刘绍辉
- 作品数：7 被引量：0H指数：0
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- 相关领域：生物学更多>>
- 一种筛选激活潜伏感染HIV-1化合物的T淋巴细胞及其制备方法
- 本发明属于基因工程和细胞工程领域，涉及一种用于筛选再次激活潜伏感染HIV-1化合物的人T淋巴细胞系模型及其制备方法。本发明提供了一种筛选激活潜伏感染HIV-1药物的T淋巴细胞，该细胞是被携带报告基因的HIV慢病毒感染同时...
- 朱焕章辛清婷刘绍辉唐丽莎余龙
- 文献传递
- 源于法语的英语词汇及其在大学英语中的教学
- 刘绍辉
- 关键词：英语词汇大学英语教学
- ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定
- 2010年
- DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PCR和克隆技术在pET22b原核表达载体上构建ΦC31整合酶重组截短突变体表达质粒,将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达,经镍柱纯化获得了纯度达90%以上的重组蛋白,分子量也与预期大小一致,Western印迹确定了重组蛋白的特异性.凝胶迁移滞后实验显示野生型以及截短突变体蛋白ΦC311-528、ΦC311-472、ΦC311-413能与细菌附着位点DNAattB和噬菌体附着位点DNAattP结合的条带,而截短突变体ΦC311-353、ΦC311-279、ΦC311-120观察不到相应的结合条带.6个截短突变体质粒在体内重组活性蓝白斑实验中均表现为蓝斑,显示出皆丧失体内重组活性.研究证实,ΦC31整合酶半胱氨酸富集域(第353～413位氨基酸)具有DNA结合的功能,而C末端缬氨酸富集区(第528～613位氨基酸)也与其重组活性相关.这为进一步了解ΦC31整合酶的结构与功能,最终引导其结构进化,提高其特异性和整合效率奠定了基础.
- 辛清婷马金芳王玮刘绍辉李荣秀朱焕章
- 关键词：ΦC31整合酶原核表达和纯化
- φC31位点特异性整合酶保守残基的大规模定向突变及其锌指结构域的鉴定和功能分析
- 链霉菌噬菌体ΦC31位点特异性整合酶在不需要任何辅助因子的情况下可将带有attB的外源核苷酸序列位点特异高效的整合到哺乳动物细胞基因组的假attP位点上,因而,该整合酶系统已成为在哺乳动物细胞中进行转基因位点特异性重组操...
- 刘绍辉
- 关键词：蛋白表达纯化重组活性锌指结构
- 一种位点特异整合性慢病毒载体系统及其制备方法
- 本发明属于基因工程领域，涉及一种位点特异整合性慢病毒载体及其制备方法。该载体系统由FattbC31UGW质粒、CMVΔ8.9-D64N/D116N和包膜质粒VSVG组成。为了克服慢病毒载体系统随机整合导致插入突变之风险，...
- 朱焕章刘绍辉辛清婷余龙
- 文献传递
- 一种筛选激活潜伏感染HIV－1化合物的T淋巴细胞及其制备方法
- 本发明属于基因工程和细胞工程领域，涉及一种用于筛选再次激活潜伏感染HIV－1化合物的人T淋巴细胞系模型及其制备方法。本发明提供了一种筛选激活潜伏感染HIV－1药物的T淋巴细胞，该细胞是被携带报告基因的HIV慢病毒感染同时...
- 朱焕章辛清婷刘绍辉唐丽莎余龙
- 文献传递
- 一种位点特异整合性慢病毒载体系统及其制备方法
- 本发明属于基因工程领域，涉及一种位点特异整合性慢病毒载体及其制备方法。该载体系统由FattbC31UGW质粒、CMVΔ8.9－D64N/D116N和包膜质粒VSVG组成。为了克服慢病毒载体系统随机整合导致插入突变之风险，...
- 朱焕章刘绍辉辛清婷余龙
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