王震
- 作品数：33 被引量：85H指数：5
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省科技厅重点资助项目温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究被引量：3
- 2007年
- 目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。
- 王震叶明君邹立林季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶纯化
- 靶向IL18-EGF融合蛋白体内抗肿瘤活性研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨自制的靶向IL18-EGF融合蛋白抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的作用及对人肝癌裸鼠动物模型抑瘤率的影响,为人肝癌的生物治疗提供新思路。方法注射SMMC-7721细胞至Balb/c裸鼠右侧腰部,成瘤后,将裸鼠进行随机分成IL18-EGF组、rhIL18组和NS对照组,瘤周注射相应的药物及其经X-射线处理的NK-92细胞。在治疗前后各时间点计量肿瘤体积,最后一次治疗的次日,处死全部裸鼠,切除肿瘤组织。一部分肿瘤组织制成单细胞悬液并应用流式细胞术进行细胞周期和凋亡的监测;另一部分肿瘤组织用于病理切片染色和观察。结果在治疗结束时,移植瘤的体积在IL18-EGF组、rhIL18组和NS组分别为(0.063±0.030)cm3,(0.212±0.037)cm3和(0.432±0.030)cm3,NS组与IL18-EGF组和rhIL18组有显著性差异(P<0.01),rhIL18组与IL18-EGF组有显著性差异(P<0.05);细胞周期分析表明,IL18-EGF组、rhIL18组和NS组分别有(96.11%±1.51%),(81.3%±2.02%)和(72.18%±0.46%)的细胞停滞在G1期,IL18-EGF与后两者相比差异均有显著性(P<0.05,P<0.01),rhIL18组与NS组相比差异也有显著性(P<0.05),S期细胞的比例分别为(3.69%±0.41%),(16.51%±1.25%)和(23.85%±1.36%),IL18-EGF与后两者相比差异有显著性(P<0.01,P<0.01),rhIL18组与NS组相比也有明显差异(P<0.05);肿瘤细胞自主凋亡发生率在3组中也差异有显著性,与对照组(7.10%±1.13%)相比,IL18-EGF组[(28.05%±3.89%),P<0.05]、rhIL18组[(25.48%±5.46%),P<0.05]肿瘤细胞自主凋亡差异有显著性,而IL18-EGF组和rhIL18组间差异无显著性;肿瘤标本切片观察未发现各组治疗前后病理特征有明显变化。结论裸鼠瘤周注射IL18-EGF合并NK细胞能抑制SMMC-7721移植瘤的生长表明IL18-EGF具有体内的抗肿瘤效应,可能为人肝癌治疗提供一种新的治疗策略与手段。
- 吕建新王震何剪太张阳德
- 关键词：人肝癌靶向
- CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)克隆、表达、纯化以及酶动力学的研究
- 超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLSs)是一种能水解青霉素类、头孢菌素类以及单环类抗菌药物的β-内酰胺酶,主要包括TEM型,SHV型,CTX-M型,OXA型等。本研究...
- 田宇鑫王震曲建春林镯吕建新
- 关键词：CTX-M-14克隆发酵纯化
- 文献传递
- 高活性β-内酰胺酶的分离、表达和性质
- 2008年
- 应用DNA家族改组方法制备TEM型β-内酰胺酶基因突变文库，利用平皿初筛和琼脂稀释法复筛获得一株酶活力增高的突变体blaTEM^m。带有该突变基因的大肠杆菌，其最低抑菌浓度（MIC）比带有野生型blaTEM的大肠杆菌高24倍（氨苄青霉素）、4-8倍（头孢唑啉）、4-8倍（头孢呋辛）、16-32倍（头孢他啶）、8倍以上（头孢曲松）和4～8倍（头孢噻肟）。在E.coli BL21（DE3）高效表达blaTEM和blaTEM^m，利用离子交换柱层析和凝胶过滤层析对包涵体进行柱上复性和纯化，获得纯度达90％的重组蛋白质。酶动力学分析显示，与野生型蛋白相比，突变蛋白酶促反应的kcat／Km值分别增加1．5倍（青霉素G）、4．4倍（氨苄青霉素）、3．1倍（头孢唑啉）、2．8倍（头孢他啶），但是对头孢噻肟的kcat／Km下降了2．5倍。DNA序列分析显示blaTEM^m发生7处碱基置换，造成4个氨基酸改变，即S59G、R164S、A237T和E240K。应用Swiss-Pdb Viewer3．7软件预测蛋白质的三维结构，显示这些突变不影响酶的活性中心，但是变异造成的蛋白质空间结构的细微变异增加了酶和底物的亲和性。
