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华南四省食品中空肠弯曲菌分离株的毒力相关基因分析和ERIC-PCR分型被引量：13: 2014年; 【目的】了解空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)在华南四省食品中的污染状况及其遗传多样性,为食源性病原菌的风险监测和控制提供基础数据。【方法】采用传统国标和MPN组合的方法对华南四省市售生鲜禽畜肉及其制品、生食蔬菜、熟食、水产品、速冻食品、奶制品、食用菌7大类食品进行C.jejuni污染调查,对分离到的C.jejuni菌株进行12种毒力相关基因检测分析和ERIC-PCR分型。【结果】2011-2012年共检测样品558份,检出阳性样品14份,检出率2.51%,其中肉与肉制品的检出率达13.2%,污染量达8.77 MPN/g,获得C.jejuni14株。毒力相关基因分析显示9种毒力相关基因的携带率超过50%,而pldA和wlaN的携带率均为14.3%,virB11的携带率为0。ERIC-PCR分析结果显示15株C.jejuni可分为3簇共10种基因型,其中簇A中有4株的指纹图谱基本相同。【结论】华南四省中的生鲜禽肉类样品,存在不同程度的空肠弯曲菌污染,尤其是福州的鸭肉样品,其MPN值大于110 MPN/g,应加强生禽肉类的食品安全防控。; 郑扬云吴清平吴葵张菊梅郭伟鹏吴克刚; 关键词：空肠弯曲菌毒力相关基因

乙醇促进副溶血性弧菌直接耐热溶血素的基因表达被引量：2: 2015年; 研究乙醇对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)直接耐热溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)产生和它的编码基因tdh表达的影响。以0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、8.0%乙醇处理2株带有tdh副溶血性弧菌ATCC33847和SZ32,研究对副溶血性弧菌有氧或者无氧生长的影响。选取1.0%乙醇处理来研究TDH产量和tdh表达变化。使用TDH抗血清试剂盒测定副溶血性弧菌培养液上清中TDH水平;使用荧光定量PCR方法分析tdh基因表达状况。低浓度(0.5%、1.0%、2.0%)乙醇存在时,副溶血弧菌菌株的生长未受到显著影响,乙醇浓度4.0%时副溶血性弧菌生长受到明显抑制,8%时未见有细菌生长。1.0%乙醇处理副溶血性弧菌培养液上清中TDH水平较未处理显著上升。胞内tdh表达水平升高,ATCC33847在有氧和无氧时分别升高到6.6倍和5.7倍,SZ32在有氧和无氧时分别升高到5.9倍和8.6倍。乙醇能够促进tdh基因表达从而使得TDH蛋白产量升高。本研究还比较了甲醇、乙醇、正丙醇对tdh表达的影响,发现它们对tdh表达均具有促进作用但相互之间没有明显差异。; 吴葵吴清平张菊梅乐贤松; 关键词：乙醇副溶血性弧菌

群体感应及其在动物病原菌致病中的作用被引量：7: 2009年; 群体感应是指微生物群体某些基因的表达受到与群体密度相关的信号分子调控的现象。微生物以酰基高丝氨酸内酯化合物、某些短肽分子、呋喃酮类化合物、以及一些小分子物质为信号分子,介导不同的群体感应系统。各群体感应系统之间以平行协同或层次串连的方式组织起来调控微生物各种基因表达。众多病原菌致病基因的表达与群体感应密切相关,主要表现在:群体感应帮助微生物对宿主的侵袭和定殖;调控毒力因子的产生和作用于宿主;以及介导病原菌对宿主的免疫能力和药物抗性。进行群体感应对微生物致病过程调控的研究,将有利于从群体感应入手进行病原菌防控新策略的探索。; 吴清平吴葵叶应旺董晓晖张菊梅; 关键词：自体诱导物病原菌毒力因子生物膜

副溶血性弧菌群体感应蛋白CqsA的原核表达被引量：1: 2012年; 副溶血性弧菌CqsA是一种推测的信号分子合成酶,其合成的信号分子在群体感应系统中可能具有重要的调控作用。从副溶血性弧菌ATCC17802中克隆cqsA基因,构建重组质粒pET22b-cqsA。测序后转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,使用SDS-PAGE分析融合蛋白的表达状况,并通过6×His-Tag进行Western blotting检测。结果显示,经0.6 mmol/L IPTG诱导4h,目的基因以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为49 kD,与理论值相符(437 aa)。表明副溶血性弧菌群体感应蛋白CqsA在大肠杆菌中成功表达,为后续寻找副溶血性弧菌群体感应信号分子,进一步探索副溶血性弧菌群体感应系统提供参考。; 李强吴葵张菊梅吴清平徐明芳; 关键词：副溶血性弧菌原核表达

阪崎肠杆菌分类与致病机制被引量：12: 2010年; 作为一种重要的食源性致病菌,阪崎肠杆菌因能引起新生婴幼儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎而受到了政府和社会的高度重视。2008年,阪崎肠杆菌被提议重新另立为隶属于肠杆菌科的一个包含有5个新种的新属——Cronobacter gen.Nov.。新属的五个种之间毒力作用存在差异,外膜蛋白A在黏附和抗吞噬过程中发挥了重要作用,同时本属菌株的侵入力在宿主细胞间的紧密联系被破坏时显著提高,但是一些肠道益生菌能抑制该菌侵入。目前阪崎肠杆菌的致病研究还比较分散,没有形成系统性,详细的致病机制期待进一步阐明。; 吴清平董晓晖张菊梅叶应旺徐晓可杨小鹃吴葵; 关键词：阪崎肠杆菌致病机制

