徐勇
- 作品数：6 被引量：10H指数：1
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- AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体。方法体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用MluⅠ和SalⅠ进行双酶切,将AQP5全长序列克隆入pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率。Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白。结果测序结果和Western blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml。结论成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体。
- 张文杰徐勇王斌徐泽宽杨力沈历宗徐皓
- 关键词：水通道蛋白SGC7901细胞293T细胞慢病毒载体
- 1,25-二羟基维生素D3对伴骨质疏松腰椎退变性疾病患者椎间融合率的影响被引量：6
- 2014年
- 目的 探讨1，25-二羟基维生素D3对伴骨质疏松腰椎退变性疾病患者椎间融合率的影响。 方法 回顾分析2011年11月－2012年10月采用经后路椎间孔行腰椎椎间融合术治疗的44例伴骨质疏松腰椎退变性疾病患者临床资料，根据术后是否使用1，25-二羟基维生素D3将患者分为试验组（21例）和对照组（23例）。两组患者性别、年龄、病变类型、病变节段、病程比较，差异均无统计学意义（P 〉 0.05），具有可比性。采用Oswestry功能障碍指数（ODI）评价术后功能恢复情况；行腰椎正侧位X线片及薄层二维重建CT检查，根据改良Brantigan评分标准评价椎间融合情况。 结果 两组患者均获随访，随访时间12～27个月，平均14.5个月。随访期间两组患者均无断钉、断棒、Cage移位及其他并发症发生。术后6个月及末次随访时两组ODI评分均较术前显著改善（P 〈 0.05）；术前两组ODI评分比较差异无统计学意义（P 〉 0.05），术后6个月和末次随访时试验组ODI评分均显著低于对照组（P 〈 0.05）。根据改良Brantigan评分标准，术后6个月试验组椎间融合率为76.19%（16/21），对照组为43.48%（10/23），两组融合率比较差异有统计学意义（χ^2=3.60，P=0.03）；末次随访时，试验组椎间融合率为95.24%（20/21），对照组为65.22%（15/23），两组融合率比较差异亦有统计学意义（χ^2=4.38，P=0.02）。 结论 1，25-二羟基维生素D3可能提高伴骨质疏松腰椎退变性疾病患者椎间融合率以及改善患者术后生活质量。
- 徐勇周敏刘欢张群虎胡志毅张宁任永信
- 关键词：腰椎退变性疾病腰椎椎间融合术25-二羟维生素D3
- 水通道蛋白3与紧密连接的相关性被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接(tight junction,TJ)的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用Caco-2细胞系在体外构建肠黏膜上皮屏障,构建沉默AQP3的shRNA慢病毒载体,建立稳定转染细胞系.实验分为3组:空白对照组(BLANK)、阴性对照组(NC)、AQP3干扰组(AQP3 shRNA).Western blot验证TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达情况;并且采用免疫细胞化学法观察TJ相关蛋白的分布和结构变化.结果:RT-PCR及Western blot结果显示在Caco-2细胞系中成功沉默AQP3的表达.干扰组与对照组相比下降约75%.Western blot结果显示AQP3干扰组TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达明显降低.免疫细胞化学结果显示Caco-2细胞间Occludin以及Claudin-1主要表达在细胞膜和/或胞浆中,Occludin和Claudin-1细胞间棕褐色颗粒减少,结构变模糊.相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏.结论:靶向AQP3的shRNA技术可以引起TJ的结构变化和相关蛋白的表达分布的异常.
- 张文杰徐勇王斌徐皓
- 关键词：水通道蛋白3CACO-2
- 钙敏感受体缺失对小鼠成骨细胞增殖与分化的影响及机制研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨钙敏感受体（CaSR）在小鼠成骨细胞增殖与分化中的作用，以及Wnt信号通路在其促进成骨细胞增殖及分化过程中的调节作用。方法取新生同窝野生型小鼠（对照组）和CaSR敲除纯合子小鼠（实验组）各4只，分离培养颅骨成骨细胞并传第3代，分别于培养2、4、6、8d时采用CCK-8法测定细胞的吸光度（OD）值，检测成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）的活性。取培养6d的细胞行实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测核心结合因子（Runx2）、ALP、骨钙素（OCN）、核激活因子受体配体（RANKL）、骨保护素（OPG）及β-链蛋白的mRNA基因表达水平；采用Weste Blot检测β-链蛋白、Wnt-5a、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、Runx2的蛋白表达水平。结果培养6d时对照组和实验组成骨细胞的OD值（1.55±0.05、1.26±0.02）和ALP活性[（0.023±0.002）、（0.017±0.001）U/mg·prot] 均达到峰值，与其他时间点比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;同一时间点实验组成骨细胞的OD值和ALP活性均低于对照组，差异有统计学意义（P 〈0.05）。对照组比较，培养6d时实验组成骨地细胞的Runx2、ALP、OCN、RANKL/OPG、β-链蛋白的mRNA表达水平，以及β-链蛋白、Wnt-5a、IGF-1、Runx2的蛋白表达水平无显著降低，两组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论CaSR缺失将导致成骨细胞的增殖和分化障碍，其机制与经典的Wnt信号通路抑制有关。
- 张崛冯玉旭徐勇刘欢苗登顺任永信范卫民
- 关键词：成骨细胞细胞分化信号传导
- 胃癌中水通道蛋白3的表达与淋巴结转移的关系被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白3(AQP3)在胃腺癌不同分期中的差异表达与淋巴结转移的关系。方法:采用定量PCR、Western blot法对80例不同分期的胃腺癌组织及作为对照的癌旁非肿瘤组织中AQP3 mRNA和蛋白的表达分别进行检测,并与各临床病理分期中淋巴结转移情况进行分析。结果:AQP3在胃腺癌不同分期中的差异表达影响胃癌的淋巴结转移,有淋巴结转移的T1、T2、T3、T4期(UICC,2010)肿瘤组织中AQP3的表达明显高于无淋巴结转移者。结论:胃腺癌肿瘤组织中高表达的AQP3可能对患者淋巴结转移的发生有促进作用,因此AQP3有望成为预测胃腺癌转移和评估预后的重要指标,并可能是胃癌治疗靶点之一。
- 徐勇张文杰杨力徐泽宽徐皓
- 关键词：水通道蛋白3胃腺癌淋巴结转移
- 钙敏感受体促进小鼠长骨的生长及软骨矿化被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)对小鼠长骨及软骨矿化的直接作用。方法:利用骨移植的方法将出生后3 d同窝的野生型和CaSR基因敲除小鼠的股骨胫骨移植至同父母来源的8周龄的野生型小鼠背阔肌中。生长4周后,取出股骨和胫骨进行X线和组织学分析。结果:CaSR基因敲除小鼠骨骼生长严重阻滞,并且其生长板的软骨肥大细胞带显著宽于野生型小鼠的软骨肥大细胞带(P<0.001)。结论:CaSR具有直接促进长骨生长的作用,并且能够促进肥大软骨细胞矿化和骨化。
- 刘欢徐勇舒磊曹国凡苗登顺任永信
- 关键词：钙敏感受体骨移植软骨细胞软骨内成骨
