王妮丹
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究
- 2007年
- 目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。
- 秦娜琳尹丙姣王妮丹朱建华庞艳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：反向信号MCF-7细胞
- HIV-1 CRF07_BC毒株gp41重组DNA-蛋白疫苗的制备及免疫被引量：1
- 2014年
- 目的制备中国HIV-1流行株CRF07_BC膜蛋白gp41重组DNA-蛋白疫苗,并观察其在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法从CRF07_BC毒株（CN54）中扩增gp41胞外段,删除抗原决定环loop区（the immune dominant loop region）,引入T569A和I675V两个突变位点,制备含N-端七价重复序列（N-terminal heptad repeat,NHR）、C-端七价重复序列（C-terminal heptad repeat,CHR）和近膜区（membrane proximal external region,MPER）的重组疫苗,以未改造的gp41相应区域为对照免疫原。使用DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强的方式免疫BALB/c小鼠,最后一针免疫后4周,经小鼠眼眶采血,分离血清,检测结合抗体水平、中和抗体水平、线性表位抗体水平。结果 CN54 gp41野生型及改造型重组DNA疫苗质粒和原核蛋白表达质粒经双酶切及测序鉴定均构建正确;CN54 gp41W和CN54 gp41M表达蛋白相对分子质量约在12 000-15 000之间,纯化的重组蛋白可被豚鼠抗gp140阳性血清识别。CN54M组（CN54 gp41改造抗原组）诱导出较高的结合抗体水平,而线性表位抗体水平明显低于CN54W组（CN54 gp41未改造组）,两组均未检测出具有保护性的中和抗体水平。结论 CN54 gp41改造抗原经DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强免疫小鼠,可产生较高的结合抗体,且主要是针对空间构象表位,但不具有中和能力。
- 王妮丹罗振武孙红岩何彦平邵一鸣郝彦玲
- 关键词：人类免疫缺陷病毒GP41疫苗
- 稳定转染TNFα及其突变体的骨肉瘤细胞生物学功能的研究
- 2007年
- 目的建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应。方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表达及其生物学活性2个方面对转染细胞进行检测鉴定。结果野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体分别在MG63细胞中得到有效表达,并具有生物学活性。结论获得2种稳定表达TNFα的人骨肉瘤细胞株,为进一步研究TNFα的各种生物学行为和探索骨肿瘤的基因治疗奠定基础。
- 庞艳王晶李清芬王妮丹朱建华姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：MG63细胞细胞毒效应
- HIV-1异性传播关系及传播病毒序列特征的分析
- 研究意义和目的： 随机对照临床实验(HPTN052)研究表明,HIV-1先阳者通过早期抗病毒治疗(early-ART)可以有效降低家庭内的传播。说明ART在治疗的同时还发挥预防作用,通过分子流行病学信息排除家庭外感染的情...
- 王妮丹
- 关键词：HIV-1传播病毒SGA
- H5N1亚型禽流感病毒样颗粒的构建及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建同时含有禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14的血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种基因的重组杆状病毒,并研究其表达产物的生物学特性。方法利用RT-PCR法从禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14中扩增HA、NA及M1基因片段,并同时亚克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBacDual中,构建重组杆状病毒穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒Bacmid-HA-NA-M1a。Westernblot法和血凝试验检测HA、NA及M1蛋白在Sf9细胞中的表达;表达的重组蛋白经超速离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化后,透射电镜观察病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的形态结构,并通过单向免疫扩散(Single radialimmunodiffusion,SRID)试验检测HA的含量。结果已成功构建了重组杆状病毒,该病毒可同时表达HA、NA及M1蛋白,3种蛋白可自行组装成VLPs,并分泌至细胞培养上清中,血凝效价可达1∶64;重组杆状病毒表达的蛋白形成的VLPs与NIBRG-14标准抗血清形成沉淀环,浓缩及纯化后的重组蛋白HA含量分别为36和27μg/ml;透射电镜观察可见直径约100 nm的典型流感VLPs。结论构建的重组杆状病毒可表达VLPs,为禽流感新型疫苗的研制奠定了基础。
- 施金荣杨晓明杜慧邱阿明王妮丹黄晓媛
- 关键词：病毒样颗粒杆状病毒表达系统
- TRAF1-DsRed真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的定位被引量：5
- 2007年
- 目的构建融合蛋白TRAF1-DsRed的真核表达载体及观察TRAF1在COS-7细胞中的表达及定位。方法采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增TRAF1cDNA,定向克隆至真核表达载体pDsRedC1,经脂质体转染COS-7细胞并以间接免疫荧光检测其在COS-7中表达。运用罗丹明123染色和激光共聚焦技术观察TRAF-1在COS-7细胞中的定位。结果转染重组子pTRAF1-DsRed的COS-7细胞可见红色荧光蛋白的表达,TRAF1在COS-7细胞中定位于线粒体。结论成功构建pTRAF1-DsRed融合基因并进行真核表达,确定TRAF-1在COS-7细胞中的定位,为进一步研究有关TRAF1的信号传导通路奠定了基础。
- 王妮丹王晶潘玉玲秦娜林庞艳朱建华刘涛张述李卓娅
- 关键词：TRAF1细胞定位线粒体
- HIV-1 CRF07_BC gp41重组抗原在不同体系表达效率的比较被引量：1
- 2014年
- 目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导表达并经WB鉴定。结果 4种原核表达质粒构建完成,蛋白成功表达。PGEX-6p-1表达量明显高于pThioHis A载体;而无标签载体组中,PBV220表达量优于pThioHis A-1。BL21和Rosetta宿主菌对表达体系无影响。结论 HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原在大肠杆菌中以包涵体形式存在,构建在PGEX-6p-1和PBV220载体上gp41重组蛋白表达效率较高,为gp41疫苗的研究和血清学检测提供充足的抗原。
- 王妮丹罗振武郝彦玲孙红岩何彦平邵一鸣
- 关键词：HIV-1
