目的初步探讨实验性牙周炎大鼠外周血及炎症牙周组织中辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的表达。方法采用丝线结扎并牙龈卟啉单胞菌菌液涂抹法建立SD大鼠牙周炎模型,采集外周血、龈沟液以及颌骨样本。体视显微镜及苏木精-伊红染色法观察牙周组织病理改变,流式细胞术检测外周血Th17细胞与Treg细胞的比例,酶联免疫吸附法检测外周血及龈沟液中白细胞介素17(IL-17)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测牙周组织中RORγt、Foxp3 m RNA的表达。应用SPSS 22.0软件独立样本t检验及方差分析对数据进行统计学分析。结果实验大鼠牙周组织病理改变符合牙周炎病理改变特征,牙槽骨吸收明显。实验组外周血Th17(F=30.88,P=0.00)、Treg细胞(F=147.03,P=0.00)比例以及Th17/Treg比率较对照组均显著上升(F=219.53,P=0.00);实验组牙周组织中RORγt(F=35.61,P=0.04)和Foxp3m RNA(F=216.60,P=0.01)表达较对照组表达显著上升;RORγt/Foxp3 m RNA比率较对照组升高,但差异无统计学意义(F=0.63,P=0.44);实验组外周血血清中IL-10浓度较对照组显著上升(F=6.41,P=0.02),而IL-17(F=0.08,P=0.78)、TGF-β(F=3.48,P=0.06)浓度与对照组差异无统计学意义;实验组龈沟液中IL-17(F=9.03,P=0.01)较对照组显著上升;IL-10(F=5.85,P=0.08)及TGF-β含量(F=9.28,P=0.06)含量较对照组升高,但差异无统计学意义。结论实验性牙周炎大鼠外周血及牙周炎症组织中Th17与Treg表达均显著上调,可能与牙周炎症组织病理改变以及相关全身系统性疾病存在相关性。
目的探讨白细胞介素22(IL-22)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLF)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的影响;并进一步研究IL-22是否与牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)具有协同刺激作用。方法酶消化法结合组织块法原代培养h PDLF,免疫细胞化学染色法鉴定其来源;取第3~5代细胞给予不同浓度(0、5、10、25、50、100 ng/m L)IL-22刺激,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞毒性实验;采用5、10、25 ng/m L IL-22作用于h PDLF 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL、OPG m RNA的表达;随后选择最佳刺激浓度10 ng/m LIL-22,与1μg/m L Pg-LPS分别或协同刺激h PDLF 72 h,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RANKL、OPG m RNA和蛋白水平的表达。采用单因素方差分析对数据进行统计分析。结果 50、100 ng/m L IL-22刺激h PDLF后,细胞活力明显下降(F24 h=15.17,F48 h=76.37,F72 h=24.409,P<0.05);5、10、25 ng/m L IL-22均可上调h PDLF RANKL m RNA表达(F=32.88,P<0.05),但是对OPG m RNA表达无明显影响(F=0.719,P=0.555);10 ng/m L组和25 ng/m L组上调RANKL m RNA表达较5 ng/m L组显著(P<0.05);1μg/m L Pg-LPS亦可显著上调h PDLF RANKL m RNA和蛋白水平的表达;而10 ng/m L IL-22与1μg/m L Pg-LPS协同作用下RANKL m RNA和蛋白表达可进一步显著上调(Fm RNA=36.67,F蛋白=41.24,P<0.05),但是对OPG的表达无明显影响(Fm RNA=0.652,P=0.593;F蛋白=1.271,P=0.313)。结论 IL-22可通过影响h PDLF表达RANKL/OPG参与牙周炎骨破坏,并且与Pg-LPS具有协同作用。
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人外周血CD14+单核细胞表达Th17细胞分化相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-23和TGF-β的影响。方法:采用脂多糖提取试剂盒提取牙龈卟啉单胞菌标准株ATCC33277和高毒力株W83脂多糖;免疫磁珠法分选健康志愿者外周血CD14+单核细胞。以大肠杆菌脂多糖为对照,1μg/ml牙龈卟啉单胞菌脂多糖处理单核细胞,分别培养12、24、36h后收集细胞和上清液,实时定量PCR及ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-βm R NA和蛋白水平的表达。结果:各型脂多糖均可显著上调单核细胞四种细胞因子m RNA及蛋白水平的表达;上调作用具有时间效应,在12h达到高峰。并且三种菌株脂多糖对不同细胞因子表达的影响存在一定差异。结论:牙龈卟啉单胞菌脂多糖可显著上调CD14+单核细胞表达IL-1β,IL-6,IL-23,TGF-β,可能与牙周炎症环境中Th 17细胞的分化相关。
