刘侃
- 作品数：10 被引量：38H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技重大专项广东省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 大肠杆菌中高效表达rhBMP-4的探讨及初步活性测定被引量：1
- 2006年
- 目的:在大肠杆菌中表达具有生物活性的rhBMPBMP4。方法:在不改变氨基酸序列的前提下,以全基因合成的方式对人BMP4成熟肽基因全长进行定点突变,将之重组入pET3c表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE)plysS。IPTG诱导和包涵体复性后,利用C2C12细胞横向成骨细胞分化实验以及小鼠肌袋异位骨形成实验检测其活性。结果:获得0.348kb的BMP4DNA序列,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。经纯化及复性后,体内与体外的活性检测表明rhBMP4有良好的诱骨生成活性。结论:该方案能够实现rhBMP4在大肠杆菌中的高效表达。
- 高思红汪炬董群伟刘侃刘雪婷洪岸谢秋玲孙奋勇
- 关键词：定点突变包涵
- 重组胸腺素α1在大肠杆菌中的融合表达及培养条件的优化被引量：2
- 2007年
- 采用三角摇瓶来摸索BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种表达目的蛋白的最优发酵条件,并在此基础上在Biotop CF-5L自动控制发酵罐中,利用补料分批培养技术,流加甘油,进行发酵培养;利用Western blotting进行发酵产物鉴定.摇瓶培养最优条件:10%接种量、25 mL LB培养基、37℃培养,0.02 g/mL的甘油做碳源,接种后4 h加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3h后目的蛋白表达量最高.BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种在BiotopCF-5L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到3L发酵培养基中,设定溶氧40%,pH7.0,温度37℃,通气量3 L/min,快速流加甘油60 g,培养4 h后,加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3 h后终止发酵.发酵罐中获得的菌体量为36 g/L,蛋白表达率为10%左右.
- 马纪谢秋玲刘侃汪炬
- 关键词：发酵工艺
- ZTA颗粒增强高铬铸铁基复合材料界面研究被引量：14
- 2018年
- 以自制Fe-Ti金属粘结剂和ZTA(氧化锆增韧氧化铝)陶瓷颗粒为原料,采用粉末冶金工艺制备多孔陶瓷预制体,并浇注高铬铸铁制备ZTA颗粒增强高铬铸铁基复合材料。使用OM、SEM、XRD等分析手段研究预制体和复合材料的复合界面行为。结果表明,Ti含量15%的粘结剂/ZTA复合界面结合优于Ti含量10%的粘结剂/ZTA复合界面。烧结过程中Ti、O、Zr元素扩散到复合界面微区反应形成致密、连续的Ti O_x过渡层,实现ZTA活化包覆。粘结剂与ZTA结合机制为机械结合与反应冶金结合。Ti含量15%的粘结剂制备的预制体具有一定强度和抗热冲击性能,在高铬铸铁液铸渗情况下能保持结构和尺寸,基体与ZTA结合界面致密,无空隙、孔洞缺陷,Ti O_x过渡层分布于界面处起到活化、改善界面结合的作用。
- 刘侃刘侃涂小慧郑宝超涂小慧李卫
- 关键词：ZTA复合材料高铬铸铁
- 一种Ti-Fe微粉包覆下的多通道陶瓷预制体及其制备方法和应用
- 本发明属于材料加工领域，公开了一种Ti‑Fe微粉包覆下的多通道陶瓷预制体及其制备方法和应用。本发明通过机械合金化(MA)的方法获得Fe‑Ti合金深共晶点附近得合金粉体，合金粉体的熔化温度可达1085℃，通过无压烧结的方法...
