0.05）,予PIK3 CA-siRNA干预也可抑制PDGF-BB诱导的α-SM actin mRNA水平、蛋白表达水平及细胞增殖活性（P均＜0.05）；重组腺病毒诱导组α-SM actin的mRNA水平和蛋白表达水平与空白对照组相比也明显降低（P均＜0.05）,增殖活性增高（P＜0.05）.结论 在肺血管重构过程中,PI3K通路对大鼠PASMC去分化和细胞增殖具有正向调控作用.
- 范志宇李春雨秦超毅谢亮王小双高正祥强巴措珍王涛余莉刘瀚旻
- 关键词：磷脂酰肌醇3激酶肺动脉平滑肌细胞去分化增殖
- Syk与血管平滑肌细胞的增殖和迁移
- 2010年
- 脾酪氨酸激（spleen tyrosine kinase，syk）在较长时间里被认为是造血细胞特有的信号分子，在淋巴细胞的成熟和免疫细胞的激活中起重要作用。近年来发现Syk在多种非造血细胞也有表达。研究表明，Syk对血管平滑肌细胞的迁移和增殖有促进作用，主要通过MAPK、P13K、Src和Rho／Ras信号通路起作用。该文就syk在血管平滑肌细胞迁移和增殖过程中的作用机制作一综述。
- 高正祥刘瀚旻
- 关键词：脾酪氨酸激酶血管平滑肌细胞信号传导
- 药物洗脱支架防治再狭窄的研究进展被引量：1
- 2007年
- 目前,经皮腔内冠状动脉成形术和冠状动脉内支架置入术已广泛应用于临床,成为冠心病常规介入治疗的方法之一,但术后再狭窄率仍然居高不下;药物洗脱支架的出现则改变了这种局面,随着近两年来药物洗脱支架防治再狭窄临床实验结果的陆续公布,使药物洗脱支架成为目前防治再狭窄的最佳办法。现根据医学研究的最新结果,从药物洗脱支架的作用机制、临床疗效和安全性等方面作一综述。
- 高正祥罗兴林
- 关键词：药物洗脱支架雷帕霉素紫杉醇冠状动脉再狭窄
