孙爽
- 作品数：8 被引量：77H指数：4
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- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目更多>>
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- 体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响被引量：21
- 2007年
- 体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.
- 刘忠华田江天郑重王振坤宋军尹智高力马海鹍孔庆然孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：体细胞核移植体外成熟胎牛血清
- 猪植入前胚胎体外培养条件的优化被引量：3
- 2009年
- 探讨了更换胚胎培养液及添加FBS、高渗透压和不同浓度VE对猪卵母细胞体外受精(IVF)和孤雌激活(PA)胚胎体外发育的影响,进一步优化了猪植入前胚胎体外培养体系。试验一:在第2天、第4天更换新的培养液(换液组),在换液基础上第4天更换为添加10%FBS的培养液(FBS组)。试验二:胚胎分别在0.05 mol/L蔗糖(蔗糖组)和138 mmol/L氯化钠(氯化钠组)的PZM-3(300~320 mOsmol)中培养2 d后移至PZM-3(288 mOsmol)中培养5 d。试验三:在培养液中分别添加50、100和200μmol/L VE。对照组均在PZM-3(288 mOsmol)中培养7 d。结果表明:试验一,IVF和PA胚胎FBS组囊胚率显著高于对照组和换液组(P<0.05);试验二,IVF胚胎氯化钠组卵裂率、囊胚率均显著高于对照组与蔗糖组(P<0.05);试验三,IVF胚胎添加100μmol/L VE组囊胚率显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,在换液的基础上添加FBS有利于猪IVF和PA胚胎的体外发育;氯化钠调节的高渗透压可以促进猪IVF胚胎的早期发育;添加100μmol/L VE可以改善猪IVF胚胎的体外发育体系。
- 王媛孙爽刘仲凤吕明王峰郇延军周佳勃刘忠华
- 关键词：FBS渗透压体外受精孤雌激活
- 利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞被引量：3
- 2009年
- 目的利用亮甲酚蓝（BCB）染色提高猪体外胚胎培养体系的效率。方法对猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析。结果着色组（BCB＋）猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ（MⅡ）期的比率（91.6%）显著高于未着色组（BCB-）（64.0%）和对照组猪卵母细胞（77.5%）（P〈0.05）;BCB＋孤雌猪胚胎的囊胚率（34.9%）显著高于BCB-（9.5%）和对照组（23.1%）（P〈0.05）;BCB＋核移植猪胚胎的囊胚率（23.0%）显著高于BCB-（5.0%）和对照组（14.1%）（P〈0.05）。结论BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法。
- 田江天王振坤郑重孙爽徐萌刘忠华
- 关键词：卵母细胞核移植
- 不同激活条件及半胱氨酸处理对猪ICSI胚胎发育影响研究被引量：2
- 2010年
- 本试验探讨了不同辅助激活方法(Calciumionophore A23187激活、Calciumionophore A23187+6-DMAP联合激活和电激活)、不同精子预处理方法(液氮冻融处理和0.1%Triton X-100处理)和在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养不同时间(0 h、4 h、12 h和168 h)对猪卵母细胞内单精子注射(ICSI)胚胎体外发育的影响。结果显示:与无辅助激活相比,A23187+6-DMAP联合激活和电激活均能显著提高ICSI卵母细胞的激活率、卵裂率和囊胚率(P<0.05),A23187+6-DMAP联合激活能显著提高ICSI卵母细胞的受精率(P<0.05)。液氮冻融精子组ICSI卵母细胞的雄原核形成率显著高于活精子组(P<0.05)。在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养4 h的ICSI卵母细胞受精率、雄原核形成率和囊胚率显著高于0 h组(P<0.05)。以上结果表明,猪卵母细胞在ICSI后需要辅助激活来启动胚胎顺利发育,A23187+6-DMAP激活效果较好。液氮冻融精子可以促进ICSI后雄原核的形成。半胱氨酸处理4 h对猪ICSI卵母细胞受精和发育均有促进作用。
- 孙爽王媛刘仲凤吕明王峰刘忠华
