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余波: 作品数：11 被引量：9H指数：2; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所更多>>; 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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人类组织因子途径抑制因子的研究进展被引量：3: 2006年; 人类组织因子途径抑制因子属于库尼(Kunitz)型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白,分为组织因子途径抑制因子-1(tissuefactorpathwayinhibitor-1,TFPI-1)和组织因子途径抑制因子-2(tissuefactorpathwayinhibitor-2,TFPI-2)。TFPI-1以抗凝血作用为主,而TFPI-2是广谱丝氨酸蛋白酶抑制剂。二者在结构上有部分同源性,均由3个重复的Kunitz结构域组成。但二者在基因序列、组织来源、分布和作用机理上的很大差异,导致二者在多种生理和病理过程中发挥的作用也大不相同。就有关研究进展做一综述。; 余波冷希岗; 关键词：凝血

人类组织因子途径抑制因子突变基因mTFPI、包括该基因的重组载体及其宿主细胞: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因mTFPI、包括该基因的重组载体及其宿主细胞，实验证明，与野生型TFPI基因在毕赤酵母中表达的重组蛋白量相比，本发明的TFPI突变基因mTFPI在毕赤酵母中所表达的重组蛋白...; 冷希岗罗师平宋丽萍刘兰霞余波; 文献传递

人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：2: 2007年; 目的利用毕赤酵母高效表达人组织因子途径抑制因子(TFPI)。方法利用基因定点突变技术对人TFPIcDNA特定序列进行定点突变(同义突变)。将获得的突变体及野生型cDNA分别插入表达载体pPic9中,转化酵母宿主菌GS115和KM71,用0.5%的甲醇诱导重组蛋白表达。细胞培养上清经超滤浓缩后,依次用DEAE-sepharose Fast Flow、Heparin-sepharose CL6B及Sephadex G-75柱层析分离纯化得到重组蛋白,分别采用凝胶扫描成像定量分析和底物显色法测定重组蛋白的表达量和活性。结果凝胶扫描成像定量分析显示,同义突变体的表达量(1mg/L)显著高于天然型(0.1mg/L)。活性测定表明GS115重组菌在诱导表达12h后即可于培养上清中检测到TFPI活性,36h达峰值;而KM71重组菌诱导表达24h后才开始于培养上清中检测到TFPI活性,72h达峰值。两个菌株中突变体mTFPI-pPic9转化子的表达量均显著高于TFPI-pPic9转化子。重组蛋白相对分子质量约为42000。结论对TFPI-cDNA特定序列进行同义突变后能显著提高重组蛋白在毕赤酵母细胞中的表达,且显著高于在酿酒酵母和昆虫细胞的表达;重组蛋白具有良好的生物活性。因此,利用毕赤酵母表达TFPI是一种较好的选择。; 罗师平宋丽萍余波张海玲刘兰霞冷希岗; 关键词：组织因子途径抑制因子毕赤酵母

人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌，人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI具有序列表中SEQ IDNo.1所述...; 冷希岗余波刘兰霞宋丽萍张海玲; 文献传递

氨基酸序列突变对TFPI生物半衰期和生物活性的影响: 一、前言组织因子途径抑制因子(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)是外源性凝血途径的主要抑制物, 它直接抑制FXa的活性,并且以一种依赖于FXa的方式反馈性抑制FVIIa/FIII复...; 余波罗师平宋丽萍冷希岗赵明辉牛惠生; 关键词：TFPI 突变; 文献传递

人类组织因子途径抑制因子突变基因mTFPI、包括该基因的重组载体及其宿主细胞: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因mTFPI、包括该基因的重组载体及其宿主细胞，实验证明，与野生型TFPI基因在毕赤酵母中表达的重组蛋白量相比，本发明的TFPI突变基因mTFPI在毕赤酵母中所表达的重组蛋白...; 冷希岗罗师平宋丽萍刘兰霞余波; 文献传递

人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌，人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI具有序列表中SEQ ID No.1所...; 冷希岗余波宋丽萍刘兰霞张海玲; 文献传递

人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌，人类组织因子途径抑制因子突变基因m0TFPI具有序列表中SEQ ID No.1所...; 冷希岗余波宋丽萍刘兰霞张海玲; 文献传递

氨基酸序列突变对TFPI生物半衰期和生物活性的影响被引量：4: 2007年; 通过对个别氨基酸突变的研究,获得了保持良好生物活性的长半衰期组织因子途径抑制因子(tissue factor pathwayinhibitor,TFPI)重组蛋白的有效途径.采用定点诱变和基因重组技术,首先在TFPI cDNA特定位点形成一个位点的沉默突变,以提高TFPI在毕赤酵母细胞内的表达量,此cDNA称为mTFPI.在此基础上,通过系列位点突变,形成3个羧基端突变体:m0TFPI、m1TFPI和m2TFPI.将上述4种TFPI cDNA与表达质粒pPic9连接,转染大肠杆菌,通过PCR和DNA测序确认重组质粒,转染酵母细胞GS115,甲醇诱导表达重组蛋白.采用层析方法纯化TFPI重组蛋白,用125I标记重组蛋白,静脉注射给药,比较四者在SD大鼠体内血浆代谢清除速度.用底物显色法测定重组蛋白抑制凝血因子Xa(Fxa)的活性,比较各株TFPI重组蛋白突变体在体内、体外对FXa的抑制作用及肝素对各株TFPI重组蛋白功能的影响.结果显示,相比野生型TFPI重组蛋(mTFPI)而言,3株羧基端突变体m0TFPI、m1TFPI、m2TFPI在SD大鼠体内血浆代谢清除时间均有不同程度延长,其生物代谢半衰期分别是mTFPI的1.5倍、1.9倍和大于2倍,与m-TFPI相比,3个rTFPI突变体在体内、体外抑制FXa的作用无明显减弱,与肝素的结合能力及协同能力也无明显减弱.结果表明,m0TFPI、m1TFPI和m2TFPI在生物半衰期得到明显延长的同时,仍保持良好的抑制Fxa的生物活性.; 余波罗师平宋丽萍冷希岗赵明辉牛惠生; 关键词：基因突变

人类组织因子途径抑制因子突变基因m2TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因m2TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌，人类组织因子途径抑制因子突变基因m2TFPI具有序列表中SEQ ID No.1所...; 冷希岗余波张海玲刘兰霞宋丽萍; 文献传递

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