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刘亮伟: 作品数：54 被引量：174H指数：8; 供职机构：河南农业大学生命科学学院更多>>; 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>

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大量–高纯–高浓度DNA的制备被引量：2: 2022年; 氯化铯(CsCl)梯度离心能够大量制备DNA,柱回收试剂盒能够快速制备DNA,结合二者优势开发大量–高纯–高浓度DNA的制备方法。本研究以长度5.9 kb的PCR产物为材料,通过CsCl-EB溶液75,000 rpm离心6 h、注射器收集目标DNA、柱回收去除EB、CsCl回收得到DNA。2000 μL PCR产物CsCl离心后、1个柱回收洗脱四次得到22.1 μg DNA,A260/A230纯度指标高达1.99。3000 μL优化PCR产物CsCl离心后、6个柱回收,洗脱一次得到DNA浓度高达391 ng/μL,洗脱四次得到DNA量高达61.5 μg。与之相比,胶回收2000 μL PCR产物仅得到9.6 μg DNA、A260/A230指标仅0.29,远低于纯净DNA指标2,而柱回收2000 μL PCR产物有较多非特异性条带。CsCl离心–柱回收方法能够制备大量–高纯–高浓度DNA,从而满足对高质量DNA的需要。; 邵玉强金家铖李雪刚刘亮伟; 关键词：高纯高浓度 DNA制备

自我延伸过程对木聚糖酶-CBM融合基因的影响: 2013年; 探讨了木聚糖酶-纤维素结构结合结构域(CBM)基因融合过程,在不加引物而只用两种DNA片段经PCR扩增全长融合基因,从而证明了自我延伸过程的存在,是指互补匹配的两段DNA互为引物、互为模板在聚合酶作用下合成融合基因的过程,从理论上阐明了PCR中的自我延伸过程。在传统PCR中加入3次循环的自我延伸程序(94℃×1 min,52℃×1 min,72℃×1 min),融合基因扩增量要更多。进而探讨自我延伸程序中延伸时间的影响,发现延伸时间2、3、5 min扩增的融合基因量显著增强;而延伸时间为1 min时,融合基因条带的亮度增加不明显,说明延伸时间是增加扩增量的关键因素。; 闫鹏飞马闪闪赵黎胡瑜刘亮伟; 关键词：融合PCR 融合基因

微生物学实验课多元化考核体系的建立与实践被引量：5: 2009年; 中国大多数高校微生物学实验课已作为独立的一门课程进行开设,微生物学实验课实践性强的特点需要建立多元化的考核体系。本文论述建立了多元化考核体系的必要性,对建立多元化考核的过程进行了详细说明,多元化考核体系的实施能够增强学生对实验课的重视,提高学习兴趣,能动地接受知识,明显提高了微生物学实验课的教学效果。; 王明道付香彬刘亮伟刘新育刘新育; 关键词：微生物学实验教学效果

以玉米芯为原料酶法制备木糖条件的研究被引量：6: 2010年; 为使玉米芯中的木聚糖彻底降解为木糖，采用高压灭菌和蒸汽爆破预处理玉米芯粉，加入不同酶液（4IU／mg，以木聚糖酶为标准）后将预处理样在40℃下酶解24h。TIC检测结果表明，酶解产物主要为木糖，其中青霉（Penicillium decumbens）6号对1．01×10^6Pa下汽爆（干粉）样酶解后的木糖得率达33％；黑曲霉（A最rgillus niger）2107对120℃下高压灭菌样酶解后的木糖得率为19．5％；黑曲霉30197酶液对1．01×10^6Pa下汽爆（干粉）样酶解后的木糖得率为26．7％。研究表明，采用黑曲霉酶液对预处理后玉米芯进行酶解来制备木糖的方法可行。; 王彩阁刘亮伟王明道宋安东陈红歌; 关键词：生物工程木糖酶解预处理玉米芯

5’端与3’端间同源长度对质粒构建的影响: 2018年; 5’端/3’端间同源长度对分子内同源重组质粒构建的影响还不明确.本研究以与GFO对应的五种反向引物CR1、CR2、CR3、CR4、CR5,分别扩增5’端/3’端间同源长度有10、20、30、40、50 bp的5.9 kb线性质粒pET20b-C2-GH10-C2作为模式DNA,经重组酶Exnase Ⅱ 37℃体外重组30 min,42℃热激诱导转化BL21(DE3)感受态细胞,比较转化率、质粒位置正确率、接口正确率.结果显示,同源长度30 bp DNA重组后转化子正确质粒最多,正确接口转化率3.4个/ng DNA,其次是同源长度20 bp DNA.电泳检测显示DNA重组后产生nick质粒,是转化子的来源,胞内酶修饰nick可产生基因-载体接口异常.; 梁亚萍程晋生刘亮伟; 关键词：质粒

