唐慧娴
- 作品数：9 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国药科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金重庆市卫生局中医药科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测法的建立被引量：8
- 2016年
- 目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。
- 邵靓婧张琪徐睿瑶唐慧娴韩一芳张锦海王长军
- 关键词：环介导等温扩增乙型肝炎病毒特异性灵敏度
- 2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶基因的克隆表达及酶活性测定
- 背景：猪链球菌(Streptococcus suis serotype,ss)是一种重要的人兽共患病病原,属于球菌科、链球菌属(Streptococci),革兰阳性细菌。该菌可引起猪脑膜炎、关节炎、败血症甚至急性死亡。目...
- 钱思彤龚秀芳唐慧娴王依潘秀珍王长军
- 2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶基因的克隆表达及酶活性测定被引量：1
- 2017年
- 目的:克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶(NagA)的编码基因,并测定其酶活性。方法:根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA(SSU05_1259)基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a:NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性。结果:在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的Nag A相对分子质量约为43×10~3,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13mmol/L。2型猪链球菌NagA的体外酶活为124U/mL,酶比活为78U/mg。结论:在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性。
- 钱思彤龚秀芳唐慧娴王依潘秀珍王长军
- 关键词：2型猪链球菌原核表达酶活性
- 2型猪链球菌SSU05_0736基因敲除株的构建及其特性分析被引量：2
- 2016年
- 目的 2型猪链球菌是重要的人畜共患病病原菌,鉴定现有的和发掘新的毒力因子依然是该领域的研究热点。探讨SSU05_0736编码的c AMP受体蛋白在2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)中国强毒株05ZYH33中的作用机制,初步分析SSU05_0736基因敲除株的生物学特性,为进一步研究猪链球菌可能的毒力因子及其致病机制提供研究基础。方法利用同源重组原理构建并筛选由壮观霉素抗性基因(Spcr)替换S.suis 2中SSU05_0736的基因敲除株Δ0736,系统比较分析野毒株与敲除株的生物学特性,同时将BALB/c小鼠作为动物感染模型来探究敲除株的毒力。结果通过组合PCR、反转录PCR(RT-PCR)等方法鉴定并成功构建基因敲除株Δ0736,其在菌落形态、溶血活性及对小鼠致病力等方面与野毒株无显著差异;两者生长速率相比,敲除株的生长较野毒株迟缓但其在对数期增长速率较大。结论 SSU05_0736基因的缺失并未使猪链球菌2型强毒株05ZYH33的毒力发生显著改变,推测SSU05_0736基因并非毒力决定因子,但与野毒株相比敲除株在生长速率尤其对数期增长速率较大这一方面的改变,提示可对其代谢调控能力作进一步分析。
- 钟璟皓胡丹唐慧娴王依钱思彤龚秀芳潘秀珍王长军姚文兵
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除突变株
- 基于UHPLC技术的补骨脂指纹图谱研究被引量：3
- 2014年
- 目的:建立补骨脂药材的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱。方法:以Shim-pack XR-ODSⅢ(50 mm×2.0 mm,1.6μm)为色谱柱,乙腈-0.2%冰醋酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.1 mL·min-1,检测波长为246 nm,柱温45℃。结果:建立了补骨脂药材的UHPLC指纹图谱,标定10个共有色谱峰,并通过对照品比对指认了其中6个色谱峰。结论:该方法快速、可靠、重复性好,可为补骨脂药材的物质基础和质量控制方法的研究提供参考。
- 陈小川李紫微唐慧娴张小梅励娜
- 关键词：补骨脂指纹图谱超高效液相色谱
- HBV X基因突变促进肝癌发生的生物学机制被引量：1
- 2019年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因(HBx)羧基末端四个突变位点C1653T、T1753C及A1762T/G1764A致癌的生物学机制。方法利用体外基因合成和定点突变构建野生型和复合突变型HBx重组质粒,转染至人肝癌细胞HepG2筛选稳定表达细胞株。通过绘制细胞生长曲线(CCK8法)、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验比较转染空载体(Vector)、野生型HBx(WT)和突变型HBx(Combo)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果细胞生长曲线结果显示WT和Combo细胞的生长速率明显快于Vector(P<0.01),但WT和Combo之间差异无统计学意义(P>0.05)。平板克隆形成实验结果提示Combo细胞的克隆形成率显著高于WT(31.90%vs16.00%,P<0.01),而WT略高于Vector(12.46%,P<0.05)。划痕实验结果显示Combo细胞48h迁移距离显著高于WT细胞(P<0.01),而WT细胞显著高于Vector细胞(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示Combo细胞穿过小室的细胞数最多([227.80±17.85)个],其次为WT细胞([181.75±10.06)个],Vector细胞最少([85.72±3.19)个],三者两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论野生型和突变型HBx均可显著增强HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且突变型HBx促进细胞恶性生物学行为的能力显著强于野生型HBx,这为明确HBV致癌机制提供了一定的依据。
- 张琪唐慧娴韩一芳叶福强王太武吕恒张锦海
- 关键词：HBVX基因病毒突变细胞侵袭
- CRISPR/Cas9技术用于清除乙型肝炎病毒的研究进展被引量：6
- 2017年
- 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染作为中国乃至全球的重大健康问题,使乙肝患者长期处于肝硬化及肝癌的巨大威胁中。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV在肝细胞内复制中必不可少的一环,是乙肝彻底治愈的关键。然而,目前针对乙肝的治疗药物尚无法彻底清除肝细胞内的ccc DNA,且服药周期长、副作用大。利用新兴的基因编辑技术CRISPR/Cas9,人工设计靶向HBV系统可高效清除潜藏在胞内的ccc DNA,为乙肝的彻底治愈带来希望。文章就CRISPR/Cas9技术用于清除HBV的研究进行综述。
- 唐慧娴王长军张琪
- 关键词：乙肝病毒共价闭合环状DNA
- 乳铁蛋白作为药物载体的研究进展被引量：11
- 2015年
- 乳铁蛋白作为一种从乳汁中提取而得的属于先天免疫系统的食品蛋白,除了具有能够结合和运输铁离子的主要功能外,还具有广谱抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗辐射、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等广泛的生物学活性。目前常作为食品、化妆品的添加剂。随着研究的深入,乳铁蛋白在药用领域作为药物载体的研究越来越受到广泛关注。根据乳铁蛋白作为药物载体的不同特点,本文分类概述其在脑靶向、肝肿瘤靶向、肺肿瘤靶向和口服给药系统中的研究进展。
- 唐慧娴张振海赵志英吕慧侠
- 关键词：乳铁蛋白药物载体靶向口服给药
