沈月
- 作品数：16 被引量：22H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Duchenne型肌营养不良症药物筛选模型的构建被引量：1
- 2006年
- 建立一种能方便检测utrophin表达的方法,制备筛选Duchenne肌营养不良症治疗药物的细胞模型。将Utrophin基因上18号和19号外显子及其周围约6.7kb的DNA,分三段克隆下来,并将TETC报告基因插入插入片段Ⅰ(其中的18号外显子)中,构建打靶基因。经过电转化的方法,将测序正确的打靶基因转染到C2C12细胞株中。经G418筛选,FlAsH荧光染色,PCR扩增鉴定得到正确同源重组的细胞株。为筛选utro-phin表达促进剂建立了细胞模型,为筛选DMD治疗药物打下基础。
- 潘英钱之玉孙勇军沈月王晓春朱敏生
- 关键词：DUCHENNE肌营养不良症抗肌萎缩蛋白UTROPHIN报告基因同源重组
- 诱生型一氧化氮合酶特异性抑制肽的制备
- 2002年
- 目的 :通过噬菌体展示技术筛选 i NOS特异性抑制肽。方法 :将 i NOS FAD结合区及其附近序列的基因片段装入 p ET-2 8a( + ) ,在大肠杆菌 BL2 1 中表达 ,His.Bind TM亲和层析柱纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白筛选Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,筛选 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果 :得到具有较高表达量的目的蛋白 ,经 His.Bind TM柱亲和层析纯化后纯度大于 95 % ,以纯化蛋白筛选 Ph.D.-1 2 TM噬菌体库 ,经 4轮筛选获得 1 0株 i NOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆 ,测序发现其中 5株序列完全相同 ,合成该 1 2肽 ,初步研究表明其对 i NOS表现为高浓度抑制 ,低浓度兴奋的作用 ,而对 n NOS及 e NOS则没有影响。结论 :以 i NOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对 i NOS活性具有特异性影响 ,可根据这些特征设计合成小分子前导药物 。
- 潘英朱敏生沈月许祥裕朱东亚朱有华
- 关键词：噬菌体展示
- 诱生型一氧化氮合成酶N端蛋白的诱导表达与纯化被引量：1
- 1998年
- 诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）Ｎ端蛋白的表达，对阐明其功能和制备ｉＮＯＳ特异性抗体具有重要意义。本文对ｉＮＯＳ１１９６ＡＡ重组蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行了优化，结果表明：在优化条件下，经ＩＰＴＧ诱导，重组蛋白表达量可达菌体蛋白的１５％２０％。为获得重组蛋白纯品，建立了Ｈｉｓ．ＢｉｎｄＴＭ柱亲和层析法和凝胶蛋白的两步纯化法。
- 潘英钱之玉许祥裕朱东亚朱有华朱东亚朱有华朱敏生
- 关键词：诱生型一氧化氮合成酶蛋白纯化
- 正常肌肉和Duchenne肌营养不良肌肉中脑型一氧化氮合酶mRNA及其蛋白表达量的研究
- 2000年
- 目的 检测正常人与Duchenne肌营养不良症 (DMD)患儿肌肉中脑型一氧化氮合酶(nNOS )mRNA及其蛋白的表达水平。方法 建立高敏感性的RNA酶保护实验 ,并通过Westernblot分析的方法 ,对 10例DMD肌肉标本和 5例正常儿童肌肉标本中nNOSmRNA及其蛋白表达情况进行检测。结果 DMD患儿肌肉中nNOSmRNA的表达量只有正常肌肉的 10 % ,nNOS蛋白亦有相同的表达规律。结论 nNOS蛋白在DMD肌肉细胞和肌膜上呈低含量 ,是由于nNOS在转录水平上合成减少所致。
- 朱敏生潘英王刚许祥裕范毓华沈月智刚Kim S LauJamesT Stull
- 关键词：一氧化氮合酶信使肌营养不良
- 诱生型一氧化氮合酶抗体的制备与初步应用被引量：4
- 2001年
