刘海明
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外胰岛细胞共培养及化学因子联合诱导NOD鼠IPSCs分化为胰岛素分泌细胞的实验研究
- 目的:建立一种更为高效的体外胰岛素分泌细胞诱导体系。方法:化学因子分步骤加入培养基,并将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotentstem cells,iPSCs)共同培养...
- 余丹峰蔡德鸿严婷刘锻李迪刘海明杨锐张振张桦
- 游离脂肪酸对猴胰岛微血管内皮细胞脂毒性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)对恒河猴胰岛微血管内皮细胞(islet microvascular endo-thelial cells,IMECs)增殖和凋亡的影响及FFA介导的恒河猴IMECs氧化应激损伤。方法分离纯化恒河猴IMECs,分别用含有FFA(FFA组)和不含有FFA(对照组)的DMEM培养,MTT实验测定细胞增殖率(成活率),流式细胞仪检测细胞凋亡率,活性氧簇(ROS)酶联免疫分析(ELISA)测定IMECs中ROS的浓度。结果经24 h培养后,FFA组IMECs增殖率较对照组显著降低(P<0.01);Annexin V-FITC/PI双染色后FFA组于荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞;与对照组凋亡率比较,1.0 mmol/L FFA作用适当时间可显著升高IMECs凋亡率(P<0.01);FFA组IMECs中ROS水平较对照组显著升高(P<0.01)。结论高水平FFA可显著降低恒河猴IMECs增殖率,促进细胞发生凋亡,其凋亡可能与FFA介导的氧化应激损伤有关。
- 孙慧琳刘海明张振杨力孙嘉陈宏蔡德鸿张桦
- 关键词：游离脂肪酸凋亡
- 骨髓腔注射骨髓间充质干细胞防治模拟失重大鼠的骨质疏松被引量：2
- 2012年
- 背景:模拟失重条件下自身骨髓间充质干细胞的增殖受到抑制,并且向成骨细胞分化的能力减弱,造成骨量减少与骨微结构的破坏,最终导致骨质疏松。目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞骨髓腔注射对模拟失重大鼠胫骨骨密度和骨组织微结构的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为自由活动对照组、尾吊模拟失重组、细胞治疗组(尾吊模拟失重同时给予双侧胫骨骨髓腔注射成骨诱导的同种异体BMSCs细胞)。结果与结论:与自由活动对照组相比,尾吊模拟失重组胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著降低(P<0.01),骨小梁分离度显著增加(P<0.01)。与尾吊模拟失重组相比,细胞治疗组中胫骨骨密度、骨小梁面积百分比、骨小梁数量和厚度均显著增加(P<0.01),骨小梁分离度显著降低(P<0.01)。说明骨髓腔注射能够增加模拟失重大鼠骨密度,改善骨超微结构,减缓骨量丢失,有效防治骨质疏松。
- 吴礼凤孙平麦燕兴刘海明徐艳花杨锐黄震
- 关键词：模拟失重骨质疏松骨髓间充质干细胞骨密度骨组织形态计量学
- 小鼠胚胎成纤维细胞重编程为多能干细胞被引量：1
- 2012年
- 背景:目前胚胎干细胞研究面临伦理争议及来源困难等诸多问题,人们一直在寻找不需破坏胚胎或卵细胞的建立多潜能干细胞的方法。目的:构建小鼠诱导性多潜能干细胞系并对其进行鉴定。方法:利用反转录病毒将3个干细胞基因Oct4、Sox2、Klf4导入小鼠胚胎成纤维细胞中,将其诱导为多潜能干细胞。通过镜下观察、碱性磷酸酶染色、反转录PCR(RT-PCR)、免疫荧光实验及畸胎瘤形成实验等对诱导性多潜能干细胞形态、多能性基因表达情况、干细胞表面标记及全能性等进行鉴定分析。结果与结论:从小鼠胚胎成纤维细胞诱导而来的诱导性多潜能干细胞镜下观察呈典型的克隆状生长,圆形或椭圆形,与饲细胞分界清楚;RT-PCR、碱性磷酸酶染色及免疫荧光检测诱导性多潜能干细胞高表达胚胎干细胞相关基因及蛋白;种植在免疫缺陷鼠体内能够形成向内中外3个胚层分化的畸胎瘤,表明诱导性多潜能干细胞具有多潜能性。通过转导3种重编程因子可以将小鼠成纤维细胞诱导为类似胚胎干细胞的多潜能干细胞。