- 关键词：ICSI
- 猪卵母细胞c-mos基因表达以及RNA干扰被引量：3
- 2007年
- c-mos基因在动物卵母细胞减数分裂调控中起作用,但其作用机制目前仍不清楚。本实验通过RT-PCR、免疫荧光激光共聚焦检测方法检测了猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因在转录水平、翻译水平上的表达以及蛋白的分布,并应用注射小干扰RNA(siRNA)方法对其进行了RNA干扰(RNAi)研究。结果显示,猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因mRNA量逐渐增高,电激活后6h接近完全降解;MOS(c-mos基因蛋白产物)在GV卵母细胞生发泡中有一定量的表达,生发泡破裂(GVBD)前表达量增加且开始向卵母细胞胞质弥散,成熟培养44h未成熟卵母细胞中的MOS表达量要高于成熟卵母细胞,激活后6h核区MOS明显减少,但仍然有少量MOS分布于胞质中;成熟培养前干扰c-mos基因,所用三个siRNA都能成功敲低mRNA量,分别是同时期对照组mRNA量的0.08±0.03,0.11±0.06和0.20±0.06倍,干扰后虽然没有完全剔除MOS,但MOS量比同期卵母细胞有明显下降,仍可以引发成熟卵母细胞染色体解凝集。研究结果揭示了猪卵母细胞体外成熟及发育进程中c-mos基因在转录和翻译水平上的动态表达规律,建立了猪卵母细胞c-mos基因RNAi体系,为MOS在猪卵母细胞发育过程中的功能研究建立了重要的基础。
- 刘丽清田江天格日乐其木格孙爽赵祥杰宋军张永富李玉田刘娣刘忠华
- 关键词：卵母细胞RNAI
- 利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白转基因猪胚胎的研究被引量：12
- 2008年
- 试验对脂质体转染猪胎儿成纤维细胞的技术程序进行了筛选,以绿色荧光蛋白基因转染后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体构建了绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,并对重构胚在体外发育情况以及绿色荧光蛋白表达情况进行了跟踪研究。结果显示,采用4.0μg.mL-1脂质体转染试剂,1.6μg.mL-1质粒DNA,转染6 h可以获得最佳转染效果,转染效率达4.48%;GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%,GFP阳性胚胎率为48%。结果表明,脂质体转染试剂可以高效转染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪全程发育的潜能。
- 宋军王振坤孔庆然赵祥杰刘丽清田江天郑重孙爽尹智刘忠华
- 关键词：转基因绿色荧光蛋白核移植脂质体
- 猪精液颗粒冷冻技术的研究被引量：10
- 2008年
- 为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。
- 赵祥杰李玉田孙爽宋军刘丽清尹智田江天郑重刘娣刘忠华
- 关键词：干冰冷冻精子
- 体细胞核移植生产绿色荧光蛋白转基因猪被引量：27
- 2008年
- 体细胞核移植转基因动物制作路线是目前生产转基因家畜的最佳方法.绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)转基因猪研究可以为转基因家猪育种、人类疾病模型和人类异种器官移植研究奠定良好的基础.本研究对脂质体转染猪胎儿成纤维细胞的技术程序进行了筛选,以绿色荧光蛋白基因转染后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体,构建了绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,并对重构胚在体外和体内发育情况以及绿色荧光蛋白表达情况进行了跟踪研究.结果显示,采用4.0μL/mL脂质体转染试剂,1.6μg/mL质粒DNA,转染6h可以获得最佳的转染效果,转染效率达3.61%;GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%,GFP阳性胚胎率为48%;重构胚移植于10头受体后,有5头妊娠,3头受体发育到期,共出生克隆猪6头,其中4头为GFP阳性,经DNA检测确认为GFP转基因猪;转基因克隆胚胎移植出生率为1.0%,阳性个体出生率为0.7%.结果表明,脂质体转染试剂可以高效转染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪全程发育的潜能.本研究对我国体细胞克隆转基因猪的研究具有重要的参考价值.
- 刘忠华宋军王振坤田江天孔庆然郑重尹智高力马海鹍孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：转基因绿色荧光蛋白核移植脂质体
