林建波
- 作品数：41 被引量：76H指数：6
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新型噬菌体表面呈现载体的构建被引量：5
- 2002年
- 作为抗体库筛选的一个有效方法,噬菌体表面呈现技术在单链抗体的研制中得到广泛的应用。以噬菌粒pCANTAB5E和pHB为基础,利用PCR和DNA重组方法,构建了一个新型的用于单链抗体噬菌体表面呈现的噬菌粒载体。随后用一株对大肠杆菌细胞有毒性的人源化单链抗体(1HSCFV)对其呈现单链抗体的效果进行了初步的评价,结果表明新型噬菌粒系统具有更好的呈现能力。
- 刘志刚俞炜源林建波
- 关键词：单链抗体噬菌体表面呈现
- S-100预防大鼠术后腹腔粘连作用的实验研究
- 目的：观察不同浓度S-100防粘连冲洗液预防腹腔粘连的效果及最佳浓度区间及S-100防粘连冲洗液对血清转化生长因子β1 /(TGF-β1/)水平的影响。
方法：将60只Wistar大鼠随机分为6组,包括模型对...
- 林建波
- 关键词：腹腔粘连免疫组化转化生长因子
- 文献传递
- 一种磷酸钙DNA共沉淀转化哺乳化物细胞较易成功的简易变通方法
- 磷酸钙共沉淀法转化哺乳动物细胞具有好,方法简便易推广等特点。但由于被共沉淀的DNA分子大小、纯度和用量(20-40 μg)的不同,想获得理想的共沉淀颗粒大小,对特定
- 李凤知林建波
- 文献传递
- 疱疹病毒侵入介体在免疫应答及抗肿瘤免疫中的研究进展被引量：1
- 2007年
- T细胞以及抗原提呈细胞上的受体和它们的配体所传递的激活或抑制信号,对于免疫细胞的有效激活或保持休眠状态极其重要。肿瘤坏死因子受体超家族和CD28-B7家族就包含了很多这样的调节分子。疱疹病毒侵入介体(HVEM)能在其配体肿瘤坏死因子超家族成员14(LIGHT)的作用下参与细胞免疫应答的激活;同时HVEM作为B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)的配体,使其转导共抑制信号。本文介绍HVEM精细调节免疫的功能并讨论其在抗肿瘤免疫中的新进展。
- 林建波李俊卫立辛沈锋
- 关键词：免疫应答抗肿瘤免疫
- 定点整合人Bcl-2基因的CHO/dhfr-细胞株的建立被引量：1
- 2005年
- 构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达。通过流式细胞仪和DNALadder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血清IMDM培养基中细胞的活细胞数目和活细胞比例。结果获得了稳定表达Bcl-2基因的细胞株CHO-Bcl-2,该细胞株能高水平表达Bcl-2蛋白。在无血清培养过程中,CHO-Bcl-2细胞比对照细胞保持高约15%的活细胞比例,细胞总数高25%。CHO-Bcl-2在高NH4+(50mmol/L)培养条件下具有较低的凋亡水平。建立了能够高表达Bcl-2基因并具有一定的抗凋亡能力的重组CHO/dhfr-细胞株。
- 许凌峰刘志刚孙志伟林建波杜韫刘姗俞炜源
- 关键词：BCL-2基因细胞培养凋亡
- 重组人sIL-2Rα在HEK293细胞中的分泌性表达与鉴定
- 2010年
- 目的在HEK293细胞瞬时表达带有组氨酸标签的重组人sIL-2Rα的胞外功能区片段,并进行纯化与鉴定。方法对GenBank中IL-2Rα膜外区基因序列进行优化,并在3′端融合组氨酸标签序列的基因,人工合成该基因并将其克隆到表达载体pL-293;转染HEK293细胞瞬时表达sIL-2Rα;表达产物His标签纯化;SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。结果表达产物中在相对分子质量为48 000处可见与目的蛋白相对分子质量相符的条带,该条带可被sIL-2Rα单克隆抗体识别。结论构建的重组sIL-2Rα质粒能够在HEK293细胞瞬时表达,表达量为1~1.5 mg/L。
- 王双陈燕侠王瑞琳孙志伟林建波俞炜源
- 关键词：SIL-2R
- 人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外分子进化被引量：7
- 2002年
- 以人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的 5株CDR3突变体为基础 ,利用致错PCR和DNA重排方法对其进行了突变和重排 ,然后克隆重组装的突变单链抗体至载体pHB 1HSCFV而构建了库容为 10 5的抗体库 ,利用噬菌体表面呈现技术对构建的人源化抗体突变库进行了富集 ,并利用单链抗体 -碱性磷酸酶系统进行了阳性克隆的筛选和鉴定。随后以鉴定的 5株阳性克隆为基础进行了第二轮的致错PCR、DNA重排、抗体库的构建和富集 ,并筛选到 4株亲和力较亲本鼠抗体All更好的人源化抗体 ,该研究为研制低免疫原性的导向溶栓制剂奠定基础。
- 刘志刚俞炜源林建波
- 关键词：单链抗体人源化抗体分子进化
- 制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法
- 本发明公开了一种制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法。该方法包括如下步骤：以A型肉毒毒素重组蛋白rAHc为免疫原，免疫动物，制备得到抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体。本发明的制备抗A型肉毒毒素免疫球蛋白抗体的方法，去除了抗...
- 孙志伟余云舟俞炜源杜韫林建波
- 文献传递
- proUK-KGDW融合基因在CHO细胞中的高表达被引量：2
- 2005年
- 利用常规分子生物学技术,构建了新型高效的proUK-KGDW融合基因的分泌型哺乳动物细胞表达载体。将该载体线性化后转染CHO/dhfr-细胞,经G418筛选获得阳性克隆,然后挑取表达水平较高的克隆进行MTX加压扩增,以提高proUK-KGDW杂合体的表达水平,经2～3轮MTX加压扩增,获得多株表达水平超过10μg/(106细胞·24h)的稳定的高表达细胞株,为proUK-KGDW杂合体的制备及功能研究奠定了基础。
- 杜韫刘志刚林建波徐桂清俞炜源
- 关键词：重组蛋白
- 抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:获得人源性抗P-选择蛋白(selectin)特异性抗体,为相关疾病治疗奠定基础。方法:在HEK293细胞中真核分泌表达人P-选择蛋白功能性片段,以此蛋白片段作为抗原,利用本室构建的大容量全合成人源性噬菌体抗体库进行筛选,经过3轮固相筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体A1改造成全抗体(IgG1),重组质粒转染H293细胞后,抗体得到表达;表达后在全抗体水平上用ELISA和Western印迹分别验证了A1抗体的特异性,并通过非竞争ELISA方法初步测定这株抗体的亲和力。结果:3轮筛选得到3株特异性噬菌体抗体,其中富集效果最好的单链抗体A1改造成全抗体形式后特异性良好,抗体亲和力Kd=2×10-8 mol/L。结论:筛选得到一株特异性较好的抗P-选择蛋白人源性单克隆抗体A1,其特异性和亲和力较好,有继续开发的价值。
- 李鹤王双林建波孙志伟何建勇
- 关键词：真核表达噬菌体抗体特异性