空肠弯曲菌分离株ERIC-PCR分型和生化分型的比较研究被引量：7: 2013年; 建立空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)的ERIC-PCR分子生物学分型技术,比较ERIC-PCR分型和生化分型的分型效果。从菌株TY1273出发,运用L16(54)正交试验,对Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素在较大范围水平内进行反应体系条件摸索,得到一个初步的优化体系;在此基础之上进行单因素的进一步小范围水平内的微调优化,得到最终的优化体系;最后以优化的ERIC-PCR方法对24株C.jejuni分离株分型;同时根据API Campy生化反应结果进行生化分型,比较ERIC-PCR分子分型方法和生化分型方法。结果显示ERIC-PCR方法将24株菌扩增均得到大小在100 bp-3000 bp之间的条带,并可将其分为22个基因型,分辨系数为0.92,具有较高的分辨力。生化分型将24株菌分为19个生化型,显示了菌株基因的多样性。表明ERIC-PCR技术比生化分型能更好的体现菌株的遗传多样性,且具有简便和分辨力搞等优点,可用于C.jejuni的多样性研究。; 郑扬云吴清平吴克刚吴葵张菊梅; 关键词：空肠弯曲菌 ERIC-PCR 分子分型

两种弧菌显色培养基在疑似副溶血性弧菌鉴定中的效果比较被引量：1: 2012年; 为了比较环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对食品中可疑菌株的初步鉴定作用,本文按国标(GB/T4789.7-2008)程序,以环凯和科玛嘉弧菌显色培养基初步鉴定硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂(TCBS)的副溶血性弧菌可疑菌株,最后用API和MID鉴定证实。在97份食品样品的定性与定量检测中,TCBS疑似菌株有109株,对应样品有31份。环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对109株TCBS可疑菌株初步鉴定的结果相同,均检出64株显紫色的可疑菌株,对应样品22份。经API和MID确认,阳性菌株60株,阳性样品为22份,阳性率为22.68%。两种培养基初步鉴定TCBS可疑菌株的敏感性、特异性和符合性均分别为100.00%、91.84%和96.33%。环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对TCBS的可疑菌株具有较好的初步鉴定效果。; 徐晓可吴清平张菊梅吴葵张淑红郭伟鹏; 关键词：食品副溶血性弧菌

副溶血性弧菌vanM基因原核表达及酰基高丝氨酸内酯信号分子鉴定研究被引量：1: 2015年; 从副溶血性弧菌ATCC33847扩增van M基因,连接到p MD19-T载体进行克隆测序和序列比对;将测序正确的van M序列经Nde I和Eco RI酶切后连接到p ET22b;以IPTG诱导van M基因在BL21(DE3)中表达;利用acyl-HSL报告菌株KYC55检测ATCC33847和带有van M基因的大肠杆菌的acyl-HSL活性;萃取Van M合成的acyl-HSL信号分子,经HPLC-MS测试后与标准品进行对比分析。成功测序了ATCC33847 van M基因,与鳗弧菌van M基因序列相似性达到57%;并构建了p ET22b-van M表达质粒,以0.6 mmol/L IPTG诱导BL21(DE3)表达系统时Van M融合蛋白表达量最大;经过KYC55检测ATCC33847和带有p ET22b-van M的大肠杆菌能够产生acyl-HSL活性;HPLC-MS分析显示,ATCC33847和携带p ET22b-van M的BL21(DE3)萃取物中含有3-Hydroxybutanoyl-HSL(3-OH-C4-HSL)和3-Hydroxydecanoyl-HSL(3-OH-C10-HSL)信号分子。本研究克隆表达了副溶血性弧菌van M,首次证明了副溶血性弧菌利用Van M信号分子合成酶合成acyl-HSL信号分子3-OH-C4-HSL和3-OH-C10-HSL。; 吴葵吴清平张菊梅徐晓可; 关键词：副溶血性弧菌 VAN 原核表达酰基高丝氨酸内酯

珠江三角洲地区副溶血性弧菌遗传多样性和致病性相关研究被引量：3: 2015年; 副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,本文研究了珠江三角洲地区副溶血性弧菌的遗传多样性。从54株副溶血性弧菌出发,研究了它们的API20E生化反应、抗生素耐药性、O抗原血清型,进行了ERIC-PCR分子分型,并检测了两种毒力基因tdh和trh的分布。54株副溶血性弧菌可被分为6个生化反应类群,主要类群为Biochem-A;菌株对萘啶酮酸、环丙沙星、氯霉素均不耐药,而对氨苄青霉素耐药率最高,耐药率0.88;O抗原血清型分别为O1、O2、O3、O4、O5、O6、O8、O10、O11,O2为主要血清型,O3为临床主要血清型;ERIC-PCR分子分型将54株菌分成47个型别,ERIC-PCR图谱相似性大于0.80的类群有12个,没有明显的优势类群;有12株副溶血性弧菌为tdh阳性,阳性率为0.22,其中10株为临床来源菌株;有2株副溶血性弧菌为trh阳性,阳性率为0.04,均为食品分离株。珠三角地区食品和临床来源的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性。; 吴葵吴清平张菊梅郭伟鹏; 关键词：副溶血性弧菌抗生素耐药性分子分型毒力基因

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吴葵

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