徐晓芳
- 作品数：11 被引量：15H指数：3
- 供职机构：吉林大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B重组蛋白抗原及其制备方法
- 本发明提供了一种旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B重组蛋白抗原及其制备方法，提供了旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B基因，并提供了该基因抗体的制备方法，分别制备旋毛虫和H7402肝癌细胞的抗血清，利用间接ELISA方法确定H7402...
- 张西臣李建华徐晓芳宫鹏涛高江明杨举李赫张楠张国才
- 文献传递
- 基于多重PCR和多重酶切检测猪主要肉质基因多态性的体系构建被引量：1
- 2013年
- 猪的肉质属于数量性状是受多个主效基因和候选基因调控,氟烷基因、酸肉基因和H-FABP基因都是影响猪肉质的主效基因。为了探索在群体中这几个基因多态性快速检测的方法,本研究构建了一种基于双重PCR和双重酶切手段的检测体系,该体系可以快速准确的实现同时扩增和酶切两段DNA片段,提高了检测猪肉质基因多态性的效率。该方法在猪的分子标记辅助选择育种基因型检测中具有一定的应用价值。
- 高峰印崇孙博兴白春艳徐晓芳张晓军张成才赵志辉邢沈阳
- 关键词：氟烷基因H-FABP基因
- PSME2基因RNA干扰及高表达对结肠癌HCT-8细胞及肿瘤增殖的影响
- 结肠癌是人类高发恶性肿瘤之一，近年来其发病率一直呈上升趋势，在全球恶性肿瘤发病率中已上升至第三位，其死亡率居恶性肿瘤死因的第二位。在我国，结直肠癌死亡率已位于恶性肿瘤死亡率的第五位，严重危害人类健康。在结肠癌的发展过程中...
- 徐晓芳
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- RNA干扰PTEN基因对HCT-8细胞增殖能力的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:观察小干扰RNA(siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法:构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化。结果:通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%。实时PCR方法检测结果显示,siRNA重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强。结论:PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用。
- 吕强唐亮李建华宫鹏涛徐晓芳田甜李泽中雒伟伟邢沈阳张西臣高久春
- 关键词：PTEN
- 曼氏血吸虫虫卵白细胞介素-4诱导因子的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的原核表达曼氏血吸虫虫卵白细胞介素-4诱导因子(IL-4-inducing principle of schistosoma eggs,IPSE),并制备小鼠多克隆抗体。方法人工合成IPSE基因,采用PCR技术克隆其成熟体开放阅读框,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IPSE。转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析后,应用组氨酸标签蛋白纯化柱纯化包涵体蛋白,免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体。结果克隆的IPSE基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100%;重组表达质粒pET-28a-IPSE经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为16 000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,可与鼠抗His单抗特异性结合;用纯化的包涵体蛋白免疫BALB/c小鼠后,获得的特异性抗血清效价为2×10-4,该血清可与IPSE蛋白发生特异性反应。结论已原核表达、纯化了曼氏血吸虫IPSE蛋白,并制备了高滴度的特异鼠抗血清,为进一步从日本血吸虫中筛选相似蛋白及研究其功能奠定了基础。
- 赵娜李世杰徐晓芳吴威范大为宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：原核细胞包涵体多克隆抗体
- 旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B重组蛋白抗原及其制备方法
- 本发明提供了一种旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B重组蛋白抗原及其制备方法，提供了旋毛虫AN1型锌指蛋白-2B基因，并提供了该基因抗体的制备方法，分别制备旋毛虫和H7402肝癌细胞的抗血清,利用间接ELISA方法确定H7402...
