施文骁
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立被引量：6
- 2016年
- 【目的】链格孢菌(Alternaria alternate)苹果致病型是苹果上的重要致病菌,可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系,为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒,含有潮霉素抗性基因,并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因,这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中,然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化,转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选;在含有50μg·mL^(-1)潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况;用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后,对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后,能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测;采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中;用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数;在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100μL孢子悬浮液(含105孢子)涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36—48 h后,链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下,在4℃处理6 h,再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养,转化子在含有50μg·mL^(-1)潮
- 顾雪迎施文骁王洪凯郭庆元
- 关键词：链格孢菌
- 稻瘟病菌大片段DNA转化载体的构建
- 2015年
- 构建能够转化大片段DNA的载体是进行基因簇功能分析的重要手段。利用cosmid载体和pBHt2载体构建了一个可以在稻瘟病菌中转化大片段DNA的载体,通过农杆菌介导的转化方法,成功地将超过30kb的大片段DNA转化到稻瘟病菌中。研究结果将促进稻瘟病菌基因簇的功能分析。
- 陈亚平施文骁王洪凯
- 关键词：稻瘟病菌
- 新疆枣缩果病与葡萄根癌病的快速检测体系建立及防治探究
- 林果产业是新疆的重要产业之一，红枣（Ziziphusjujuba Mill.）和葡萄(Vitisvinifera)作为新疆的重要果品，品质好，产量高，闻名中外。但是枣缩果病和葡萄根癌病对枣树和葡萄造成重大威胁，导致两种果...
- 施文骁
- 关键词：枣缩果病病原鉴定葡萄根癌病疾病预防
- 文献传递
- 葡萄根癌病研究进展被引量：6
- 2013年
- 阐述葡萄根癌病的历史和现状、症状和侵染循环、防治方法以及早期预警的方法等。
- 施文骁王洪凯郭庆元
- 关键词：葡萄根癌病症状侵染循环
- 环介导扩增快速检测葡萄根癌病菌技术体系的建立被引量：1
- 2015年
- 葡萄根癌病是葡萄上的重要病害之一。设计适用于葡萄根癌病菌环介导扩增的特异性引物,并建立快速检测葡萄根癌病菌的环介导扩增检测体系。
- 施文骁顾雪迎郭庆元王洪凯
- 关键词：葡萄根癌病
