- 高压氧治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤脑microRNA表达谱的变化
- 目的 研究高压氧治疗(Hyperbaric oxygen therapy,HBO)新生大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑组织MicroRNAs的动态变化,寻找H...
- 姚跃杨于嘉王霞韦玉佳何学华方成志王庆红余小河刘沉涛
- 高压氧影响离体神经干细胞分化的量效及时效关系被引量：3
- 2010年
- 目的探讨不同压力和不同稳压时间下高压氧(HBO)对离体神经干细胞(NSCs)分化的影响,旨在找出HBO治疗的最佳压力与稳压时间。方法取出生3日内新生Sprague-Dawley大鼠的脑皮质组织,在含B27、bFGF和EGF的DMEM/F12培养基中悬浮培养NSCs。将传至2～3代的NSCs随机分为不做处理的对照组(CON)和HBO处理组。HBO处理组根据所用压力和稳压时间分为6组:NSCs分别给予1个绝对大气压(ATA)、2 ATA、3 ATA的HBO处理,每种压力再分别给予30和60 min两种稳压时间。HBO后继续培养24 h,7组细胞在同一时间行免疫荧光染色,荧光显微镜下观察NSCs分化为NSE阳性细胞的百分率。结果 NSCs分化为NSE阳性细胞的分化率从低到高依次为CON组(3.72±0.88%),1ATA-30 min组(3.85±0.44%),1ATA-60 min组(5.45±0.52%),3ATA-30 min组(6.08±0.57%),2ATA-30 min组(6.72±0.76%),3ATA-60 min组(7.89±0.62%),2ATA-60min(9.17±0.50%);除1ATA-30 min组外,其余各HBO组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同一压力下60min组与30min组之间的差异及2ATA-60 min组与其他各组之间的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 2 ATA压力下稳压时间为60 min的HBO促进NSCs向神经元分化的作用最强。
- 谌崇峰杨于嘉王庆红姚跃李萌
- 关键词：高压氧分化神经干细胞
- 高压氧治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的不良反应被引量：5
- 2009年
- 目的探讨高压氧治疗对HIBD新生大鼠视网膜血管和肺组织的不良反应。方法将出生7日的SD新生大鼠162只随机分为6组:正常对照组(n=22),HIBD组(n=20),高体积分数氧组(高氧组,n=32),高压空气组(n=16),高压氧组(n=36),高氧加高压氧组(n=36)。高压空气组和高压氧组于HIBD模型制作后2h分别给予高压空气和高压氧(2个大气压)处理1h,1次/d,连续7d。高氧组于HIBD制作后给予900～950mL/L氧,连续7d。高氧加高压氧组于HIBD模型制作后进行高氧处理,同时予高压氧治疗,1次/d,连续7d。21日龄处死动物,TUNEL法检测各组海马CA1区神经细胞凋亡;HE染色观察其眼球和肺组织病变;墨汁染色视网膜铺片观察其血管增生情况;免疫组织化学观察其血管内皮生长因子(VEGF)表达;ELISA法检测其脑组织8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平。结果1.HIBD组、高压空气组、高氧组和高氧加高压氧组脑组织海马CA1区凋亡细胞数较正常对照组明显增多(Pa<0.01),高压氧组无明显增加。2.高氧组和高氧加高压氧组视网膜新生血管细胞核计数较正常对照组明显增多(Pa<0.01),高压氧组增加不明显。3.视网膜铺片显示高氧组和高氧加高压氧组视网膜血管明显增生,但HIBD组、高压空气组、高压氧组无明显血管增生现象。4.高氧组和高氧加高压氧组视网膜VEGF较正常对照组明显表达(Pa<0.01)。5.肺组织HE染色观察到HIBD组、高压空气组和高压氧组结构均与正常对照组相似;高氧组和高氧加高压氧组肺泡样结构明显遭破坏,后者程度稍轻。6.脑组织8-iso-PGF2α水平在HIBD组、高压空气组和高压氧组均较正常对照组增加(Pa<0.01);高氧组和高氧加高压氧组均较高压氧组显著增高(Pa<0.01)。结论高压氧治疗对HIBD新生大鼠脑损伤有保护作用;高氧有刺激新生大鼠视网膜血管增生和肺组织损伤作用,而高压氧则无眼和肺的不良反应;高氧可加重HIBD后脑组织脂质�
- 祁伯祥王庆红杨于嘉李萌姚跃谌崇峰
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤高压氧高体积分数氧
- 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间窗高压氧治疗对神经细胞凋亡的影响
- 目的:缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是围生期新生儿脑损伤最常见的原因，可引起脑瘫、癫痫、智力低下以及学习障碍等一系列中枢神经系统异常，并可能发生严重的神经系统后遗...
