刘梦颖
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基过表达慢病毒载体的构建及功能初步测定
- 2014年
- 目的：构建含活性缺陷型小鼠端粒酶催化亚基（去除氨基酸702-712的mTERT,命名为mTERTΔ）基因的慢病毒载体,检测其表达和功能。方法：从先前构建的表达mTERT全长的pDC315-EGFP-mTERT质粒中,通过缺失突变PCR扩增小鼠mTERTΔ基因,构建真核表达载体GV287-EGFP/mTERTΔ。鉴定正确后将目的基因克隆入慢病毒载体pGC-LV,得重组载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP,采用Lipofectamine2000将其转染293T细胞,包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP后感染神经干细胞和原代神经元,TRAP-PCR方法检测端粒酶活性,荧光显微镜观察目的片段表达和细胞增殖情况。结果：成功构建TERTΔ基因片段,测序证明重组慢病毒载体pGC-LV/mTERTΔ-EGFP构建成功。包装慢病毒颗粒LV-mTERTΔ-EGFP可以感染神经干细胞和神经元,端粒酶活性测试证明目的蛋白的端粒酶催化活性缺陷,抑制神经干细胞增殖,抑制内源性mTERT功能。结论：慢病毒载体LV-mTERT-EGFP构建成功,可以表达无活性mTERT片段。
- 刘梦颖韩舟吴海银陈晨沈芯如周海辉周其冈朱东亚
- 关键词：端粒酶慢病毒EGFP
