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土曲霉与红曲霉双灭活原生质体融合选育洛伐他汀高产菌株被引量：4: 2012年; 研究原生质体融合技术选育洛伐他汀高产菌株的方法。土曲霉(Aspergillus terreus)和红曲霉(Monascus anka)用混合酶液(体积分数0.5%溶菌酶,0.3%纤维素酶,0.3%蜗牛酶)分别酶解5.0h和3.5h制备原生质体,土曲霉原生质体和红曲霉原生质体在紫外线(20 W,30cm)下分别照射5min和4min灭活,灭活后混合并用PEG(体积分数30%PEG,0.05mol/LCaCl2,0.05mol/L甘氨酸)介导融合。在187株融合子中筛选得到27株洛伐他汀产量高于红曲霉出发菌株的融合子,其中有7株的洛伐他汀产量是出发菌的2倍以上。双灭活原生质体融合方法成功选育出红曲霉洛伐他汀高产菌株。; 李桂杭朱碧云李浩明; 关键词：洛伐他汀红曲霉土曲霉原生质体融合

SMART技术构建红曲霉全长cDNA文库被引量：4: 2009年; 目的构建红曲霉cDNA文库，为红曲霉功能基因的研究以及筛选、克隆红曲霉次生代谢产物合成途径相关基因奠定基础。方法采用SMART（ switching mechanism at 5 ＇end of RNA transcript）技术构建红曲霉全长cDNA文库，经涂平板和酶切反应测定文库的克隆数、重组率，PCR测定插入片断的大小。结果原始文库的库容为2．03×10^5，重组率达94％。插入片段大小多在0．7—2．0kb，平均大小在1kb左右。结论所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的基因的分离筛选和克隆表达的建库要求。; 朱碧云高蓝黄欣李浩明; 关键词：红曲霉菌 CDNA文库 SMART

土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE的克隆与表达: 2011年; 目的克隆表达土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE,为研究lovE蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用原核表达载体pET21b(+)构建lovE原核表达质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白。结果构建了pET-lovE原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得6×His-lovE融合蛋白,蛋白纯度在90%以上。结论原核表达可获得lovE蛋白,为lovE蛋白的生物学功能研究奠定了基础。; 朱碧云黄欣刘宝意李浩明; 关键词：土曲霉洛伐他汀调控基因

栀子GjPSY基因的克隆及原核表达被引量：3: 2013年; 目的:栀子(Gardenia jasminoides)的果实富含由一种类胡萝卜素—玉米黄素裂解氧化转变而来的藏花酸和藏花素。该文通过克隆栀子类胡萝卜素生物合成途径的关键酶—八氢番茄红素合成酶(PSY)的基因,初步研究栀子果实中藏花素和藏花酸的合成机理。方法:从栀子果实的cDNA文库中克隆了GjPSY的全长cDNA。通过将GjPSY的cDNA插入表达载体pET-21b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组GjPSY蛋白,用镍亲和层析法纯化该蛋白。结果:GjPSY cDNA全长1 876bp,含有一个长1 314 bp的开放阅读框架,预测编码含437个氨基酸的蛋白质,GjPSY重组蛋白在大肠杆菌中被表达和纯化。结论:GjPSY蛋白序列与其它植物PSY序列的相似性在55～93%之间,预测的GjPSY的空间结构具有PSY蛋白的保守结构特点。所构建表达载体可用于GjPSY的功能研究。; 高蓝朱碧云; 关键词：栀子八氢番茄红素合成酶原核表达