- 张西臣李建华徐晓芳宫鹏涛高江明杨举李赫张楠张国才
- 文献传递
- 新孢子虫病检测方法研究进展被引量：5
- 2011年
- 新孢子虫病是一类新发现的、严重危害畜牧业的原虫寄生虫病,能引起母畜流产和死胎,新孢子虫病也是导致奶牛流产的主要病因之一,给各国奶牛业造成巨大的经济损失。目前,尚没有防治本病的有效药物或疫苗,因此及时检出病牛是预防本病的有效方法。本文主要对新孢子虫的病原学诊断方法,免疫学检测方法及分子生物学检测方法的研究进展进行了综述。
- 徐晓芳邢沈阳李建华张西臣
- 关键词：新孢子虫病
- CCNL1真核表达载体的构建及其在MDA-MB-231细胞中表达的鉴定
- 2011年
- 目的:构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,鉴定其在MDA-MB-231细胞中的表达情况。方法:用PCR方法扩增得到CCNL-1基因,然后用EcoRⅠ、HindⅢ酶切CCNL1基因,将其分别与pcDNA3.1(+)、pVAXⅠ和pEGFP-C1载体连接,构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1三组重组载体,然后用Fugene HD转染试剂将构建的真核表达质粒转染入MDA-MB-231细胞,48h后,用荧光定量PCR和Western blotting方法检测CCNL1在MDA-MB-231细胞中的差异表达。结果:转染MDA-MB-231细胞48h后,在荧光显微镜下,pEGFP-C1-CCNL1重组载体能观测到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1重组载体未观测到;在MDA-MB-231细胞中CCNL1的mRNA和蛋白质表达水平由高到低依次为pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1和pEGFP-C1-CCNL1。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-CCNL1、pVAXI-CCNL1和pEGFP-C1-CCN1三组重组载体,且pcDNA3.1(+)-CCNL1在MDA-MB-231细胞中高表达。
- 李鹏马艳娇徐晓芳袁婷宫鹏涛李建华李赫欧阳红生张西臣
- 关键词：真核表达载体
- 肺癌细胞A549抗原相关旋毛虫Tsp06172基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2013年
- 目的克隆旋毛虫(Trichinella spiralis)与肺癌细胞A549相关抗原Tsp06172基因,并进行原核表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tsp06172基因,连接原核表达载体pET-28a,转化入感受态细胞BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定正确。表达分子质量单位约为16ku的融合蛋白。Western blot检测融合蛋白能被抗A549细胞的多克隆抗体识别。结论构建的原核表达载体pET-28a-Tsp06172表达具有A549细胞反应原性的蛋白,为旋毛虫Tsp06172重组蛋白功能的研究了奠定基础。
- 高江明徐晓芳吕萌左绍志宫鹏涛杨举李赫李建华张国才张西臣
- 关键词：旋毛虫原核表达肺癌细胞A549
- RNA干扰IDH2基因对HCT-8细胞增殖能力的影响
- 2012年
- 目的:研究RNA干扰(RNAi)对结肠癌HCT-8细胞IDH2基因表达的抑制作用及干扰后对HCT-8细胞增殖的影响,为结肠癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法:实验分siRNA干扰质粒转染组、阴性质粒对照组和HCT-8细胞空白对照组。构建靶向基因IDH2的siRNA真核绿色荧光载体重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2,利用FuGENE HD转染剂转染HCT-8细胞,通过荧光定量PCR检测IDH2mRNA的表达情况及MTT法检测结肠癌HCT-8细胞增殖变化。结果:在荧光显微镜下进行细胞计数,细胞转染率为74%。实时荧光定量PCR检测,siRNA重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2对IDH2基因表达的抑制率为85.02%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。MTT检测,干扰质粒转染组细胞的增殖能力明显低于空白对照组(P<0.05)。结论:抑制IDH2基因的表达可影响结肠癌细胞的增殖能力,提示IDH2基因在结肠癌的发生发展中起重要作用,抑制IDH2基因的表达可能成为一种治疗结肠癌的方法。
- 徐晓芳宋晗星邢沈阳吕强高江明赵娜常乐高峰宫鹏涛李建华张国才张西臣
- 关键词：RNA干扰
