刘鑫
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：北京协和医学院血液病医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划协和青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非甾体类抗炎药在老年患者中的安全应用
- 目的：非甾体抗炎药(Non-steroidal Anti-inflammatory Drugs,NSAIDs)具有消炎、解热、镇痛、抗风湿等药理作用,临床广泛应用于类风湿性关节炎、骨关节炎、多种发热和各种疼痛症状的缓解....
- 刘鑫徐小薇
- 关键词：非甾体类抗炎药老年患者安全用药
- ERK信号通路在人胚胎干细胞造血分化中的作用研究被引量：2
- 2017年
- 细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路在斑马鱼及小鼠造血发生中发挥着重要作用,但其在人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)造血分化中的作用尚不清楚。该研究利用h ESCs单层造血分化模型及ERK信号通路抑制剂PD98059探索了ERK信号通路在h ESCs造血分化中的作用。采用免疫荧光技术、流式细胞术分析发现,PD98059能够显著抑制CD43^+造血干/祖细胞的产生。进一步的研究发现,PD98059的作用阶段为APLNR+侧板中胚层产生阶段,在该作用阶段添加PD98059与造血分化全程添加对CD43^+造血干/祖细胞产生的抑制效果一致。该研究结果表明,抑制ERK信号通路通过抑制侧板中胚层细胞的产生而抑制h ESCs造血分化。该研究为建立体外h ESCs高效造血分化体系及规模化产生功能性血细胞奠定了理论基础。
- 王洪涛刘鑫王梦鸽苏培张磊升刘翠翠王钰吴丹涂茜周家喜
- 关键词：人胚胎干细胞造血分化ERK信号通路
- 一种高效的人胚胎干细胞早期造血分化和功能筛选模型的建立
- 2013年
- 人胚胎干细胞具有分化为造血前体细胞及各种功能血细胞的潜能.但是,目前的分化筛选模型定向诱导分化效率很低,分化程序复杂且较难建立,分化的细胞功能存在缺陷,这些严重影响了对人胚胎干细胞造血分化和功能成熟分子机理的了解.所以,迫切需要建立一种简单且方便进行基因操作的高效的造血分化和功能筛选模型,用于揭示分化过程中动态的分子信号和实时调控机理.本研究中,采用分步法在不依赖血清及基质细胞的条件下,建立了一种高效分化产生造血前体细胞的方法,CD34+CD31+造血前体细胞的比例可达到25%.产生的造血前体细胞可以进一步诱导分化为红系、粒系及粒-巨噬系集落.此外,携带针对T基因干扰shRNA的慢病毒可高效感染人胚胎干细胞,实现高效干扰,调控造血分化效率.本研究建立了一种高效分化产生造血前体细胞的方法,同时表明此模型可以有效与shRNA文库结合,筛选调控人胚胎干细胞造血分化的关键基因,为揭示人胚胎干细胞造血分化机理,以及设计更加完善的分化体系高效获得功能成熟的血细胞用于药物筛选及细胞治疗打下了基础.
- 庞素蕾吴清清田莎苏培白杨高洁杨亦青刘鑫朱正茂许元富周家喜
- 关键词：人胚胎干细胞造血分化
- 利用CRISPR/Cas9技术建立诱导性敲除MEIS1基因的HEK293T细胞株
- 2016年
- CRISPR/Cas9是新一代基因组编辑技术,可简便快捷地在哺乳动物细胞对基因进行敲除、敲入。但常规的CRISPR/Cas9表达系统直接转染效果差、病毒包装效率低,极大地限制了CRISPR/Cas9系统的广泛使用。该研究应用Tet-on系统,建立了Dox诱导Cas9表达的293T细胞株,命名为293T-i Cas9。MEIS1(myeloid ectropic viral integration site 1)是TALE(three amino acid loop extension)同源域家族的转录因子,其在白血病发生发展、胚胎造血系统发育及神经系统发育中有重要作用,但其作用机制仍未完全明确。将靶向MEIS1 Exon3的sg MEIS1表达载体转入293T-iCas9,SURVEYOR实验和Western blot检测结果表明,sg MEIS1有效地指导Cas9进行基因组编辑。最终经测序和Western blot结果证明,成功建立了MEIS1敲除细胞株,这为研究MEIS1的功能提供了重要的工具。
- 张明智王梦鸽王洪涛苏培刘鑫张磊升刘翠翠王钰吴丹周家喜彭莎
- 关键词：基因敲除
- 利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系被引量：11
- 2015年
- CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sg RNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sg RNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。
- 卢利莎白杨刘鑫王洪涛高洁杨亦青苏培刘翠翠王钰张磊升熊涛周家喜
- 关键词：基因敲除
- DMSO促进人胚胎干细胞体外造血分化
- 2017年
- 目的:探讨DMSO在人胚胎干细胞造血分化中的作用。方法:利用已建立的人胚胎干细胞逐级诱导分化体系,通过流式细胞术分析并结合免疫荧光测定研究DMSO在造血分化中的作用,同时通过在不同时间点添加DMSO,确定其发挥作用的窗口期。结果:免疫荧光及流式细胞术分析发现,在人胚胎干细胞造血分化过程中添加DMSO显著促进CD43^+造血祖细胞的产生;流式细胞术分析发现,DMSO显著促进APLNR+侧板中胚层细胞和CD31^+CD34^+生血内皮细胞的产生;在侧板中胚层细胞产生的窗口添加DMSO显著促进CD31^+CD34^+生血内皮细胞和CD43^+造血祖细胞的产生。结论:DMSO通过促进侧板中胚层的产生促进人胚胎干细胞造血分化能力,在侧板中胚层发生窗口添加DMSO能够显著促进造血祖细胞的产生。
- 王洪涛王梦鸽刘鑫苏培张磊升刘翠翠王钰吴丹涂茜周家喜
- 关键词：人胚胎干细胞造血分化DMSO
