刘庆
- 作品数：10 被引量：31H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所更多>>
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- 多环芳烃接触工人外周血DNA损伤与片状核酸内切酶基因多态性的关系被引量：1
- 2011年
- 目的研究片状核酸内切酶1(flap endonuclease 1,Fen1)基因多态性与多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)接触工人外周血淋巴细胞DNA损伤易感性的相关性。方法选取137名焦炉作业工人(接触组)和49名无职业性PAHs及射线接触的医务人员(对照组)作为调查对象。测定尿中1-羟基芘(urinary 1-hydroxypyrene,1-OHPyr)水平反映PAHs接触内剂量,用碱性彗星试验评价个体外周血淋巴细胞DNA损伤,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析Fen1基因rs4246215和rs174538位点的多态性。结果在校正性别、年龄、每日吸烟量、焦炉作业工龄和尿1-OHPyr后,接触组Fen1基因rs4246215、rs174538位点多态性与彗星Olive尾矩的关联差异有统计学意义(P<0.05),其中,携带杂合子基因型的个体彗星Olive尾矩短于携带突变型纯合子的个体,差异有统计学意义(P<0.05);携带不同单体型的个体彗星Olive尾矩,差异有统计学意义(P<0.05),其中携带GG/TA+TG单体型对的个体彗星Olive尾矩短于携带TA/TA+TG单体型对的个体,差异有统计学意义(P<0.01)。非暴露组Fen1基因rs4246215、rs174538位点多态性和不同单体型与彗星Olive尾矩的关联无统计学意义(P>0.05)。结论 Fen1基因rs4246215、rs174538位点的多态性可能是影响PAHs接触工人外周血淋巴细胞DNA损伤水平的易感性因素之一。
- 宾萍段化伟冷曙光程娟潘祖飞戴宇飞牛勇刘清君陈泓刘庆郑玉新
- 关键词：多环芳烃基因多态性
- 2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经P_0蛋白及血清P_0蛋白抗体水平的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨正己烷代谢产物2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经髓鞘结构蛋白P0蛋白及外周血中P0蛋白抗体水平的影响。方法选用400mg/kg2,5-己二酮每日经口灌胃染毒Wistar大鼠,观察大鼠的一般状况改变,分别于第0、1、2、3、4周取材,采用免疫组化技术观察不同染毒时间大鼠坐骨神经横断面P0蛋白表达水平,并采用酶联免疫吸附试验检测不同染毒时间,大鼠外周血中P0蛋白抗体的水平。结果随着染毒时间的延长,大鼠逐渐出现明显的中毒症状。P0蛋白在坐骨神经横断面呈不均匀分布,髓鞘较轴索明显;未染毒大鼠坐骨神经横断面P0蛋白呈较高水平表达,随着染毒时间的延长,坐骨神经横断面P0蛋白表达水平有逐渐降低的趋势。染毒0、1、2、3和4周大鼠外周血中P0蛋白抗体阳性率分别为33.3%、26.7%、46.7%、46.7%和84.6%。外周血中P0蛋白抗体的阳性率随染毒时间延长呈现明显增加的趋势(χ2=11.007,P<0.05)。结论正己烷代谢产物2,5-己二酮能够破坏大鼠周围神经髓鞘,降低坐骨神经中P0蛋白的水平,提高外周血中P0蛋白抗体的水平。
