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含悬挂羧基手臂聚乳酸材料的内皮细胞黏附及其细胞活性被引量：3: 2008年; 为了考察内皮化材料表面的细胞活性,在前期工作的基础上,分别在聚乳酸(PLA)、乳酸-苹果酸共聚物(PLMA),以及含悬挂羟基或羧基的乳酸-苹果酸共聚物膜(PLMAHE,PLMACA)表面种植人脐静脉内皮细胞(HUVEC),成功地制备了内皮化表面.通过测定内皮化材料表面内皮细胞释放的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及一氧化氮的释放量,间接考察了内皮细胞的抗凝血活性;另外,通过内皮化表面的血小板黏附实验,直接观察了血小板在内皮细胞上的黏附情况.实验结果表明,含羧基材料表面的内皮细胞活性比PLA和PLMAHE的高;相对其它材料PLMACA能更有效地保留黏附于其表面内皮细胞的活性,其单位内皮细胞的eNOS以及NO的释放量分别为(41.8±8.1)μmol/104cells和(0.76±0.16)U/104cells.电镜照片(SEM)显示,各种材料表面的内皮细胞均能有效地减少血小板的黏附与聚集;在内皮细胞脱落的区域,PLMACA仍能较好地实现其抑制血小板黏附的功能,有望成为新型血管修复(替代)材料.; 王珺王蔚刘媛朱晓翠袁直汤石明刘民汤华; 关键词：内皮细胞细胞活性细胞黏附聚苹果酸

翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用被引量：7: 2010年; 目的:原核表达并纯化翻译控制蛋白TPT1,免疫日本大耳白兔制备其抗体。方法:构建原核表达质粒pRSE-TA2-TPT1,转化大肠杆菌BL21(DE3),TPT1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清。以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果:在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的TPT1融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫大白兔,获得了高特异性的抗TPT1抗血清。结论:成功构建原核表达质粒pRSETA2-TPT1,表达并纯化TPT1蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.为进一步研究TPT1在肿瘤等疾病发生、发展过程及治疗中的作用奠定基础。; 赵一璠李海芳汤石明王萌吴海东刘民李欣汤华; 关键词：原核表达纯化抗体肿瘤

新型含悬挂羧基聚乳酸的制备及其血液相容性和细胞粘附性被引量：1: 2008年; Biodegradable α-hydroxyl polyesters,such as poly(lactic acid)(PLA)and poly(lactic-co-glycolic acid)(PLGA)were investigated as scaffolds for tissue engineering.However,polymeric materials on the basis of lactide are limited in blood vessel engineering due to their poor hydrophilicity and low affinity for the cells.In this study,the functional polylactide with pendant carboxyl(PLMACA)was synthesized,which was expected to improve the blood compatibility and cell adhesion of polyester based on PLA.The structure and composition of PLMACA were confirmed via {}1H NMR spectrum and the compatibilities for blood and cell were stu-{died.} The results show that the PLMACA is hopeful to be used as blood vessel substitute with good HUVEC adhesion and anti-platelet adhesion.; 王蔚贾小华刘媛王亮袁直汤石明刘民汤华; 关键词：聚乳酸血液相容性内皮细胞粘附

人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用被引量：2: 2010年; 目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。; 李海芳浦永汤石明强冉汤华; 关键词：多克隆抗体 RNA干扰

RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响被引量：1: 2010年; PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.; 任超逸吴海东浦永汤石明李欣刘民汤华; 关键词：结肠癌 SW620细胞 RNA干扰

人DFF45蛋白多克隆抗体制备及其初步应用被引量：4: 2010年; 目的:表达、纯化带GST标签的DNA裂解因子45(DNA fragmentation factor 45,DFF45)融合蛋白并制备多克隆抗体。方法:构建pGEX-5X-1/DFF45原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导融合蛋白表达,经纯化后免疫日本大耳白兔得到多克隆抗体并用CNBr-activatedSepharoseTM4B进行纯化。用间接ELISA法检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,同时用免疫荧光染色鉴定抗体特异性并观察DFF45的细胞定位。进一步检测DFF45在人类几种细胞系的表达差异情况。结果:成功构建原核表达质粒,表达、纯化DFF45蛋白并免疫动物后得到多克隆抗体。间接ELISA法显示抗体效价达1∶20 000,Western blot确定抗体具有高度特异性。应用该抗体检测发现DFF45在人类几种细胞系中表达存在差异并观察到其细胞定位。结论:DFF45多克隆抗体的成功制备及其在人类细胞系的差异表达,为进一步研究DFF45基因与肿瘤及其相关疾病的关系奠定了基础。; 孔卫青李海芳刘涛吴海东强冉汤石明刘民汤华; 关键词：DFF45 融合蛋白多克隆抗体

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汤石明