王淑杰
- 作品数：21 被引量：38H指数：5
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- 抑制人bFGF基因表达增殖的siRNA序列及其表达载体和应用
- 本发明公开了一种抑制人bFGF基因表达的siRNA序列和表达载体及其应用，属于生物工程技术。本发明是将bFGF－siRNA导入肿瘤细胞后，可以靶向作用于bFGF基因的mRNA，从而阻断其翻译过程，有效地沉默bFGF基因，...
- 王金环王淑杰冯学泉张飚徐新女
- 文献传递
- 富亮氨酸胶质瘤失活基因(LGI1)在胶质瘤中表达的研究
- 目的：探讨胶质瘤组织富亮氨酸胶质瘤失活基因1(Leucine richgene-GliomaInactivated 1，LGI1)mRNA的表达及与细胞增殖活性之间的关系。 方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-P...
- 徐新女王金环王淑杰郭承承刘宏胜卢轶张益伟白雪
- 关键词：胶质瘤KI-67标记指数增殖活性MRNA表达
- 文献传递
- 碱性成纤维细胞生长因子小分子干扰RNA对胶质瘤细胞株U251增殖与凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 背景与目的:碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的重要一员,bFGF是多功能细胞因子,参与创伤愈合、组织修复、未成熟神经细胞的增殖和分化过程。本课题组前期对bFGF在胶质瘤中的表达做过研究,证实bFGF在胶质瘤细胞中过表达,并刺激胶质瘤细胞的增殖和新生血管生成。本研究检测bFGF小分子干扰RNA对胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响。方法:用化学法合成四条针对bFGF的siRNA和一条阴性对照siRNA,并用脂质体法转染胶质瘤细胞系U251;以Opti-MEMI无血清培养基培养的U251细胞作为正常对照。通过RT-PCR和免疫组化的方法检测bFGF的表达,并用流式细胞术、MTT法检测转染后U251细胞的凋亡和增殖活性的变化。结果:转染48h后,正常对照、阴性对照、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4组U251细胞中的bFGFmRNA水平分别为0.95±0.02、0.95±0.02、0.85±0.02、0.76±0.04、0.65±0.04和0.56±0.03;转染72h后,分别为0.95±0.04、0.89±0.05、0.81±0.05、0.80±0.05、0.77±0.04和0.53±0.05。四条bFGFsiRNA中,siRNA-4作用最显著。转染48h后,siRNA-4和阴性对照组细胞增殖抑制率分别为(66.4±1.2)%和(56.3±1.4)%;转染72h后,分别为(40.0±2.6)%和(14.7±0.6)%,siRNA-4与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:理想的bFGF小分子干扰RNA能够抑制该基因的表达并抑制胶质瘤细胞的增殖活性。
- 王淑杰王金环张益伟徐新女刘宏胜
- 关键词：RNA干扰碱性成纤维细胞生长因子胶质瘤U251细胞
- 富亮氨酸胶质瘤失活基因在胶质瘤中的表达
- 2008年
- 目的探讨胶质瘤组织富亮氨酸胶质瘤失活基因1（LGI1）mRNA的表达及与细胞增殖活性之间的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法对30例脑胶质瘤组织、2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本进行半定量检测，同时采用S-P免疫组化法检测Ki-67标记指数。结果脑胶质瘤组的LGI1 mRNA表达水平低于正常脑组织和脑膜瘤（P〈0．05）。脑胶质瘤中，WHO Ⅳ级的胶质瘤LGI1 mRNA表达低于WHO Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤（P〈0．05），与Ki-67标记指数呈负相关关系（r=-0．621，P〈0．01）。结论LGI1基因的表达与Ki-67标记指数呈负相关，提示LGI1与胶质瘤的发生关系密切。
- 徐新女王金环王淑杰郭承承刘宏胜卢轶张益伟白雪
- 关键词：神经胶质瘤逆转录聚合酶链反应KI-67
- 诱导C57鼠获得抗β淀粉样蛋白抗体的新途径
- 2009年