- 刘清君赵磊段化伟戴宇飞牛勇陈泓刘庆宾萍郑玉新
- 关键词：2,5-己二酮中毒性周围神经病
- 苯并(a)芘对人支气管上皮细胞端粒长度的影响被引量：1
- 2011年
- 目的体外探讨苯并(a)芘[Benzo(a)pyrene,B(a)P]对人支气管上皮细胞端粒长度的影响。方法应用人支气管上皮细胞株16HBE,给予不同浓度的B(a)P处理,采用定量PCR方法测定细胞全基因组DNA的相对端粒长度,观察细胞全基因组DNA相对端粒长度的变化情况。以4μg/ml博来霉素(Bleomycin,BLM)为阳性对照。结果与0μmol/L组比较,1和4μmol/L B(a)P染毒组,以及阳性对照组的相对端粒长度较短,差异有统计学意义(P<0.05);而16μmol/L B(a)P染毒组与0μmol/L组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 B(a)P可对人支气管上皮细胞16HBE的全基因组DNA端粒长度产生影响,在一定剂量内会导致细胞全基因组DNA端粒长度缩短。
- 宾萍段化伟王亚东戴宇飞牛勇刘清君陈泓刘庆郑玉新
- 关键词：苯并(A)芘端粒长度定量PCR
- 焦炉逸散物诱导人支气管上皮细胞O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因高甲基化被引量：5
- 2011年
- 目的 通过观察细胞遗传损伤指标和O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）甲基化改变,探讨焦炉逸散物暴露诱导的损伤效应机制.方法 采用1 μmol/L苯并[a]芘[B（a）P]诱导人支气管上皮细胞16HBE 48 h后,分别用1‰二甲基亚砜（DMSO）和2.5、5.0、10.0、20.0 μg/ml浓度的焦炉逸散物有机提取物对16HBE细胞连续染毒5 d,构建细胞损伤模型;采用甲基化特异性PCR（MSP-PCR）检测细胞MGMT甲基化改变,并用RT-PCR检测细胞MGMT mRNA改变,免疫印迹法检测MGMT蛋白改变;采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤水平.结果 与DMSO组相比,MGMT基因在各处理组均有高甲基化改变,并随剂量的增加,其mRNA和蛋白表达水平都呈下降趋势.DMSO组及2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml各剂量组MGMT mRNA及其蛋白的灰度比值分别为1.0、0.96、0.96、0.85、0.32和1.0、1.0、1.1、0.41、0.52.焦炉逸散物有机提取物处理后,细胞出现不同程度的DNA损伤,DMSO组及2.5、5.0、10.0、20.0μg/ml各剂量组彗星Olive尾距分别为（2.98±1.43）、（4.76±1.79）、（10.09±1.75）、（11.38±1.77）、（11.67±1.88）,损伤呈明显的剂量-效应关系（F=41.22,P＜0.05）;进一步分析发现,细胞的遗传损伤指数与MGMT蛋白及mRNA表达水平呈负相关.结论 焦炉逸散物引起的DNA损伤与MGMT高甲基化所致的MGMT基因表达水平降低有关.
- 马俊香段化伟黄传峰杨海军戴宇飞牛勇宾萍刘庆郑玉新
- 关键词：焦炉逸散物MGMT基因甲基化彗星实验DNA修复
- 多环芳烃接触工人外周血全基因组DNA端粒长度与代谢相关基因多态性的关系
- 2011年
