刘延锋
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 极细链格孢菌peaT1基因在毕赤酵母中的表达与功能分析被引量：8
- 2009年
- 建立了在毕赤酵母(Pichiapastoris)中分泌表达PeaT1蛋白的技术。将来源于极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)的基因peaT1亚克隆至酵母分泌型表达载体pPIC9K,构建了重组表达载体pPIC9K-peaT1,分别用SalI或BglII酶切线性化后电击转入毕赤酵母GS115菌株中,经MD平板筛选、PCR鉴定获得整合有外源基因的重组菌株。在α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,PeaT1在酵母中大量表达并分泌到胞外,SDS-PAGE检测表明表达蛋白的表观分子量约为35kD。表达蛋白上清稀释液能诱导烟草产生对TMV的抗性,其枯斑数抑制率可达到30.37%。每升表达上清液经超滤浓缩和离子交换层析可纯化目的蛋白16.13mg,该纯化蛋白能显著地促进小麦幼苗的生长。
- 刘延锋曾洪梅玉山江杨秀芬毛建军邱德文
- 关键词：毕赤酵母
- 极细链格孢菌激活蛋白PeaT1在毕赤酵母中的表达及其互作蛋白的研究
- 本研究室从极细链格孢菌（Alternariatenuissima)JH505中分离纯化获得一种能诱导植物产生系统抗性、促进植物生长的激活蛋白PeaT1，其表观分子量约为35KD;克隆了编码该蛋白的基因peaT1(登录号C...
- 刘延锋
- 关键词：毕赤酵母噬菌体
- 文献传递
- 极细链格孢菌蛋白激发子PeaT1在酵母双杂交系统中转录激活活性的检测（英文）被引量：3
- 2008年
- 2000年笔者从植物病原真菌中提取获得一类新型蛋白激发子，它能提高植物自身免疫力，促进植物生长，提高作物产量和产品品质。并在研究该类蛋白的过程中，从极细链格孢菌中分离纯化到1种能诱导植物产生系统抗性、促进植物生长的蛋白，并进一步克隆了编码该蛋白的基因peaTl（Genbank登录号CH445335）。为进一步阐明PeaTl的分子作用机理，拟采用酵母双杂交技术，
- 刘延锋邱德文曾洪梅杨秀芬
- 关键词：链格孢菌蛋白激发子酵母双杂交系统
- 细极链格孢菌peaT2基因在毕赤酵母中的表达及蛋白功能确定被引量：3
- 2007年
- 从细极链格孢菌表达文库获得阳性克隆子,序列分析表明,克隆的DNA片段中含有完整的开放阅读框架,将该基因命名为peaT2(GenBank登录号为EF212880)。用PCR法扩增peaT2基因的编码序列并亚克隆到毕赤酵母表达系统的表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K/peaT2。重组质粒经SacⅠ线性化后用电穿孔法导入到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,采用MD、G418-YPD平板和PCR法筛选Mut+表型,获得了分泌表达的重组毕赤酵母。随机挑取一菌株作为表达菌,用甲醇诱导PeaT2蛋白表达。SDS-PAGE及Western blot检测结果均表明PeaT2在毕赤酵母中成功地分泌表达。用peaT2基因的表达蛋白处理小麦种子,生物测定表明,表达蛋白能明显促进小麦的生长,具有蛋白激发子作用。
- 刘文平曾洪梅刘延锋袁京京邱德文
- 关键词：蛋白激发子毕赤酵母表达系统
- 极细链格孢菌蛋白激发子Peat1在酵母双杂交系统中转录激活活性检测被引量：3
- 2008年
- 以PCR法从pGEX-6p-1-peaT1中扩增出peaT1基因片段,电泳回收后将peaT1基因定向克隆到plexA载体中。将诱饵载体plexA-peaT1经酶切和测序鉴定后,用PEG/LiAC法转化酵母EGY48[p8op-lacZ],并进行诱饵载体转录激活活性检测。结果表明,重组质粒经EcoR I和XhoⅠ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测可见2条与预期相符的条带,表明诱饵载体构建成功。β-半乳糖苷酶活性分析表明,诱饵载体plexA-peat1无转录激活活性,对酵母菌株也无毒害作用。该诱饵载体可用于酵母双杂交系统中,为下一步筛选cDNA文库奠定了基础。
- 刘延锋邱德文曾洪梅杨秀芬
- 关键词：酵母双杂交转录激活活性
- 灰葡萄孢菌激发子pebC1在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性分析被引量：1
- 2011年
- 为了实现激发子PebC1编码基因在毕赤酵母中的分泌表达,采用PCR方法从灰葡萄孢菌BC-4-2-2-1菌株中扩增获得激发子PebC1的编码序列,将其亚克隆至酵母分泌型表达载体pPIC9K中,以此片段构建了pPIC9K-pebC1重组表达质粒。重组表达质粒经BglⅡ线性化处理,电击转化至毕赤酵母宿主菌GS115,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得了重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K-pebC1。用甲醇诱导重组酵母菌表达目标蛋白,发酵液经SDS-PAGE电泳分析,在约39 kDa处出现特异目标条带。Western blotting检测结果说明,重组表达产物具有良好的抗原性。生物活性检测表明,酵母重组表达蛋白PebC1能够诱导拟南芥和黄瓜幼苗对灰霉病的抗性。
- 张云华杨秀芬刘延锋玉山江邱德文
- 关键词：激发子毕赤酵母生物活性