- 涂小慧李卫郑宝超刘侃林怀俊张鹏
- 基因重组大肠杆菌表达截短型pZP3β的发酵条件优化被引量：1
- 2006年
- 目的:对已构建好的表达pZP3β蛋白(pZP130)工程菌的培养条件进行优化,通过在5L罐中发酵和Ni柱纯化,以期获取较大量目的产物。方法:在摇瓶中改变不同的培养及诱导条件,比较工程菌的生长和目的蛋白的表达,优化发酵条件;并在5L发酵罐中进行发酵,获得菌体,破碎后进行Ni柱纯化。结果:优化的发酵条件是:10%的接种量,加入2%甘油的培养基培养菌体3h后加入0.5mmol/LIPTG,诱导4h后收样。在5L发酵罐中发酵,获得菌体量36g/L,经Ni柱纯化,获得蛋白粗制品33mg/L发酵液。结论:截短型pZP3β蛋白可以在E.coli中获得较高表达,并且可以通过发酵和Ni柱纯化得到较大量的蛋白,这有助于pZP的深入研究和应用。
- 谢秋玲陈小佳朱伟杰赵振云吴建虹徐万祥刘侃李菁
- 关键词：截短型发酵
- 重组人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中的高效表达及体外复性摸索
- 目的：胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1)在细胞的生长、分化和凋亡中发挥重要作用，因此在临床应用中具有广阔的前景。本研究的目的在于优化重组大肠杆菌发酵及rhIGF-...
- 刘侃
- 关键词：胰岛素样生长因子-1复性
- 文献传递
- 重组类胰岛素样生长因子-Ⅰ的纯化与复性被引量：16
- 2006年
- 目的:获得高纯度和高活性的胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF-1);方法:构建好的BL21大肠杆菌工程菌经IPTG诱导,以融合一段截短型半乳糖苷酶及His-tag形式表达IGF-1融合蛋白(约15kDa),超声破碎,提取包涵体经镍柱亲和层析后,用羟氨切割纯化的融合蛋白,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及GSH/GSSG的存在下复性。结果:经Ni2+柱亲和层析,IGF-1纯度达90%以上,复性后得到有较高生物活性的IGF-1。结论:IGF-1发酵及纯化和复性方法的建立为大量生产IGF-1打下了基础。
- 刘侃汪炬谢秋玲李志英洪岸
- 一种Ti-Fe微粉包覆下的多通道陶瓷预制体及其制备方法和应用
- 本发明属于材料加工领域，公开了一种Ti‑Fe微粉包覆下的多通道陶瓷预制体及其制备方法和应用。本发明通过机械合金化(MA)的方法获得Fe‑Ti合金深共晶点附近得合金粉体，合金粉体的熔化温度可达1085℃，通过无压烧结的方法...
- 涂小慧李卫郑宝超刘侃林怀俊张鹏
- 文献传递
- 人表皮生长因子融合蛋白在大肠杆菌表达的研究被引量：1
- 2004年
- 在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF)。根据大肠杆菌对密码的偏爱性,构建高效表达EGF融合蛋白的菌株,经离子交换层析和凝胶过滤层析两个步骤使产物得到纯化。融合蛋白表达产量为27%,EGF融合蛋白纯化产物纯度为95%以上,促3T3细胞增殖的活性测定为ED50为4.2ng/mL。在pET 3c:BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高,纯化路线简单,产量较高,适合产业化生产。
- 汪炬余榕捷徐丽慧刘侃
- 关键词：表皮生长因子融合蛋白大肠杆菌基因表达纯化
- 重组人碱性成纤维细胞生长因子的柱复性研究被引量：2
- 2005年
- 收集rhbFGF工程菌菌体,包涵体纯化后经凝胶过滤柱复性,所得复性后bFGF通过肝素亲和柱纯化并测活。各种复性方案中复性后bFGF比活最高为2.5×105U/mg,得率最高为74%。复性液中的变性剂浓度及是否含有还原剂,柱流速及柱体积都会影响复性后bFGF的得率和活性。
- 汪炬曹莹洪岸刘侃
- 关键词：重组人碱性成纤维细胞生长因子复性包涵体成纤维细胞因子细胞增殖