- 姚跃
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤高压氧治疗神经细胞细胞凋亡
- 文献传递
- Mir-let-7f对大鼠神经干细胞分化调控作用的实验研究
- 目的 近年来的研究表明,let-7在神经细胞分化的过程中表达增加,提示let-7家族可能参与调控神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的分化.但mir-let-7f在NSCs分化中的作用尚未见报道.本...
- 韦玉佳王霞姚跃胡沙雅何学华邓桢翰谢莉莉
- 靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选被引量：3
- 2010年
- 目的构建靶向β-连环蛋白（β-catenin）基因的shRNA的真核表达质粒，并筛选出沉默β-catenin基因效果最明显的shRNA表达质粒。方法设计3对针对β-catenin基因不同位点的shRNA片段，构建携带此shRNA片段的真核表达质粒（shRNA1—3）并行测序分析，电穿孔转染神经干细胞（neural stem cells NSCs），测定转染率，并分别采用RT—PCR及Western印迹检测β-catenin mRNA和蛋白表达情况，免疫组化方法检测shRNA对神经干细胞分化的影响。结果构建靶向β-catenin基因的shRNA真核表达重组质粒shRNA1，2，3。经筛选，NSCs转染shRNA3后，B—catenin RNA水平和蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组（0．08±0．00 vs 0．75±0．01，0．74±0．02；0．12±0．10，vs 0．56±0．02，0．65±0．01，P均〈0．01；与空白组和阴性对照组相比，shRNA3组NSCs分化为GFAP阳性细胞的百分率明显增加，分化为NSE阳性细胞的百分率明显减少（P〈0．05）。结论β—catenin RNA3对神经干细胞的β—catenin表达具有明显抑制作用，可影响细胞的分化。为研究wnt／β-catenin信号途径在NSCs生长分化中的作用奠定基础。
- 张晓英杨于嘉谌崇峰姚跃王庆红
- 关键词：Β-连环蛋白短发夹状RNA电穿孔
- 新生大鼠缺氧缺血脑损伤后脑microRNA表达的动态变化
- 目的 研究新生大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑组织MicroRNAs的动态变化,寻找潜在的基因调控靶点.方法 将64只7d龄新生大鼠随机分为缺氧缺血脑损伤后1...
- 姚跃杨于嘉王霞韦玉佳方成志何学华邓桢翰王庆红余小河
- 增加高压氧疗程对治疗时间窗延迟的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用被引量：14
- 2009年
- 目的探讨多疗程的高压氧(HBO)治疗对96h时间窗的缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的保护作用。方法7日龄Sprague-Dawley大鼠88只,随机分为正常对照组(CON)、HIBD组和HBO组。HBO组根据HBO治疗时间窗的不同分为2H,48H和96H组,即分别于HIBD后2,48和96h给予HBO;各亚组又根据不同疗程分成1疗程组(HBO-1)、2疗程(HBO-2)和3疗程组(HBO-3)。HBO组(压力为2ATA)每天给予HBO1次,连续7d为一疗程,休息3d后进入下一疗程。各组待96H组的3疗程亚组完成全部疗程后,即鼠龄38d(HIBD后31d)时一同处死。采用TUNEL染色检测大脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡;并采用NSE免疫组化方法检测各组皮层神经元数量。结果①HIBD组凋亡细胞数量明显高于CON组,同时NSE阳性细胞明显少于CON组(P<0.01)。②随着治疗时间窗的延迟,单疗程HBO对凋亡的抑制作用及对神经元的保护作用逐渐减弱。③在48H和96HHBO组,HBO对神经细胞凋亡的抑制作用及对神经细胞的保护作用随着疗程的增加而逐渐增强;但2HHBO组经过一疗程HBO治疗后,凋亡细胞数量已经减少至CON组水平,而且NSE阳性细胞数量增加也接近CON组,随着疗程增加不再有明显变化。结论①HIBD后2h给予一疗程的HBO治疗即可明显抑制神经细胞的凋亡及保护神经元;②增加疗程可增强治疗窗延迟的HBO对神经细胞凋亡的抑制与对神经元的保护作用。