- 目的制备诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)特异性抗体并应用于iNOS检测。方法将iNOSN端片段装入原核表达载体pET 2 8a(+) ,在大肠杆菌BL2 1中表达 ,两步法纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白制备iNOS多克隆抗体。获得的抗血清用于小鼠巨噬细胞及小鼠脑缺血模型中iNOS的检测。结果得到具有较高表达量的融合蛋白 ,经两步纯化获得iNOSN端融合蛋白纯品 ,将此蛋白免疫家兔 ,得到iNOS多克隆抗体 ,Westernblot分析表明该抗体不与nNOS、eNOS交叉反应 ,而能检测组织、细胞中的iNOS。
- 许祥裕朱敏生潘英沈月朱东亚朱有华
- 关键词：诱生型一氧化氮合酶重组蛋白特异性抗体
- nNOS片段在大肠杆菌中的表达及特异性抗体的制备被引量：1
- 1999年
- 目的：为了制备ｎＮＯＳ特异性抗体。方法：用ＰＣＲ的方法克隆出ｎＮＯＳ７０８～８８１ａａ片段的编码基因并将之插入ｐＥＴ２８ａ原核表达载体。结果：成功地在大肠杆菌中获得高效表达。经ＨｉｓＴａｇＳｅｐｈａｒｏｓｅ和电泳回收法得到纯蛋白，将此蛋白免疫兔，制备出ｎＮＯＳ特异性抗体，抗体效价可达１∶８０００。利用该抗体成功地检测了正常肌肉和ＤＭＤ肌肉中ｎＮＯＳ的含量变化，证实ＤＭＤ肌肉中ｎＮＯＳ的含量明显低于正常肌肉。结论：制备的抗体具有较高的特异性。
- 陈强朱敏生沈月沈月潘英许祥裕丁树标潘英Kim S Lau朱东亚
- 关键词：大肠杆菌NNOS特异性抗体基因重组基因表达
- 促Utrophin表达药物的筛选方法的建立与应用被引量：2
- 2006年
- 目的:建立一种筛选促Utrophin表达药物的方法。方法:将含有utrophin基因下游增强子DUE和PA启动子以及LacZ报告基因的重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12细胞,以此作为细胞模型,筛选中药材样品库,筛选出能增强Utrophin表达的药物,得到的阳性药物分别给予C2C12细胞和BALB/c小鼠,检测Utrophin表达的变化。结果:得到佛手等3个在细胞和整体水平促进Utrophin表达的候选药物。结论:成功地建立了1种筛选促Utrophin表达药物的方法,为进一步开发杜兴氏肌营养不良症(DMD)治疗药物奠定基础。
- 潘英钱之玉沈月王晓春朱敏生
- 关键词：UTROPHIN中药药物筛选
- iNOS N端融合蛋白在大肠杆菌中的表达及抗体制备
- 1999年
- 目的表达ｉＮＯＳＮ端片段并制备ｉＮＯＳ特异性抗体。方法将ｉＮＯＳＮ端片段装入原核表达载体ｐＥＴ－２８ａ（＋），在大肠杆菌ＢＬ２１中表达，Ｈｉｓ．ＢｉｎｄＴＭ柱亲和层析分离纯化及凝胶蛋白回收的两步纯化法纯化目的蛋白，使用纯化蛋白制备ｉＮＯＳ多克隆抗体。结果得到具有较高表达量的融合蛋白，经两步纯化获得ｉＮＯＳＮ端融合蛋白纯品，将此蛋白免疫家兔，得到ｉＮＯＳ多克隆抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实该抗体具有较好的反应性及特异性。结论原核表达ｉＮＯＳＮ端片段制备ｉＮＯＳ抗体具有很好的特异性。
- 潘英朱敏生沈月沈月朱东亚许祥裕陈强
- 关键词：INOS重组蛋白特异性抗体抗体制备
- 人白细胞介素6表达的核因子蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定
- 1998年
- 将ＮＦ－ＩＬ６基因与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）基因融合并成功地表达出具有生物活性的ＮＦ－ＩＬ６，经ＧｅｌＲｅｔａｒｄａｔｉｏｎ分析证实该重组蛋白能与其ＤＮＡ识别元件结合。实验还发现，虽然重组蛋白的表达率较低。
- 朱敏生刘定干刘定干许祥裕李载平
- 关键词：大肠杆菌
- 重组人突变型TNF-α在大肠杆菌中的诱导表达及高效纯化被引量：1
- 1999年
- 建立重组人突变型ＴＮＦ－α的纯化工艺，获得ＴＮＦ－α纯品，为下游规模生产打基础。方法：诱导表达重组 ＴＮＦ－α突变体蛋白，用 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ两步层析结合小范围线性梯度洗脱法纯化。结果：所得重组蛋白的纯度达９８％以上，比活达１．７×１０９ｕ／ｍｇ蛋白，无热原。结论：此纯化方法可对重组ＴＮＦ－α突变体蛋白进行高效快速纯化，易于实现规模化生产。
- 沈月龙娜朱敏生潘英许祥裕
- 关键词：突变型肿瘤坏死因子Α纯化
