张灵敏
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- 腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制被引量：3
- 2015年
- 目的探讨腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制。方法分别用0、3.0 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测RECK基因启动子区Cp G岛甲基化情况;逆转录PCR、Western blot、流式细胞仪检测腺苷处理前后RECK基因mRNA和蛋白的表达、甲基转移酶(methyltransferases DNMT1,DNMT3a)蛋白表达及细胞凋亡的变化。结果腺苷干预后RECK基因甲基化程度明显低于对照组[(49.14±2.38)%vs(74.84±2.38)%,P<0.01];腺苷干预后RECK基因mRNA转录及蛋白表达、细胞凋亡均明显高于对照组[0.335 3±0.350 2 vs 0.080 0±0.003 6,0.603 0±0.017 8 vs 0.090 0±0.003 0;(27.90±2.32)%vs(5.09±0.30)%,P<0.01];甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a)蛋白表达均明显低于对照组(0.141 3±0.002 1 vs 0.645 0±0.009 2,0.130 0±0.004 6 vs 0.526 7±0.009 5,P<0.01)。结论腺苷通过抑制甲基转移酶的活性,降低RECK基因DNA启动子区域的甲基化水平,使RECK基因mRNA及蛋白表达水平增加,促使SW480细胞凋亡。
- 李权王亚旭申海鹰谢凯张灵敏曾令海
- 关键词：RECK基因腺苷甲基转移酶
- 微小RNA与结直肠癌被引量：1
- 2014年
- 微小RNA （miRNA）在细胞生长、分化、凋亡和肿瘤发生中发挥重要的调控作用.研究显示,miRNA调控目的基因表达与结直肠癌的发生发展、化疗敏感性及预后密切相关.检测miRNA有望为结直肠癌患者制定更详细的个体化化疗方案,并改善其预后.
- 张灵敏王亚旭
- 关键词：微RNAS结直肠肿瘤药物疗法
- ITU对HT-29细胞增殖抑制作用及DLC-1基因的影响
- 目的:探讨5-碘代杀结核菌素(5-iodotubercidin，ITU)对人结肠癌细胞HT-29株增殖凋亡的影响及DLC-1基因表达的影响。 方法:不同浓度（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10μmol/L）的IT...
- 张灵敏
- 关键词：甲基化结直肠肿瘤
- 文献传递
- 5-碘代杀结核菌素对HT-29细胞DLC-1基因的去甲基化作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨5-碘代杀结核菌素(5-iodotubercidin,ITU)对人结肠癌细胞HT-29株增殖凋亡及DLC-1基因表达的影响。方法不同浓度(0.1、0.5、1、2、4、6、8、10μmol/L)ITU作用于HT-29细胞48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HT-29细胞的增殖活性;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,流式细胞仪检测其凋亡率;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,亚硫酸氢盐克隆测序法(BSP)检测DLC-1基因启动子区Cp G岛甲基化情况;同上的处理细胞的方法,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)mRNA的表达;Western blot检测DLC-1基因蛋白表达。结果 1ITU可明显抑制HT-29细胞活力,在一定范围内随着药物浓度增加抑制细胞活力的作用越强(P<0.05),以6μmol/L组对HT-29细胞影响最大,IC50=(5.92±0.62)μmol/L。2分别以0、2、4、6μmol/L ITU作用于HT-29细胞后,流式细胞仪检测各组凋亡率,分别为(9.56±2.21)%、(22.18±3.16)%、(34.23±3.16)%、(40.50±3.16)%,表明随着ITU浓度增加,对HT-29细胞的促凋亡作用越强。3经0、2、4、6μmol/L ITU处理后DLC-1基因启动子区Cp G岛甲基化率分别为91.67%、75.00%、61.67%、43.33%,表明ITU可以引起DLC-1基因启动子区甲基化程度降低。4在HT-29细胞中可检测到少量DLC-1 mRNA和蛋白的表达;相同条件经0、2、4、6μmol/L ITU处理细胞后检测显示DLC-1基因mRNA和蛋白的表达增加,并随浓度增长,mRNA及蛋白表达随之增加。结论 ITU可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,促进HT-29细胞凋亡,而这种抑制增殖作用可能和ITU降低DLC-1基因启动子区甲基化水平而诱导DLC-1基因上调有关。
- 张灵敏王亚旭谢凯曾令海李权
- 关键词：甲基化结直肠肿瘤
- 腺苷对人结直肠癌细胞hMLH1基因甲基化的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响.方法 分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,采用亚硫酸氢盐测序（BSP）法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测各组细胞活力.结果 腺苷干预后1.5、3.0、4.5 mmol/L各组甲基化程度分别为65％±4％、45％±11％和16％±4％,均明显低于对照组（80％±4％,均P＜0.01）;hMLH1 mRNA转录水平、蛋白表达水平、细胞凋亡水平均明显高于对照组（0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019比0.079±0.010,0.353±0.016、0.654±0.018和0.854 ±0.014比0.126±0.016,11.9％±0.6％、20.0％±1.8％和35.8％±1.8％比3.9％±1.4％,均P＜0.01）.MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后,各组细胞活力均明显低于对照组（均P＜0.05）,有一定的时间-剂量依赖性.结论 腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态,使hMLH1表达增加,抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡.
