刘海明
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
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- 荧光增白剂与增效蛋白对美国白蛾核型多角体病毒(HcNPV)的增效作用被引量：8
- 2013年
- 围食膜是昆虫中肠细胞与肠腔之间的一种防御性屏障,破坏围食膜即能促进病原微生物对昆虫的侵染。分别研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫Helicoverpa armigera颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus,HcNPV)的增效作用,分析了活体条件下FB28与En-Ha对美国白蛾幼虫围食膜的破坏作用,解释了其增效作用机理。生物测定结果表明,FB28和En-Ha均能够影响围食膜蛋白的表达谱,提高HcNPV的感染率,使其毒力显著提高:单独饲喂HcNPV时的LC50值为1.11×105PIBs/mL,添加FB28和En-Ha后,其LC50值分别降低为1.91×103和7.70×103PIBs/mL,增效比值(SR)分别为58.12和14.42。SDS-PAGE电泳结果发现:用FB28饲喂处理幼虫后,分子质量为60 ku的蛋白条带消失,37 ku的新蛋白条带逐渐出现;幼虫摄取含有En-Ha的饲料后,分子质量为75 ku的蛋白条带消失,44.3 ku的新蛋白条带逐渐出现。经过10～24 h后,FB28和En-Ha处理的幼虫围食膜都能够恢复正常,表明其破坏作用是短暂的。
- 刘海明周洪旭李长友
- 关键词：荧光增白剂增效蛋白美国白蛾围食膜核型多角体病毒
- 美国白蛾中肠cDNA文库的构建及两种增效因子对其围食膜的影响
- 刘海明
- 美国白蛾围食膜结构的初步研究被引量：5
- 2012年
- 美国白蛾是一种严重危害园林树木的检疫害虫,而围食膜是害虫生物防治的潜在靶标。应用生化技术,初步分析了美国白蛾围食膜蛋白种类、蛋白和糖的含量,测定荧光增白剂FB28对围食膜的影响。结果表明:美国白蛾围食膜富有弹性,韧性强,很容易得到完整的围食膜,主要有蛋白质、糖类和几丁质组成,其蛋白质含量为32.26%,糖类含量为7.71%。经SDS-PAGE测定,美国白蛾围食膜有14条蛋白带,分子量在7～220 ku之间。研究发现,荧光增白剂FB28能够破坏美国白蛾围食膜,而2%FB28离体处理围食膜12 h,降解的蛋白质最多,为应用FB28与微生物杀虫剂联合防治美国白蛾提供了理论依据。
- 刘海明李长友周洪旭
- 关键词：美国白蛾围食膜
- 美国白蛾中肠cDNA表达文库的构建与鉴定被引量：1
- 2014年
- 美国白蛾是一种重要的外来入侵性害虫，其围食膜是害虫生物防治的潜在靶标。本研究以美国白蛾中肠为材料，通过提取其总RNA、分离纯化mRNA、反转录合成cDNA等方法，构建了美国白蛾中肠cDNA表达文库。测得文库的原始滴度为4．08×10^5pfu／mL，蓝白斑鉴定该文库的重组率为95．7％，插入片段大小在0．8~2．3kb之间，平均长度为1．77kb。将所得到原始文库扩增后进行保存，检测扩增文库滴度为3．92×10^8pfu／mL。美国白蛾中肠cDNA表达文库的成功构建为克隆美国白蛾围食膜蛋白基因，开发环保型微生物杀虫剂提供可靠的理论依据。
- 刘海明宋雯雯谭秀梅郑桂玲李长友周洪旭
- 关键词：美国白蛾围食膜CDNA文库基因克隆
- 华北大黑鳃金龟中肠丝氨酸蛋白酶cDNA克隆、序列分析及表达被引量：9
- 2012年
- 丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食膜蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDNA序列,命名为HoSP1(GenBank登录号为FJ573146)。序列分析表明,该基因长902bp,开放阅读框(ORF)长783bp,编码260个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.7kDa和4.19,不含有N-糖基化位点,但在Thr157处有一个O-糖基化位点,含有6个保守的半胱氨酸残基,组成3对二硫键,对于维持蛋白质的三级结构起着重要的作用。通过与几种丝氨酸蛋白酶的比对发现,该酶具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心,与褐新西兰肋翅鳃金龟Costelytra zealandica的14种丝氨酸蛋白酶有明显的相似性,其中与CzSP3的序列一致性最高,为52.47%。把该基因与pET21b载体重组后,进行体外表达,以BTEE为底物,测得该酶的活力为0.0378μmol/mg·min。HoSP1基因的克隆及体外表达为进一步研究该酶在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能提供了依据。
- 刘海明郑桂玲李长友周洪旭
- 关键词：华北大黑鳃金龟CDNA表达文库丝氨酸蛋白酶体外表达