- 刘海明张振杨力杨锐孙嘉吴礼凤陈宏蔡德鸿张桦
- 关键词：诱导性多能干细胞重编程胚胎成纤维细胞小鼠OCT4KLF4
- 恒河猴胰岛的半自动分离和纯化
- 2011年
- 目的探讨恒河猴胰岛分离和纯化的技术方法。方法采用自制的半自动胰腺消化分离装置，对3只成年恒河猴胰腺进行消化分离，用非连续密度梯度高渗枸橼酸盐嘌呤溶液（HCA液）-蔗聚糖液（Ficoll液）纯化恒河猴胰岛，通过双硫腙染色在倒置显微镜计数胰岛的数量和纯度，用胰岛素释放试验检测胰岛的分泌功能。分离和纯化结果采用配对t检验进行统计分析。结果消化后平均每个胰腺可获得（101420±12054）胰岛当量（IEQ），纯化后平均每个胰腺可获得（71480±8054）IEQ，平均每克恒河猴胰腺组织可获得（2310±252）IEQ，纯化后胰岛平均纯度为（89．8±8．7）％，活率为（93．1±2．8）％。纯化后的胰岛对葡萄糖刺激反应良好，高糖（16．7mmol／L）时胰岛素的释放量为低糖（3．3mmol／L）时的5．9倍（t=45．2，P〈0．01）。分离胰岛在移植到糖尿病大鼠肾包膜下后能够影响降低血糖至支持水平。结论通过采用半自动胰腺消化分离装置，胶原酶P灌注消化及非连续密度梯度法纯化，能获取较高纯度及生物活性良好的恒河猴胰岛。
- 孙慧琳刘海明张振杨力孙嘉杨锐陈容平陈宏孙尔维蔡德鸿张桦
- 关键词：胰岛细胞分离恒河猴
- 体外胰岛细胞共培养及化学因子联合诱导NOD鼠源性诱导性多能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究被引量：2
- 2014年
- 目的建立更为高效的NOD鼠体外胰岛素分泌细胞诱导体系。方法化学因子分步加入培养基,将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠源性诱导性多能干细胞(NOD-iPSCs)共培养约20d,检测胰岛素分泌细胞的相关功能,并与纯化学因子诱导方法进行对比。结果诱导后成团生长,双硫腙染色呈棕红色,RT-PCR显示胰十二脂肠同源异型盒基因1(PDX-1)从第8天起开始表达,并逐渐增强。免疫荧光染色显示细胞表达胰岛素及C-P,联合组及纯化学因子组诱导培养每隔4d检测至20d,高糖刺激后两组胰岛素分泌均呈逐渐升高趋势。结论 NOD-iPSCs能够在体外诱导生成胰岛素分泌细胞。联合培养体系提供大鼠胰岛细胞功能因子可加速分化,提高效率,可能为一种更高效的诱导方法。
- 余丹峰蔡德鸿严婷刘锻李迪刘海明杨锐张振张桦
- 关键词：化学因子胰岛素分泌细胞
- NOD鼠来源诱导性多能干细胞系的建立及其鉴定
- 2012年
- 利用逆转录病毒将Oct4、Sox2、Klf4三个干细胞基因导入NOD鼠尾成纤维细胞，将其诱导为多能干细胞．通过形态观察、干细胞标志检测及多能性分析等方面对其进行鉴定，结果表明该NOD鼠来源诱导性多能十细胞具有类似胚胎干细胞（embryonic stein cells，ES）的特性，表达Es相关基因及蛋h，具有多向分化潜能。来源于NOD鼠体细胞的诱导性多能干细胞有助于构建研究1型糖尿病的体外疾病模型。
- 刘海明张振杨力杨锐杨晓燕陈客平孙嘉吴礼凤吴焜陈宏黄震蔡德鸿张桦
- 关键词：诱导性多能干细胞NOD小鼠疾病模型
- 小鼠胚胎成纤维细胞重编程为多能干细胞的实验研究
- 多潜能干细胞(pluripotentstemcells)是指能够自我更新并具有分化成多种细胞潜能的细胞，它在细胞替代治疗、基因治疗、发育生物学等研究中具有独特的作用及优越性。目前，最为人类所熟知的多潜能性干细胞是胚胎干细...
- 刘海明
- 关键词：胚胎成纤维细胞逆转录病毒重编程诱导性多潜能干细胞
- 文献传递