- 目的探讨多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs）接触工人外周血全基因组DNA的端粒长度与PAHs代谢相关基因多态性的关系。方法选取145名焦炉作业工人（接触组）和68名无职业性PAHs及射线接触的医务人员（对照组）作为调查对象。测定尿中1-羟基芘（1-hydroxypyrene，1-OHP）水平反映PAHs接触内剂量，采用实时定量PCR的方法，测定研究对象外周血全基因组DNA的相对端粒长度（RTL），采用基于PCR的方法进行PAHs代谢相关基因多态性分析。结果与对照组（1．43±1．06）相比，PAHs接触组的RTL（1．10±0．75）明显缩短，差异有统计学意义（P=0．026）。校正了性别、年龄、每FI吸烟量和尿中1-OHP后，接触组CYPIAI基因3801T〉C位点CT基因型个体RTL（1．25±0．93）长于TT基因型（0．93±0．51），差异有统计学意义（P=0．043）；mEH基因Tyr^113His位点Tyr／His基因型个体RTL（0．90＋0．58）短于巩r／斯基因型（1．24±0．90），差异有统计学意义（P=0．043）；AHR基因rs10250822位点CT基因型个体RTL（1．02±0．64）短于CC基因型个体（1．36±1．14），差异有统计学意义（P=0．044）；AHR基因rs10247158位点AT基因型个体RTL（0．93±0．54）短于AA基因型（1．19±0．84），差异有统计学意义（P=0．047）。结论接触PAHs可以引起接触工人外周血全基因组DNARTL缩短，在PAHs接触丁人中，CYP1A1、mEH、AHR基因多态性可能是影响外周血全基因组DNARTL的遗传因素之一。
- 宾萍冷曙光程娟段化伟潘祖飞戴宇飞牛勇刘清君陈泓刘庆郑玉新
- 关键词：多环碳氢化合物端粒长度
- 端粒长度与职业性多环芳烃暴露的关系研究被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨多环芳烃（PAHs）暴露与端粒长度的关系,以寻找评价多环芳烃致外周血遗传物质损伤的效应性生物标志物.方法 以145名焦炉作业工人（炉顶工30名、炉侧工76名、炉底工39名）作为暴露组,68名医护人员作为对照组,收集其工作周末班6 h后的尿液和1 ml肘静脉血.测定研究对象工作环境空气中苯溶物和颗粒相苯并（a）芘浓度、尿中1-羟基芘（1-OHPyr）水平;应用定量PCR方法测定其外周血全基因组DNA的相对端粒长度（RTL）,分析端粒长度与PAHs外暴露水平和相关影响因素的关系.结果 暴露组空气中苯溶物和颗粒相苯并（a）芘浓度的中位数分别为328.6 μg/m3和926.9 ng/m3,均高于对照组区域[苯溶物为97.8 μg/m3,颗粒相苯并（a）芘浓度为49.1 ng/m3].暴露组尿1-OHPyr水平（12.2 μmol/mol Cr）高于非暴露组（0.7 μmol/mol Cr）,差异有统计学意义（t=26.971,P〈0.01）.暴露组RTL为1.10 ±0.75,短于非暴露组的1.43±1.06,差异有统计学意义（t=2.263,P=0.026）,校正每日吸烟量和尿1-OHPyr水平后的协方差分析也显示差异有统计学意义（F校正=5.496,P校正=0.020）.分层分析中发现PAHs暴露对RTL的影响在男性（暴露组：1.08 ±0.73;非暴露组：1.51±1.10;F=9.212,P=0.003）和不饮酒（暴露组：0.96±0.38;非暴露组：1.26±0.46;F=6.484,P=0.012）的工人中更为显著.非暴露组的RTL与年龄呈负相关（r=-0.284,P=0.019）.结论 PAHs暴露可对工人外周血全基因组DNA的端粒长度产生影响,这种影响在男性和不饮酒的焦炉工中更为明显,提示端粒长度可能是PAHs暴露致遗传物质损伤的效应生物标志物之一.