- 目的探讨诱导C57鼠产生β淀粉样蛋白抗体的新途径。方法收获小鼠骨髓细胞,定向培养为树突状细胞(DCs),培养期间加用突变型β淀粉样蛋白1-42多肽刺激致敏。流式细胞仪测定收获的DCs成熟度。将致敏DCs作为疫苗接种至C57鼠,以β淀粉样蛋白+氟氏佐剂接种作为阳性对照,用间接ELISA法测定小鼠的抗β淀粉样蛋白抗体滴度。结果用突变型β淀粉样蛋白刺激DCs可促进其表面CD11c、CD86、MHC-Ⅱ及CD80分子表达从54.69%、76.68%、44.77%和58.65%分别提高到77.49%、92.76%、85.52%和75.57%。接种DCs后14d抗β淀粉样蛋白抗体滴度开始逐渐升高,一直持续到免疫后35d仍未见降低。相对于佐剂疫苗7d显著升高、21d达峰的变化曲线有所平缓和滞后。DCs疫苗免疫后平均抗体滴度最高达到2425.17倍,但比佐剂疫苗组要低(平均最高3200倍)。结论采用DCs疫苗能有效地诱导C57鼠产生足够的抗β淀粉样蛋白抗体。
- 罗仲秋王金环徐新女冯全胜王淑杰林娜刘宏胜
- 关键词：树突状细胞Β淀粉样蛋白阿尔茨海默病
- 白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白表达的影响被引量：3
- 2008年
- 探讨白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制和相关蛋白的表达及其意义。采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响;采用ABC免疫组化法检测相关Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白的表达。结果显示,白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间、剂量相关;白藜芦醇作用于U251脑胶质瘤细胞后Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1、STAT-3蛋白表达下降,同时细胞形态也发生改变。白藜芦醇能抑制于U251脑胶质瘤细胞的增殖,能诱导细胞凋亡。
- 刘宏胜王金环徐新女王淑杰祁建滨
- 关键词：白藜芦醇脑胶质瘤蛋白表达
- RNA干扰胰岛素样生长因子结合蛋白2基因治疗胶质瘤的体外实验研究
- 2008年
- 目的研究与胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGF-BP2)对胶质瘤的抑制作用。方法化学合成3条针对IGF-BP2的siRNA和1条阴性对照siRNA,采用小分子干扰RNA技术使胶质瘤U251细胞的IGF-BP2基因沉默。通过逆转录PCR和免疫组化的方法检测IGF-BP2的表达,用MTT法检测干扰后U251细胞的增殖活性变化。结果逆转录PCR检测表明转染后24hIGF-BP2的mRNA表达明显降低,空白对照、阴性对照、脂质体、siRNA1、siRNA2、siRNA3组中IGF-BP2mRNA水平分别为:0.88±0.02,0.87±0.03,0.84±0.02,0.65±0.03,0.55±0.04和0.64±0.02。48h分别为0.93±0.04,0.90±0.04,0.93±0.03,0.76±0.04,0.58±0.03和0.75±0.02,72h为0.95±0.04,0.95±0.03,0.94±0.02,0.78±0.05,0.60±0.02和0.76±0.03。3条siRNA中siRNA2作用最显著。免疫组织化学方法检测表明IGF-BP2的蛋白表达阳性率也由92.3%明显降低至24h的15%,至48h为52.5%,仍低于正常胶质瘤细胞。RNA干扰后胶质瘤细胞的MTT值虽在缓慢升高,于24h相对于对照组差异无统计学意义,但至48h和72h均低于对照组(P<0.05)。结论理想的IGF-BP2小分子干扰RNA序列能够抑制该基因的mRNA和蛋白的表达并能抑制胶质瘤细胞的增殖活性。
- 罗仲秋王金环白雪王淑杰徐新女
- 关键词：RNA干扰胶质瘤
- 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小分子干扰RNA治疗胶质瘤的体外实验研究
- 王金环王淑杰祁建滨周忆频郑守学张益伟白雪徐新女
- 该课题采用人工化学法合成四对bFGF基因的小干扰片断(siRNA)，从四对预选的siRNA中选出最优化的一对进行体外实验。首先采用脂质体介导的方法转染入高表达bFGF的胶质瘤细胞系U251中，应用RT-PCR法检测转染细...
- 关键词：
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子胶质瘤小分子干扰RNA
- RP-HPLC法测定花生仁、花生油和葡萄干中白藜芦醇被引量：8
- 2006年
- 刘宏胜王金环徐新女王淑杰祁建滨卜国云刘洪利
- 关键词：白藜芦醇花生仁葡萄干花生油抗自由基作用抗血栓作用
- LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr被引量：6
- 2008年
- 目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。
- 冯学泉徐军王金环徐新女王淑杰
- 关键词：腺病毒科质粒HIV
