黄丽
- 作品数：16 被引量：48H指数：5
- 供职机构：南京医科大学基础医学院微生物学系与免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金南京医科大学校科研和教改项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型被引量：9
- 2004年
- 目的 研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法 将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和 或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果 ①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和 或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论 HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV
- 卢春曾怡黄丽钱超唐桂霞
- 关键词：IFN-Γ基因启动子人类疱疹病毒8型基因重组质粒
- SARS病毒S蛋白编码基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2
- 2004年
- 目的 克隆传染性非典型肺炎 (SARS)病毒纤突蛋白S氨基端编码序列 ,并将其置于大肠杆菌作融合表达 ,为快速检测SARS病人IgM提供抗原。方法 从GenBank获得SARS病毒BJ0 1株纤突蛋白S基因序列 ,人工合成其氨基端 5 0 1bp双链DNA序列 ,在 5’和 3’端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点。常规法将其克隆到 pBluescriptⅡSK(+)质粒中进行核酸序列测定 ,进一步将其克隆进原核表达载体pGEX 6 p 1中 ,构建含S蛋白基因的重组原核表达质粒。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌 (E .coli)BL2 1感受态细胞 ,以异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达融合蛋白。结果 核酸序列测定与分析的结果表明 ,克隆的 5 0 1bp基因序列与基因数据库中所登记的BJ0 1毒株序列呈现 10 0 %同源性。IPTG诱导后的菌体 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) ,显示有一个大小为 4 2ku的融合表达蛋白产生。结论 S蛋白氨基端 5 0 1bp编码基因在E .coli中获得正确表达 ,为进一步研究提供了实验室资料。
- 贾雪梅钱超卢春姚堃曾怡黄丽姜平
- 关键词：SARS病毒大肠杆菌克隆传染性非典型肺炎原核表达
- 胰腺癌正反义K-ras基因片段的分离和定向克隆
- 2003年
- 目的 分离及克隆胰腺癌基因组中 K- ras基因片段 ,构建重组正反义 K- ras基因逆转录病毒载体并探讨其临床意义。方法 设计两对 PCR引物 ,分别在上下游引物中引进 Bam H1和 Eco R1位点 ,以胰腺癌细胞基因组 DNA为模板扩增 K- ras基因外显子 4 B及侧翼序列 ,并采用重组 DNA技术将目的基因分别定向插入逆转录病毒载体 L ZRSp BMN- Z中。重组克隆通过菌液 PCR和重组质粒限制性内切酶酶切鉴定。结果 正反义 K- ras基因外显子 4 B及侧翼序列成功地克隆入 L ZRSp BMN- Z中。结论 L ZRSp BMN- Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一。应用 PCR方法获取反义 K- ras基因方便可行 ,可用于重组反义 K- ras基因逆转录病毒载体的构建。
- 蒋奎荣卢春苗毅戴存才徐泽宽钱祝银曾怡黄丽刘训良
- 关键词：胰腺癌基因克隆逆转录病毒载体基因治疗
- SARS病毒M蛋白编码基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：4
- 2004年
- 目的:克隆SARS冠状病毒膜蛋白M胞外区编码序列,并将其置于大肠杆菌作融合表达。方法:从GenBank获得SARS病毒BJ01株膜蛋白M编码基因序列,人工合成其氨基端129-base-pair(bp)双向单链DNA序列,在5′和3′端分别引入BamH I、Xho I酶切位点,退火后形成双链DNA,常规法将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含M蛋白编码基因的重组原核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的129 bp基因序列与基因数据库中所登记的BJ01毒株序列呈现100％同源性。IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个大小为30.1 ku的融合表达蛋白产生。结论:M蛋白氨基端胞外区129 bp编码基因在E.coli中获得正确表达。
- 钱超姚堃卢春贾雪梅曾怡黄丽姜平
- 关键词：SARS冠状病毒M蛋白原核表达
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达被引量：1
- 2004年
- 目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩增KSHV ORF73C,PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEX-6p-1中,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:经核酸序列测定及分析,分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99％同源性。经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达。结论:初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达。
- 黄丽卢春曾怡
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒原核表达
- HHV-8 ORF50启动子区序列分离、鉴定及在293细胞中启动活性分析被引量：3
- 2003年
