曾瑾
- 作品数：69 被引量：194H指数：8
- 供职机构：宁夏大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2022年
- 目的原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridium perfringens Beta1 toxin,CPB1),建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法。方法利用基因工程技术获得cpb1基因,克隆至载体pET32a,构建重组质粒pET32α-cpb1,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1。以重组蛋白CPB1作为包被抗原,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,建立CPB1抗体的间接ELISA检测法。并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗,优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度,确定方法的临界值,验证方法的特异性、精密性、灵敏性。采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品。结果表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白),主要以包涵体形式表达。包被蛋白最佳浓度为10μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶16384,最佳封闭时间为120 min,二抗最佳稀释度为1∶1000。除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.p.)外,其他常见食源性致病菌A_(450)均低于0.3;批内及批间精密性CV均<10%;当McAb 1K19稀释度为1∶32768,即浓度为0.002μg/μL时,A_(450)为0.2235,P/N为10.2。201份正常牛血清及阴性小鼠血清均为阴性,阳性小鼠血清为阳性,检测符合率为100%。结论制备的重组蛋白CPB1可用于建立CPB1抗体的间接ELISA检测法,建立的方法具有良好的精密性及较高的灵敏性,可用于大量临床样品的检测。
- 马玲玲马红梅吴霜王东王东马臣杰李勇
- 关键词：基因重组原核表达间接ELISA法
- 产气荚膜梭菌β_2-β_1毒素融合基因在大肠杆菌中高效表达条件的优化被引量：1
- 2008年
- 本研究在已获得产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因表达载体,并在BL21(DE3)中成功表达的基础上,研究了以乳糖为诱导剂在不同条件下对β2-β1重组蛋白诱导表达的影响,并对其表达条件进行了优化。结果表明,重组菌株BL21(DE3)(pXETB2B1)在37℃、菌体诱导密度OD600为1.0、乳糖诱导浓度为0.1 g/L时诱导5 h,目的蛋白的表达效果最好,乳糖则以分批添加的方式为佳。
- 曾瑾王玉炯邓光存高蔚丰
- 关键词：产气荚膜梭菌融合蛋白表达条件优化
- 产气荚膜梭菌β2毒素基因的克隆及定点突变
- β2毒素是1997年才确认的由C型产气荚膜梭菌所产生的一种坏死、致死性毒素。与β1毒素一样,β2毒素也是引起人和动物坏死性肠炎的重要致病因子之一。β2毒素的基因序列与β1毒素及其他已知的产气荚膜梭菌毒素的序列没有明显的同...
- 王玉炯许崇波曾瑾马春燕李芳
- 关键词：产气荚膜梭菌基因克隆定点突变
- 文献传递
- 产气荚膜梭菌的β_2毒素基因克隆及其核苷酸序列分析被引量：12
- 2004年
- 利用PCR技术 ,从C型产气荚膜梭菌中国标准株C5 9— 4 4基因组DNA中扩增出了约 0 .7kb的基因 ,并将其克隆到pGEM T载体上 ,经酶切鉴定及核苷酸序列分析表明 ,该基因片段的核苷酸序列与国外报道的 β2 毒素基因序列一致 .
- 王玉炯邓光存曾瑾许崇波李芳
- 关键词：产气荚膜梭菌基因克隆核苷酸
- 产气荚膜梭菌β2毒素抗体的间接ELISA方法
- 本发明公开了一种产气荚膜梭菌β2毒素抗体间接ELISA检测方法，包括步骤一、产气荚膜梭菌β2毒素抗体的间接ELISA方法的建立，步骤二、结果判定标准的确定。本发明属于病原微生物检测技术领域，具体是提供了一种特异性好、灵敏...
- 曾瑾王玉炯吴霜宋孚洋李勇马臣杰张思雨马玲玲马红梅王东李文
- 文献传递
- 产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达被引量：2
- 2013年
- 为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用PacⅠ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定。结果显示,重组腺病毒Ad5STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 邓光存包少文杨继辉曾瑾李武刘晓明
- 关键词：黏附素重组腺病毒载体
- 产气荚膜梭菌β1毒素抗体的间接ELISA方法
- 本发明公开了一种产气荚膜梭菌β1毒素抗体间接ELISA检测方法，包括步骤一、产气荚膜梭菌β1毒素抗体的间接ELISA方法的建立，步骤二、结果判定标准的确定。本发明属于病原微生物检测技术领域，具体是提供了一种特异性好、灵敏...
- 马臣杰曾瑾马玲玲李勇宋孚洋刘晓明马红梅吴霜马嘉琦王东李文
- 文献传递
- A型产气荚膜梭菌α毒素基因的高效表达被引量：1
- 2004年
- 用NcoI EcoRI酶切含α毒素基因质粒pXCPA0 2 ,回收 1.2kb的α毒素基因片段 ,通过T4 DNA连接酶 ,将回收的α毒素基因片段与经NcoI EcoRI酶切的表达载体pET - 2 8c连接 ,转化至受体菌BL2 1(DE3)中。经NcoI EcoRI、BamHI EcoRI和NcoI BamHI EcoRI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得的表达质粒pXETA0 2含有α毒素基因 ,而且阅读框架是正确的。重组菌株BL2 1(DE3) (pXETA0 2 )经IPTG诱导后 ,其表达产物经ELISA检测和SDS -PAGE分析 ,结果表明重组菌株可以高效表达α毒素蛋白 ,该蛋白占菌体总蛋白相对含量的 36 .83%。
- 赵志军许崇波曾瑾王玉炯
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素基因基因表达
- 毒力岛与细菌致病性被引量：9
- 2010年
- 毒力岛作为细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,与多种致病菌毒力因子的产生和细菌的进化有密切的关系,研究毒力岛对于认识致病细菌的变异,阐述病原菌的致病机理,预测新病原菌的出现有着十分重要的意义。
- 曾瑾王玉炯邓光存
- 关键词：细菌
- 产气荚膜梭菌β_2-β_1毒素融合基因重组菌株免疫原性研究被引量：3
- 2008年
- 曾瑾王玉炯谢琴韩学波郭邦成
- 关键词：产气荚膜梭菌重组菌株融合基因外毒素保护性抗原基因工程菌株