- 宾萍冷曙光程娟潘祖飞段化伟戴宇飞李海山牛勇刘清君刘庆郑玉新
- 关键词：焦炭烃类芳香端粒
- 应用基因重组细胞模型研究苯并[a]芘的细胞毒性和遗传损伤效应被引量：5
- 2010年
- 目的利用经基因重组构建的具有细胞色素P4501A1（CYP1A1）代谢活性的人支气管上皮细胞（16HBE）为体外模型，研究苯并[a]芘[B（a）P]的细胞毒性和遗传效应改变。方法应用实时定量PCR方法检测细胞的CYP1A1和微粒体环氧化物水解酶（mEH）的mRNA水平。细胞分0、1、5、10、20μmol／LB（a）P处理组，应用胞质分裂阻滞微核细胞组学技术综合评价B（a）P的有害生物效应，其中核分裂指数、细胞凋亡率和细胞坏死率等指标评价B（a）P的细胞毒性，微核、核质桥和核芽的发生率检测B（a）P的遗传损伤效应。结果CYP1A1和mEtI在16tlBE—CYP1A1细胞中有较高表达，mRNA相对含量分别是7．8×10^-4和0．030。B（a）P作用后，16HBE—CYP1A1细胞1、5、10、20μmol／L处理组核分裂指数分别为1．92±0．04，1．71±0．0l，1．61±0．04，1．41±0．01，低于对照组（2．08±0．03）；双核细胞率分别为（76．33±3．51）％、（66．33±0．58）％、（51．67±1．53）％、（39．00±1．00）％，低于对照组的（82．67±6．66）％；细胞坏死率分别为（1．93±0．42）％、（2．20±0．53）％、（8．07±0．90）％、（15．27±2．80）％，高于对照组的（0．47±0．11）％，差异均有统计学意义（F值分别为、899．94、303．33、240．87，P值均〈0．01）。而凋亡细胞随着B（a）P作用剂量的增加出现先增高后降低的趋势，分别为（1．20±0．53）％、（2．00±0．20）％、（1．47±0．12）％、（1．20±0．00）％、（1．20±0．00）％。遗传损伤效应分析中发现，随B（a）P作用浓度的增加，核质桥发生率随之增加，分别为（4．67±2．89）‰、（7．33±1．53）‰、（10．67±2．08）‰、（11．00±1．00）‰；核芽发生率也随之增加，分别为（2．334-0．58）‰、（4．00±1．00）％。、（5．00±1．00）‰、（7．67±1．16）‰，均有剂量-效应关系（F值分
- 段化伟宾萍刘清君王亚东牛勇刘庆戴宇飞陈雯郑玉新
- 关键词：毒性试验细胞核分裂
- 三氯乙烯药疹样皮炎患者周围血T淋巴细胞表面Fas、FasL表达研究被引量：9
- 2011年
- 目的研究三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者周围血T淋巴细胞表面Fas、FasL的表达,及其在TCE药疹样皮炎发病中的作用。方法选择TCE药疹样皮炎患者12例、接触对照24例及非接触对照19例3组对象,流式细胞术进行周围血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群分析,并检测表面Fas、FasL阳性表达百分比。结果病例组周围血CD4+、CD8+T细胞中位数(1 089.51、916.65×106个/L)明显高于接触对照组(645.75、533.91×106个/L)和非接触对照组(579.70、310.80×106个/L,P<0.05)。CD4+/CD8+细胞比值3组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病例组CD4+T细胞表面FasL表达(47.35%)明显高于非接触对照组(33.64%,P<0.05),但与接触对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病例组CD8+T细胞表面Fas与FasL表达(5.42%、28.71%)明显高于接触对照组(2.53%、24.42%)和非接触对照组(2.76%、12.47%,P<0.05或P<0.01)。接触对照组CD4+、CD8+T细胞表面FasL表达(46.81%、24.42%)显著高于非接触对照组(33.64%、12.47%,P<0.01);但2类细胞表面Fas表达与非接触对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TCE药疹样皮炎患者CD8+T细胞是主要的效应性T细胞,其表面Fas、FasL的高表达与TCE药疹样皮炎的发生相关。