- 王庆红杨于嘉谌崇峰姚跃李萌
- 关键词：高压氧缺氧缺血性脑损伤疗程新生大鼠
- 高压氧对大鼠骨髓间充质干细胞分化和Wnt3表达的影响被引量：1
- 2010年
- 背景:高压氧治疗可以促进缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞的增殖和分化,且其机制与Wnt信号通路的活化有关,但在体外高压氧对干细胞分化的影响是否也通过Wnt信号通路起作用目前尚未见相关报道。目的:观察高压氧对大鼠骨髓间充质干细胞分化的影响,认识其相关机制。方法:全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,贴壁纯化,取传至第3～5代细胞,加入含bFGF,EGF,B27的DMEM/F12培养基诱导培养24h。诱导后细胞随机分为2组,对照组未做任何处理,高压氧组给予0.10MPa的压力治疗,稳压时间60min,稳压期间平均氧浓度不低于90%。免疫荧光染色检测巢蛋白、NSE,GFAP,O4等抗体的表达,Western-blot法检测Wnt3蛋白的表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞用神经干细胞经典培养基诱导后巢蛋白呈阳性表达。与对照组比较,高压氧组NSE,O4阳性细胞分化率均显著增加(P<0.01),GFAP阳性细胞分化率无明显差异(P>0.05),Wnt3蛋白的表达明显升高(P<0.05)。高压氧可以促进骨髓间充质干细胞向神经元细胞和少突胶质细胞分化,但对星形胶质细胞的分化无明显影响,其机制可能与Wnt3蛋白的活化有关。
- 谌崇峰杨于嘉姚跃王庆红李萌
- 关键词：高压氧分化神经元少突胶质细胞骨髓间充质干细胞
- 不同疗程高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响被引量：15
- 2009年
- 目的探讨不同疗程高压氧(HBO)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法7日龄SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、HIBD组、HBO组,其中HBO组又分为HBO1疗程组[HBO-1,在HIBD2 h开始HBO治疗,HBO压力为0.1 MPa(2 ATA),稳压60 min,1次/d,7次为1疗程],2疗程组(HBO-2,予2个疗程HBO)和3疗程组(HBO-3,予3个疗程HBO)。疗程结束后(鼠龄35 d)取脑组织标本,采用5-溴-2-脱氧嘧啶核苷(BrdU)/神经巢蛋白(Nestin)免疫荧光双标法检测缺血侧侧脑室室管膜下区(SVZ区)和海马齿状回区(DG区)的内源性NSCs的变化。Western blot法检测缺血侧大脑半球Nes-tin蛋白变化。BrdU/神经元特异性烯醇化酶(NSE)和BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标法检测大脑皮层神经元和星形胶质细胞数量;TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡;并进行T迷宫试验、放射臂迷宫测试、足错误等行为学测试。结果1.HBO治疗后SVZ区BrdU+/Nestin+细胞随疗程增加而逐渐增加,以HBO-3组的阳性细胞数最多;2.各组大鼠的海马DG区均仅有极少量的BrdU+/Nestin+细胞表达,且随着HBO疗程的增加,BrdU+/Nestin+细胞表达无增加;3.大脑皮层BrdU+/NSE+细胞表达随HBO疗程增加逐渐增多,其中以HBO-3组的阳性细胞数最多;4.HIBD组可见较多GFAP+细胞,高于CON组和HBO组;且各组均仅有个别BrdU+/GFAP+细胞表达;5.Western blot显示HBO-3组Nestin蛋白表达高于其余各组;6.T迷宫、放射臂迷宫和足错误测试结果均表明随着HBO疗程的增加,疗效愈加显著。结论增加HBO疗程可促进HIBD新生大鼠SVZ区内源性NSCs皮层神经元细胞的增殖和分化。
- 王庆红杨于嘉谌崇峰李萌姚跃
- 关键词：高压氧疗程神经干细胞
