目的利用基因芯片技术寻找原发性肝癌患者与正常人外周血之间差异表达基因,拟为原发性肝癌的早期诊断提供分子标记。方法利用Agilent Human 1 AOligo Microarray商品化基因芯片,对原发性肝癌患者和正常人各50例外周血基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果按差异显著性标准,从20176条基因中筛选出在肝癌患者外周血表达上调2倍的基因49个,表达下调2倍的基因162个,包括原癌基因和抑癌基因、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白相关基因、蛋白翻译和合成相关基因、代谢相关基因、细胞周期蛋白相关基因、细胞骨架相关基因、细胞凋亡相关基因、DNA合成和修复相关基因等。结论从肝癌患者外周血中,利用基因表达谱芯片技术可以筛选出与肝癌发生相关的基因群。
目的研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响。方法利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变，使编码子249由Arg变成Ser，根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细胞，并通过测序确定该ES细胞的p53 249编码子已经由Arg变成Ser，然后将含突变而不含筛选标记的ES细胞微注射到从Hprt-／-小鼠收集的囊胚中，将注射过的囊胚植入假孕的雌性小鼠子宫，到第14天取小鼠胚胎EF细胞，用含HAT的培养液EDMEM含10％FCS，glutamine，antibiotics，50 mM mecaptoethanol，和HAT（0．016mg of hypoxanthine／ml，0．01 mM aminopterin，0．0048mg of thymidine／m1）]筛选出从ES细胞分化而成的MEF细胞，经测序证实该细胞含有249Arg到Ser的突变后，该细胞用于研究。利用细胞流式仪检测该突变对MEF细胞周期及凋亡的影响，并利用Western检测相关蛋白的表达。结果（1）用uV处理EF细胞后，含p53249编码子突变的EF细胞凋亡百分数，较含野生型p53的EF细胞凋亡百分数明显减少（P〈0．05）。（2）用UV处理EF细胞后，含p53 249编码子突变的EF细胞对UV诱导的G1／G0细胞周期阻滞作用减弱。（3）用UV处理细胞后，含p53 249编码子突变EF细胞的p53的表达，与含野生型p53EF细胞p53的表达没有差别，但含p53249编码子突变EF细胞的BAX和p21的表达，较含野生型p53EF细胞的BAX和P21的表达减少。结论p53 249编码子突变可以减弱p53在UV诱导MEF细胞周期阻滞和凋亡过程中的作用，但对p53的表达没有影响。
