宋玉洁
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 禽伤寒沙门氏菌SG9R株asd基因缺失株平衡致死系统平台的构建
- 2015年
- 为研发以禽伤寒沙门氏菌(SG)SG9R弱毒疫苗株为载体表达外源基因的活菌疫苗,本研究利用Red同源重组系统对SG9R株基因组中编码天冬氨酸β-半醛脱氢酶的asd基因进行敲除,构建SG9R△asd缺失突变株。该突变株在缺乏外源DAP培养条件下溶菌死亡,而在添加DAP或导入表达链球菌asd+质粒p YA3342后才能够恢复增殖能力,以此建立了以asd营养基因为筛选标志的SG染色体-质粒平衡致死系统。并且进一步采用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,将其克隆于asd+质粒p YA3342中,电转化于SG9R△asd缺失突变株中,通过无DAP培养条件的筛选,获得了表达GFP外源基因的SG重组菌,经体外连续25次传代后,鉴定结果显示,GFP仍能够在重组SG中持续稳定的表达。本研究结果为以SG弱毒疫苗菌株作为活载体的基因工程疫苗的研制提供简便易行的操作平台。
- 王小舟杨样胡会杰宋玉洁王勇祥谢静李芙蓉陆广富朱国强
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 肠杆菌科丝氨酸蛋白酶的研究进展
- 2016年
- 丝氨酸蛋白（Serine protease autotransporter of Enterobacteriaceac，SPATE）是革兰氏阴性肠杆菌分泌的蛋白性质的毒力因子。其主要功能在于降解宿主细胞内或细胞外基质，从而引发一系列对宿主细胞的不利应答反应。
- 宋玉洁区炳明夏芃芃朱国强
- 关键词：丝氨酸蛋白酶肠杆菌科革兰氏阴性细胞外基质毒力因子细胞内
- 猪氨肽酶N基因的克隆、表达系统构建和鉴定被引量：5
- 2013年
- 为探讨猪氨肽酶N(APN)作为产肠毒素性大肠杆菌F4ac的受体蛋白的可能性,根据GenBank上的猪APN mRNA序列设计合成特异性引物,从新鲜的猪小肠组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链,RT-PCR扩增猪APN全长基因,并分别构建真核表达和原核表达系统。结果表明:APN基因已正确插入pcDNA3.1真核表达载体和pET-28a(+)原核表达载体,SDS-PAGE结果证明重组蛋白为包涵体,且纯化产物在110ku处有单一明显条带。pcDNA3.1-APN和pET28a-TAPN双系统的成功构建以及APN蛋白的成功表达,为进一步研究和验证该蛋白作为猪F4ac受体候选蛋白的可能性奠定基础。
- 夏芃芃宋玉洁段进坤朱国强
- 关键词：真核表达原核表达
- 大肠杆菌16SrRNA甲基化酶基因rmtB缺失株的构建及其耐药性分析被引量：1
- 2015年
- 为探索大肠杆菌(E.coli)16S r RNA甲基化酶耐药基因rmt B在菌体形成氨基糖苷类抗生素抗性中的作用,本研究以rmt B阳性菌E.coli 3A11-16作为亲本株,经PCR扩增其上下游序列作同源臂序列,分别克隆于p BluescriptⅡKS+中,构建p Blue-Δrmt B,其rmt B基因中缺失的30 bp由质粒中多克隆位点的18 bp替换,以XbaⅠ/KpnⅠ酶切p Blue-Δrmt B,目的片段亚克隆于自杀性载体p DMS197中,构建p DMS-Δrmt B,电转化至野生菌E.coli3A11-16,筛选获得rmt B基因缺失株E.coli 3A11-16Δrmt B。同时将rmt B基因插入p BR322中转化于基因缺失株构建其回补株。微量稀释法分别测定rmt B亲本株、基因缺失株和回补株对氨基糖苷类抗生素的耐药性。PCR和测序结果显示rmt B基因缺失株构建正确,证明通过自杀性载体能够对质粒中的基因进行改造。药敏试验显示相对于亲本株,基因缺失株对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷抗生素耐药性降低至质控菌水平,表明16S r RNA甲基化酶rmt B基因是介导大肠杆菌对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷类抗生素高度耐药的重要基因。本实验通过构建rmt B基因缺失株,为进一步研究rmt B阳性菌生物学功能及其在E.coli中的耐药机制奠定了基础。
- 区炳明陈琳宋玉洁王小舟张倩陈秀芳朱国强
- 关键词：氨基糖苷类
- 猪氨肽酶N对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88ac黏附力的影响
- 引言仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要因素,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%29.5%,不仅会导致仔猪养猪业巨大的经济损失,而且会很大程度上抑制养猪业的发展[1]。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）K88是导致新生或断奶仔...
- 夏芃芃宋玉洁邹雅洁朱国强
- 肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2014年
- 为探究肠炎沙门菌伴侣蛋白Hfq对nmpC的调控机理及其基因编码产物OmpD在致病过程中参与的生物学功能,采用PCR方法扩增肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD基因nmpC,并将其克隆至原核表达载体pColdTM TF,构建重组表达载体pColdTM TF-nmpC。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和Ni-NTA亲和层析获得高纯度的融合蛋白OmpD。用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗OmpD抗体。结果显示,经酶切、测序和Western blot鉴定分析,本研究成功构建并表达肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD,经纯化后免疫BALB/c小鼠,获得特异性的鼠源OmpD多克隆抗体,为进一步探究肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD在致病过程中参与的生物学功能奠定基础。
- 王勇祥陆广富孟霞杨样王小舟张琪宋玉洁朱国强
- 关键词：肠炎沙门菌原核表达多克隆抗体
- 临床16S rRNA甲基化酶的研究新进展被引量：6
- 2014年
- 16SrRNA甲基化酶是近年来出现于临床的一种新耐药决定因子,介导细菌对多种氨基糖苷类高水平耐药,最初发现于肠杆菌科中,目前在革兰阴性菌中已发现至少由12种等位基因编码的10种16SrRNA甲基化酶。由于大多编码16SrRNA甲基化酶的基因常位于可动遗传因子如接合型质粒、整合子、转座子、插入序列共同区上,易引起耐药性和耐药基因的传播,导致临床抗感染治疗的失败。本文综述了临床16SrRNA甲基化酶的新发现,其介导的耐药性、作用机制、临床流行特点、传播特点及分子遗传背景、来源及进化,为临床合理应用氨基糖苷类抗生素、开发16SrRNA甲基化酶抑制剂奠定基础。
- 区炳明陈琳宋玉洁朱国强
- 关键词：16SRRNA甲基化酶氨基糖苷类耐药性耐药机制
- 磷霉素分子耐药机制研究进展被引量：3
- 2015年
- 由于作用机制独特、抗菌谱广、突变耐药发生率低、且与其他抗生素具有良好的协同作用优点等,磷霉素成为临床抗多药耐药菌感染的良好选择,而值得注意的是,耐药性尤其是获得耐药性的产生和发展将成为近年来磷霉素抗多药耐药菌感染的障碍。为此,本文综述了由肽聚糖生物合成酶MurA突变、磷霉素转运摄取系统障碍及磷霉素耐药修饰酶引起磷霉素耐药的3种分子耐药机制,并重点对获得性分子耐药机制磷霉素耐药修饰酶的出现及种类、临床流行特点、分子遗传背景及传播特点、亲缘关系及进化进行了阐述,旨在为临床合理应用磷霉素、减缓耐药性的发生和传播、开发抗耐药菌感染新药及新制剂提供新思路。
- 陈琳区炳明宋玉洁朱国强
- 关键词：磷霉素