- 目的:分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50基因上游启动子区序列,评价其在293细胞中启动活性。方法:以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8 ORF50启动子区序列,克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因上游多克隆位点,分别构建含正反双向ORF50启动子重组报告质粒,并分别转染293细胞,作Lu-ciferase活性检测,计算相对Luciferase活性单位(RLU)。结果:①克隆的HHV-8 ORF50启动子区序列长655碱基(bp),含多个潜在推测AP1、SP1和ERE等转录因子结合序列;②ORF50启动子与正常pGL-3基本载体相比,其RLU增加了26.3倍;③TPA刺激后ORF50启动子与刺激前相比启动活性增加了4.1倍。结论:HHV-8 ORF50启动子区序列在293细胞中具有较强的启动活性;TPA可以作为一有效的阳性对照刺激物用于进一步鉴定ORF50启动子特性。
- 卢春黄丽曾怡徐亚林
- 关键词：人类疱疹病毒8型启动子活性
- 胰腺癌反义K-ras癌基因片段的分离和克隆被引量：1
- 2003年
- 目的:分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体,并探讨其意义。方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHⅠ和EcoRⅠ位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1及侧翼序列,并采用重组DNA技术将目的基因插入逆转录病毒载体LZRSpBMN-Z中,并经菌液PCR和限制性内切酸酶切鉴定。结果:K-ras基因外显子1及侧翼序列已成功地克隆入LZRSpBMN-Z中。结论:LZRSpBMN-Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一。应用PCR方法获取反义K-ras目的基因外显子1方便可行,可用于重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体的构建。
- 蒋奎荣刘训良卢春苗毅戴存才徐泽宽曾怡黄丽
- 关键词：胰腺肿瘤反义克隆
- 姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO鄄8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响。方法:选用人卵巢癌细胞株HO鄄8910进行体外培养,以1.25-20μg/ml姜黄素分别处理HO鄄8910细胞6鄄24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2及Bax的表达。结果:姜黄素对HO鄄8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO鄄8910细胞积聚在S和G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO鄄8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas鄄L、Bcl鄄2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。
- 王清王淑玉贾雪梅黄丽曾怡唐桂霞
- 关键词：姜黄素卵巢癌凋亡
- 含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测被引量：8
- 2003年
- 目的 构建含HIV 1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法 使用HindⅢ将HIV 1Tat1 0 1 蛋白编码基因从pEV质粒中切出 ,插入到表达质粒LZRSpBMN Z中 ,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS Tat1 0 1 。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS Tat1 0 1 转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞phoenix(ФNX)中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化 (IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ФNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清 ,并分别感染 2 93细胞 ,Westernblot检测Tat在 2 93中表达。与此同时 ,收集感染 2 93细胞培养上清 ,加入到HL3T1细胞 (HeLa HIV 1 LTR CAT报告基因 )中 ,共培养 72h后收集细胞 ,提取蛋白作CAT活性检测。结果 ①含Tat1 0 1 基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后 ,Tat在临时转染ФNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平 ;②临时转染病毒感染 2 93细胞 ,Tat在感染细胞中得到了表达 ,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV 1的LTR启动子 ,使得其下游的CAT基因得到表达。结论 重组LZRS Tat1 0 1 反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白 ,且表达蛋白具有转录激活功能。
- 卢春黄丽曾怡
- 关键词：基因重组TAT蛋白转录激活
- 姜黄素对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响被引量：6
- 2005年
- 目的 探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株 HO 8910 裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法 1×107 个HO 8910细胞接种于裸鼠皮下,待瘤长成约为 10 mm×10 mm×10 mm时,随机分成对照组和治疗组,对照组给予RPMI 1640 4 ml/kg、治疗组分别给予50、100 mg/kg姜黄素腹腔注射治疗5d后,计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率;瘤组织标本分别进行 HE染色病理检查,电镜和流式细胞仪检测。结果 姜黄素对移植瘤的生长有明显抑制作用,低剂量组和高剂量组的抑瘤率分别达53 .08%和70 .47%,病理、电镜和流式细胞仪检测瘤组织标本均提示经姜黄素治疗后的肿瘤细胞发生了凋亡。结论 姜黄素对人卵巢癌移植瘤的生长具有抑制作用。
- 王清贾雪梅王淑玉唐桂霞黄丽曾怡
- 关键词：姜黄素卵巢癌裸鼠移植瘤