- 谢凯王亚旭申海鹰张灵敏曾令海舒宁波李权
- 关键词：结直肠肿瘤腺苷甲基化
- ERCC1 BRCA1 TYMS的mRNA表达水平和UGT1A1多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义被引量：6
- 2014年
- 目的探讨结直肠癌肿瘤组织的切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)和胸苷酸合成酶基因(TYMS)的信使RNA(mRNA)表达水平及尿苷葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义。方法选取2010年10月至2011年10月收治的进展期结直肠癌患者230例,分为个体化化疗组(41例)和常规化疗组(189例),分别进行个体化化疗和常规化疗。个体化化疗组通过检测患者ERCC1、BRCA1和TYMS基因中的mRNA表达水平以及UGT1A1基因多态性,指导患者选用敏感且毒性反应小的化疗药物,比较两组患者化疗后的无进展生存期(PFS)、无病生存率(DFS)和毒性反应发生率。结果个体化化疗组患者中位PFS为(26.00±1.60)个月,常规化疗组患者中位PFS为(25.00±0.27)个月,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。两组患者化疗后1、2年DFS比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。个体化化疗组患者血液毒性、腹泻、肝功能损害和血尿素氮升高发生率较常规化疗组低,差异均有统计学意义(P<0.05);而神经毒性、心脏毒性和血肌酐升高发生率与常规化疗组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论以上基因检测使进展期结直肠癌患者在临床个体化化疗中获益,PFS延长,部分毒性反应发生率降低。
- 曾令海王亚旭谢凯张灵敏
- 关键词：个体化化疗
- 5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制被引量：3
- 2013年
- 目的观察5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人结肠癌细胞（SW480）株增殖凋亡的影响并探讨其机制。方法以2．5、5．0、10．0μmol／L的5-Aza—CdR作用于SW480细胞72h后，采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应（BSP）检测Disable一2（DAB2）胞嘧啶一磷酸一鸟嘌呤基序（CpG）岛的甲基化状态；逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达。结果（1）5-Aza．CdR对SW480细胞生长有抑制作用，用药处理后细胞凋亡率分别为（12．89±0．59）％、（16．74±1．80）％、（33．02±3．30）％，（P〈0．01）；（2）5-Aza—CdR处理前甲基化程度为89．09％，处理后依次为70．00％、55．45％、10．91％，肩动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）；（3）5-Aza—CdR处理前RT—PCR可以少量扩增出DAB2mRNA特异性条带（平均灰度比值为0．266±0．013），5-Aza—CdR处理后可见DAB2mRNA转录水平增加，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值2．5p．mol／L组为0．363±0．009，5．μmol／L组为0．490±0．021；10．0Ixmol／L组为0．753±0．028（P〈0．01）；（4）5-Aza—CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中（荧光强度为：94．50±13．39），予以5-Aza—CdR处理之后DAB2的表达量增加（荧光强度为：123．75±15．19，P〈0．01）。结论5-Aza—CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用，其机制可能是5-Aza．CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化．诱导mRNA转录和蛋白的表诀．
- 舒宁波王亚旭曾令海谢凯张灵敏毕德利
- 关键词：甲基化脱噬作用
