李松伟
- 作品数：4 被引量：22H指数：2
- 供职机构：宁波大学生命科学与生物工程学院更多>>
- 发文基金：浙江省科学技术厅重点科研社会发展项目长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 南移养殖的刺参(Apostichopus japonicus)cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的研究被引量：5
- 2010年
- 以南移养殖的刺参为实验材料,采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术构建了南移刺参混合组织的cDNA文库。对文库质量的分析结果表明,cDNA文库的库容量为2.2×107cfu,重组率达95.8%,平均插入片段长度750bp左右。挑取cDNA克隆进行5’端测序,成功测序185个反应,分析得到136个单基因簇(Unigene),其中包括40个重叠群(Contigs)、96个单拷贝EST(Singletons)。结果表明,克隆南移养殖的刺参原肌球蛋白(tropomyosin,Trp)cDNA全长序列为1112bp,ORF编码284个氨基酸,其预测蛋白的分子量为33.27kDa,等电点为4.56。该氨基酸序列与紫石海胆、南极大磷虾、锯缘青蟹、文昌鱼、河蟹、家蚕同源性分别为62%、51%、46%、49%、47%、46%。
- 崔静李太武苏秀榕李晔徐静周君应琪王中华李松伟
- 关键词：刺参CDNA文库基因克隆
- 环介导恒温扩增法快速检测短小芽孢杆菌被引量：1
- 2011年
- 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)是一种能引起食源性疾病的腐败菌,对其进行快速检测具有重要意义。针对短小芽孢杆菌木聚糖(xynA)基因,设计了4条特异性引物(两条内引物和两条外引物),通过条件优化,首次将一种新颖的核酸扩增技术——环介导恒温扩增技术应用于短小芽孢杆菌的快速检测。采用该技术,63℃温育1h的条件下扩增短小芽孢杆菌DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。PCR和LAMP的检测灵敏度分别约为162和16.2拷贝每反应。结果表明,该方法检测短小芽孢杆菌特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低,1h即可完成,有望发展成为快速检测短小芽孢杆菌的有效手段。
- 应琪李太武苏秀榕李晔周君崔静王中华李松伟
- 关键词：短小芽孢杆菌
- 泥蚶(Tegillarca granosa)精氨酸激酶的基因克隆与表达被引量：2
- 2011年
- 利用PCR扩增技术,从泥蚶的cDNA文库中克隆出了精氨酸激酶(arginine kinase)基因,并进行了原核表达。精氨酸激酶是调节能量代谢的重要酶类,在无脊椎动物体内能量平衡过程中起重要作用。结果表明,泥蚶的精氨酸激酶全长1601bp,包括5′非翻译区(5′-UTR)序列332bp,3′非翻译区(3′-UTR)序列246bp、1023bp的开放阅读框序列(ORF),编码340个氨基酸,具有精氨酸激酶典型的酶活性部位氨基酸序列(CPTNLGT)。构建了原核表达质粒AK-pET-28a(+)转化表达菌株,经IPTG诱导表达后,获得了与预期的分子量大小一致的表达产物。利用该目的蛋白制备了泥蚶精氨酸激酶的特异性多克隆抗体,经Western blot证明该蛋白为精氨酸激酶。
- 李松伟李晔李成华李太武苏秀榕
- 关键词：泥蚶精氨酸激酶基因克隆与表达多克隆抗体
- 泥蚶(Tegillarca granosa)cDNA文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析被引量：14
- 2009年
- 取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率鉴定。结果表明原始文库的滴度为3.17×105cfu/ml,重组率为86.3%,插入片段多在500—2500bp间。随机挑选458个克隆测序,经分析获得94种已知基因及87种未知基因。其中包括铁结合蛋白(Ferritin)的全长cDNA序列。该基因序列全长895bp,5'-端非编码区为163bp,3'-非编码区为213bp,开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa和4.89。氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%—82%。比对结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守。
- 贺静静李晔李太武苏秀榕王孟前李松伟周军马斌李强芳
- 关键词：CDNA文库泥蚶