- 刘庆滕艳霞易娟臧丹周伟董海燕牛勇段化伟黄先青宾萍郑玉新戴宇飞
- 关键词：三氯乙烯药疹样皮炎T淋巴细胞FASL
- 2，5-己二酮对坐骨神经及运动神经元瘤细胞VSC4．1神经生长因子水平的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究2，5-己二酮（2，5-hexanedione，2，5-HD）对大鼠坐骨神经和运动神经元神经生长因子（nerve growth factor，NGF）水平的影响。方法应用随机数字表法将50只Wistar大鼠分为400mg·kg^-1·d^-12，5-HD染毒0、7、14、21、28d组，每组10只，采用免疫组织化学显色和荧光定量PCR检测不同时间坐骨神经横断面NGF水平和坐骨神经NGF mRNA水平。选用0．2．5、5．0、10．0、20．0mmol／L2，5-HD染毒神经元瘤细胞VSCA．1，应用免疫荧光法观察NGF水平的改变；并选用10．0mmol／L2，5-HD作染毒剂量，观察0、1、3、6、12、24、48hNGF水平的变化。结果随染毒时间延长，坐骨神经NGF呈先增高后降低的趋势；坐骨神经NGF mRNA水平在染毒14d（2^-△△Ct=3．46）、21d（2^-△△Ct=5．28）和28d（2^-△△Ct=3．10）高于染毒0d（2^-△△Ct=1）和7d（2^-△△Ct=0．78），差异有统计学意义。各染毒剂量组VSGA．1细胞NGF水平差异有统计学意义（F=188．88，P〈0．01）；5．0、10．0、20．0mmol／L组NGF平均荧光强度值（分别为43．24±7．52、43．48±10．86、63．13±10．68）高于0mmol／L组（16．32±4．20）（q值分别为19．92、19．72、32．78，P值均〈0．01）和2．5mmol／L组（19．78±2．66）（q值分别为17．50、17．42、30．63，P值均〈0．01）；20．0mmol／L组高于5．0、10．0mmol／L组（q值分别为13．04、11．71，P值均〈0．01）。10．0mmol／L2，5-HD染毒不同时间VSC4．1细胞NGF水平差异有统计学意义（F=75．69，P〈0．01）；染毒6、12、24、48hNGF平均荧光强度值（分别为18．66±2．89、23．14±6．08、27．66±6．11、17．25±3．05）高于染毒0h（10．18±1．81）（q值分别为9．64、15．74、21．76、8．50，P值均〈0．01）、染毒1h（9．31±1．28）（q值分别为10．28、16．17、21．95、9．20，P值均〈0．01）和染毒3h（10．44±2．13）（q值分别为9．25、15．24、21．17、8．10�
- 刘清君张艳淑刘强段化伟戴宇飞刘庆牛勇陈泓宾萍何凤生郑玉新
- 关键词：周围神经系统疾病
- EB病毒转化人外周血B淋巴细胞的影响因素研究
- 2009年
- 目的探讨人类疱疹病毒(EBV)转化外周血B淋巴细胞试验的影响因素。方法用B95-8细胞制备EBV,实时荧光定量-PCR(realtime-PCR)法测定EBV滴度以确保病毒有效性,Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,研究环孢霉素A(CSA)的浓度、CSA加入时间、淋巴细胞浓度3个因素对EBV转化外周血B淋巴细胞试验的影响,选择最优化条件对三氯乙烯接触工人的B淋巴细胞进行转化。结果制备的病毒滴度分别为5.45×106/ml和1.06×106/ml。不同浓度CSA(0.2、1和2μg/ml)作用以及不同加入时间(同时加入或2h后)B淋巴细胞均成功永生化;正常人B淋巴细胞转化时淋巴细胞浓度不低于2×106/ml时方能成功永生化,而接触三氯乙烯工人的淋巴细胞在1×106/ml浓度下亦转化成功。不同条件下转化成功的B淋巴细胞永生化细胞系在形态上无明显差别,显微镜下可见B淋巴细胞体积增大并聚集成团。结论在建立B淋巴细胞永生化细胞系的过程中,CSA浓度和加入时间对转化结果未见影响,而淋巴细胞与EBV接触时的细胞浓度是影响实验成败的关键因素,接触三氯乙烯工人的B淋巴细胞在1×106/ml浓度下亦转化成功,推测与淋巴细胞致敏状态有关。
- 刘庆滕艳霞牛勇刘清君段化伟宾萍郑玉新戴宇飞
- 关键词：EB病毒永生细胞系环孢霉素AB淋巴细胞三氯乙烯