重组毕赤酵母高产木聚糖酶菌株的筛选及诱导条件优化被引量：1: 2008年; [目的]筛选重组毕赤酵母高产木聚糖酶菌株并优化其甲醇诱导条件。[方法]用不同浓度的G418 YPD平板筛选高拷贝转化子,不同时间间隔添加不同浓度的甲醇进行木聚糖酶诱导表达。[结果]在G418浓度为10.0 mg/m l时,筛选得到产酶活力最高的16号菌株,以0.5%甲醇于30℃诱导产酶,第6天时酶活力达到最高,为826.2 IU/m l,木聚糖酶比活力达5 229.1 IU/mg;该菌在诱导时间间隔为12 h、诱导浓度为0.8%时,产酶量高且稳定。[结论]该菌是甲醇依赖型的高拷贝高酶活菌株。; 靖梅贞黄慧敏赵纪莹刘亮伟陈红歌; 关键词：巴斯德毕赤酵母木聚糖酶

加入自我延伸过程的融合PCR程序被引量：6: 2009年; 比较了加入自我延伸过程的融合PCR程序与传统PCR在扩增融合基因的扩增效果,自我延伸程序(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)扩增2次,分别用不同的延伸时间:1min、2min、3min、5min,发现用2min、3min、5min延伸时间扩增出的融合基因条带比传统PCR显著亮一些,而用延伸时间为1min时,两种程序扩增出融合基因条带的亮度相近,说明自我延伸程序中的延伸时间是影响融合基因扩增量的关键因素。加入自我延伸过程的融合PCR扩增程序为:94℃×5min,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×5min)×2次循环,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)×30次,4℃store。; 刘亮伟杨海玉胡瑜李相前; 关键词：融合PCR 融合基因

基因工程实验方法经验谈被引量：1: 2008年; 基因工程已经渗透到我们每个人的生活,基因工程实验操作也在大学生物学课中普遍开展。然而大学生、研究生在基因工程操作中常常失败,对结果往往不知所以然,所以进行实验操作的指导就显得非常重要。作者根据多年亲身实践和研究生指导工作,总结了基因工程实验操作的九大原则。希望对研究生和科研人员有一些借鉴作用。; 刘亮伟陈红歌刘新育王明道张世敏; 关键词：基因工程

荧光Cy5DNA扩增及酶切产物分离–检测被引量：1: 2022年; dNTPs加入一定比例Cy5-dATP可以扩增荧光Cy5DNA,用于T5外切酶(T5exo)类DNA酶检测,关键是酶切产物分离–检测。[方法]本研究以1/1000 Cy5-dATP的dNTPs扩增5851 bp荧光Cy5DNA pET28a-xyn。基于纯化柱吸附DNA原理,首先确定2倍P3缓冲液(2×P3)为纯化柱吸附DNA最小用量,进而用纯化柱以2×P3分离Cy5DNA溶液、等量Cy5DNA经T5exo酶切反应液(Cy5DNA-T5exo),分别得到洗脱液(含有Cy5DNA)和滤出液(含有酶切产物Cy5-dATP)。[结果]酶标仪定量检测显示,含120 ng Cy5DNA洗脱液荧光值5824、滤出液0。含120 ng Cy5DNA-T5exo滤出液荧光值7573、洗脱液0。激光共聚焦显微镜定性检测显示,Cy5DNA洗脱液有荧光、滤出液无。Cy5DNA-T5exo滤出液有荧光、洗脱液无。定量和定性检测结果与纯化柱吸附DNA、滤出酶切产物原理和功能相同。进而分析了Cy5DNA浓度、Cy5-dATP浓度与荧光值的定量关系。[结论]荧光Cy5DNA成功扩增,其酶切产物经纯化柱以2×P3成功分离,为荧光DNA扩增和用于DNA酶活性检测奠定了基础。; 郑园霞张毅李雪刚刘亮伟; 关键词：荧光检测

F/10木聚糖酶二级结构含量对热稳定性的影响被引量：5: 2013年; 从PDB库中收集F/10家族12个木聚糖酶晶体结构,查找对应酶最适温度并作为热稳定性指标,分析了二级结构含量与稳定性的关系.结果表明,稳定性与α-螺旋含量明显正相关(相关系数为3.1);与β-折叠片含量负相关,但是相关性很小(相关系数0.2);与无规则片断含量明显负相关(相关系数为-2.2).说明二级结构含量影响酶稳定性,这个结果与(β/α)8结构相吻合,螺旋位于酶分子外周,构成分子骨架;折叠片位于分子中间,构成活性中心区域;无规则片断将螺旋和折叠片连接在一起.这一结果明确解释了前人分子改造结果:螺旋中相关氨基酸突变可以提高酶稳定性,指明了酶分子稳定性改造方向,即:减少结构中无规则片断含量、增加螺旋含量可以提高稳定性.; 叶延欣闫鹏飞胡渝刘亮伟; 关键词：木聚糖酶热稳定性

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