尹烁
- 作品数：3 被引量：44H指数：3
- 供职机构：上海市组织工程研究与开发中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用组织工程口腔黏膜重建尿道的初步实验研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道。方法18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3～0.5kg。取其中12只兔口腔黏膜组织,分离获得口腔黏膜细胞。将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3细胞及无3T3细胞的培养皿进行培养,接种后第2天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,观察生长增殖情况,并行免疫荧光组织化学染色鉴定。取余6只兔膀胱,经脱细胞处理制备BAMG,随机取1cm×1cm组织行HE染色,观察脱细胞效果。将接种于有3T3细胞培养皿培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG上,培养1周后,行HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合状况。结果倒置相差显微镜下观察,接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞可传至7～8代,其细胞形态均一,功能良好;无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样,传至第2代时,即开始出现老化。细胞生长曲线显示,两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8天开始呈对数增长,第14天达峰值。接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞,培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞。两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色,均呈绿色荧光。HE染色观察,BAMG经脱细胞处理后未见细胞,脱细胞效果良好。复合培养1周后,HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG复合良好。结论兔口腔黏膜细胞可在体外成功培养、扩增,与同种异体BAMG复合后生长良好,为构建组织工程尿道提供了一种新的选择。
- 李超徐月敏宋鲁杰崔磊尹烁
- 关键词：口腔黏膜细胞体外复合
- 兔口腔黏膜细胞与灭活的3T3成纤维细胞的体外共培养被引量：3
- 2007年
- 目的探讨口腔黏膜细胞的培养方法,为进一步以口腔黏膜细胞为种子细胞构建组织工程化尿道提供实验依据。方法体外分离口腔黏膜细胞,取部分细胞与经丝裂霉素灭活的3T3成纤维细胞进行共培养（共培养组）,定期观察细胞形态变化及生长增殖情况。以非共培养的口腔黏膜细胞作为对照（非共培养组）。同时,对体外培养获得的口腔黏膜细胞进行广谱角蛋白抗体（AE1/AE3）和K19免疫荧光染色鉴定;流式细胞仪检测第2代共培养组细胞的AE1/AE3阳性细胞百分比。结果共培养组口腔黏膜细胞,呈现典型的＂铺路石＂状,细胞形态均一,可传代至7-8代。非共培养组口腔黏膜细胞则形态多样,传至第2代时,即开始出现老化,细胞贴壁及增殖能力均明显减弱。免疫荧光染色显示,体外培养获得的口腔黏膜细胞AE1/AE3免疫荧光染色阳性,40%细胞K19染色阳性。流式细胞仪检测结果表明,第2代共培养组口腔黏膜细胞AE1/AE3阳性细胞百分比〉95%。结论口腔黏膜细胞在有灭活的3T3成纤维细胞存在时可成功培养和扩增,为进一步将其作为种子细胞构建组织工程化尿道奠定了良好的基础。
- 李超徐月敏宋鲁杰崔磊尹烁
- 关键词：口腔黏膜细胞3T3细胞中文摘要
- 口腔黏膜细胞与膀胱黏膜下脱细胞基质复合物构建组织工程化尿道的实验研究被引量：36
- 2008年
- 目的探讨以兔口腔黏膜细胞与同种异体膀胱黏膜下脱细胞基质（BAMG）复合物构建组织工程化尿道的可行性。方法新西兰雄性兔24只，距尿道外口2．0cm剥离尿道黏膜（2．0cm×0．8cm）后，随机分实验组和对照组，每组12只。切取实验组兔口腔黏膜组织分离细胞，在有灭活的3T3细胞培养皿上进行培养扩增，将培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG（2．2cm×1．0cm）上，植入实验组兔尿道缺损区域；对照组单纯采用无细胞植入的BAMG修复尿道。分别于术后1、2、6个月观察动物排尿情况，行尿道造影，8F尿管插管确定有无狭窄；随后处死实验兔，取修复段尿道黏膜组织行组织学检查。结果细胞培养获得的口腔黏膜细胞形态均一，生长良好；组织形态学、扫描电镜观察见口腔黏膜细胞与BAMG具有良好的相容性。实验组兔术后1、2、6个月伤口愈合良好、排尿通畅，无尿瘘发生，组织学和尿道造影检查显示带细胞修复的尿道形态完整、清晰宽敞，无狭窄发生；术后6个月植入的口腔黏膜细胞仍然存在，并明显扩增。对照组兔则出现排尿困难、尿道狭窄，光镜下发现黏膜及黏膜下存在严重的炎症反应。结论兔口腔黏膜细胞与同种异体BAMG复合后，可成功用于尿道缺损的修复，构建组织工程化尿道。
- 李超徐月敏宋鲁杰傅强崔磊尹烁
- 关键词：尿道口腔黏膜细胞膀胱脱细胞基质