红曲霉丙酮酸脱羧酶基因克隆及酶学性质分析: 2011年; 目的:研究生物乙醇发酵关键酶丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)的性质和功能。方法:从SMART技术构建的红曲霉(Monascus anka CICC 5031)cDNA文库中筛选pdc基因,亚克隆到表达载体pET-21b(+),原核表达、亲和层析纯化重组PDC。分析重组PDC和野生型PDC的酶学性质。结果:pdc基因的开放阅读框长1 713bp,编码一个570个氨基酸残基的蛋白质。重组PDC在E.coli BL21(DE3)中的表达量为菌体总蛋白的32.7%。重组PDC与野生型PDC比活分别为20.2U/mg和30.1U/mg。二者的最适反应条件均为pH6.0、30℃。重组PDC和野生型PDC的Km值分别为2.6mmol/L和0.56mmol/L。结论:红曲霉pdc基因可在大肠杆菌中高效表达,重组PDC稳定性较好,可用作生物乙醇生产的候选资源。; 朱碧云高蓝李浩明; 关键词：红曲霉丙酮酸脱羧酶酶学性质生物乙醇

SMART技术构建栀子cDNA文库被引量：4: 2010年; 目的:构建栀子叶片cDNA文库。方法:提取栀子叶片总RNA。利用SMART技术合成双链cDNA。双链cDNA经限制酶Sfil酶切后与pDNR-LIB质粒连接。利用电刺激转化法将重组质粒导入E.coli DH5α而获得文库。利用PCR法检测文库的重组率。结果:原始文库滴度为2.63×105cfu/ml。随机检测文库中的15个克隆,表明重组率约为86.7%。选择14个插入片段的长度在400bp以上的克隆进行测序和生物信息学分析,结果预测的全长基因占所检测序列的64.3%。结论:成功构建了栀子叶片的cDNA文库,为栀子基因的结构和功能的研究提供了基础。; 高蓝朱碧云黄欣; 关键词：栀子 SMART CDNA文库

洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比较被引量：3: 2009年; 目的克隆红曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH,并进行序列分析和同源性比较。方法根据GeneBank土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因序列设计引物,以土曲霉和红曲霉基因组DNA为模板PCR扩增lovE和mkH基因并克隆到pMD19Tsimple载体。利用DNAMAN等软件以及互联网资源对lovE和mkH测序结果与其编码的氨基酸序列进行分析比对。结果分别扩增得到1 512 bp和1 464 bp的目的片段lovE和mkH。结论lovE和mkH同源性很高,并与GeneBank中相关已知序列基本相同,是洛伐他汀生物合成酶调控基因,且其表达产物为GAL4类转录因子。; 黄欣朱碧云吕带弟陈伟立黄晓琳李浩明; 关键词：土曲霉红曲霉洛伐他汀调控基因

栀子八氢番茄红素合成酶基因的分离及表达分析被引量：5: 2013年; 为探讨栀子(Gardenia jasminoides)果实中藏花素的合成机理,克隆了栀子类胡萝卜素生物合成的关键酶八氢番茄红素合成酶(GjPSY)基因的全长cDNA。结果表明,推导的GjPSY氨基酸序列与双子叶植物来源的GjPSY亲缘关系较近。采用HPLC检测栀子果实中的藏花素-1含量为(3.96±1.48)mg g–1,在叶片中未检出。通过RT-PCR分析表明,GjPSY在栀子叶片和果实中均有表达,且表达水平一致。因此推测,GjPSY的转录水平与果实中藏花素-1的合成无关。; 高蓝朱碧云; 关键词：栀子八氢番茄红素合成酶基因表达

丙酮酸脱羧酶及其应用研究被引量：9: 2010年; 丙酮酸脱羧酶(pyruvate decarboxylase,PDC),EC4.1.1.1,是一种胞内酶,是焦磷酸硫胺素(thiamine pyrophosphate,ThPP)依赖性的非氧化酶,是由辅酶ThPP、Mg2+和蛋白质构成的全酶,在辅助因子焦磷酸硫胺素和Mg2+参与下作用于丙酮酸而产生乙醛和CO2。PDC是丙酮酸合成乙醇的关键酶。它广泛存在于酵母菌、霉菌、细菌和植物等多种生物体中,不同来源的丙酮酸脱羧酶的结构、相对分子质量、酶学性质等均不尽相同。该文综述了丙酮酸脱羧酶生物学性质及其应用前景。; 朱碧云李浩明; 关键词：基因表达

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朱碧云