- 赖飞田宇鑫赵峰王震吕建新
- 关键词：Β-内酰胺酶最低抑菌浓度耐药
- 实时定量PCR检测细菌中bla_(CTX-M-14)基因
- 2009年
- 目的探索实时定量PCR检测临床、环境细菌中blaCTX-M-14基因流行情况。方法将收集的65份标本先用ESBL表型确认试验及其KB琼脂扩散法初筛,然后通过菌落平板计数,实时定量PCR方法测出细菌blaCTX-M-14基因C(t)值,最终计算得到平均每个待测细菌中的blaCTX-M-14基因的单个拷贝数。结果从65份标本中分离得到4株产ESBLs的大肠埃希菌,实时定量PCR检测后得到四株细菌的blaCTX-M-14基因C(t)值依次为11.08,11.63,11.80,13.46,拷贝数分别为6.92×107copies/μl菌液,4.67×107copies/μl菌液,4.22×107copies/μl菌液,1.35×107copies/菌液,即1.05copies/细菌,1.90copies/细菌,2.92copies/细菌,1.10copies/细菌。结论细菌blaCTX-M-14基因拷贝数的高低与细菌多重耐药现象正相关,建立的实时定量PCR检测细菌中blaCTX-M-14基因的方法具有直观,快捷的优点,有助于检测临床及其环境中耐药菌blaCTX-M-14基因流行情况。
- 王震钱凯吕建新邹立林陈栋孙宝昌
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶实时定量PCR
- 天然高产脂肪酶细菌的分离鉴定及脂肪酶基因的分析被引量：1
- 2009年
- 目的:从环境中分离高产脂肪酶的细菌,并克隆其脂肪酶基因。方法:从天然高油脂含量土壤筛选高产脂肪酶的细菌,鉴定菌种后,设计相应引物PCR扩增脂肪酶基因并进行TA克隆,重组载体转入E.coli DH5α构建工程菌,双酶切及测序鉴定脂肪酶基因。结果:经过微生物菌种鉴定获得4株高活力菌,其中一株金葡菌产酶最高,利用PCR技术成功扩增脂肪酶基因,该基因经过克隆测序及其双酶切鉴定证实为新发现的突变脂肪酶基因,其二级结构与标准基因(EU310372)有较大不同。结论:成功分离一株高产脂肪酶的菌株——金黄色葡萄球菌,克隆的脂肪酶基因为新发现的突变型。
- 张迎光施晓聪林全思王震吕建新
- 关键词：脂肪酶基因PCRTA克隆
- 重组EGF-IL-18融合蛋白的表达优化与分离纯化
- 目的:构建 EGF-IL-18融合蛋白的原核表达系统,优化表达 EGF-IL-18 融合蛋白,分离纯化有活性的 EGF-IL-18。方法:将人 EGF-IL-18融合蛋白基因克隆到 pET12a(+)和 pET26b(+...
- 赵峰彭颖吕建新王震赖飞
- 关键词：分离纯化复性
- 文献传递
- 壳聚糖微球固定化重组TEM-116型ESBL的研究被引量：2
- 2011年
- 目的利用固定化酶技术,使重组TEM-116型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)在清除环境中残留抗生素的应用中可重复使用,并改善其稳定性。方法以戊二醛为交联剂将重组TEM-116型ESBL固定于壳聚糖微球载体,并采用单因素轮换法和响应曲面法对固定化条件进行优化。结果 4℃条件下,当戊二醛浓度0.54%、交联pH5.4、给酶量0.58IU/g壳聚糖微球、固定化pH6.2时,固定化酶的酶活和回收率分别可达到0.49IU/g和84%(0.49IU/0.58IU)。与游离酶相比,固定化酶的酸碱稳定性和可重复利用性得到显著提高,在pH5.8～7.4范围内酶活性保持在73%～100%的水平,经7次重复性使用,每次1h,酶活力保留高达80%。结论通过固定化酶技术,以重组TEM-116型ESBL为代表的耐药酶能够开发为具有广泛应用前景的环保制剂,以消除外环境中残留的抗生素。
- 徐荣韩冬青王震楼永良陈秀枢
- 关键词：壳聚糖固定化酶超广谱Β-内酰胺酶
- 超广谱Β内酰胺酶SHV-4型基因克隆表达与纯化研究
- 2006年
- 楼永良王震郑颖吕建新陈秀枢尹惠琼邱薇李作生范泉水高国辉陆永绥
- 关键词：超广谱Β内酰胺酶基因克隆表达微生物学诊断食品监测药物生产耐药菌
- 温州市2005年不同人群HIV抗体检测结果分析被引量：5
- 2007年
- 目的:为了解温州市艾滋病病毒感染状况,为温州市艾滋病的监测和防治工作提供理论依据。方法:收集2005年温州市各疾控系统、医疗单位、中心血站、戒毒所、出入境检验检疫局等单位各血清样本和资料,其中包括性病门诊就诊者、哨点监测、吸毒人员、献血者、卖淫者及部分术前病人等人群的样本血清学检测并进行资料分析。结果:2005年共检测138 572份血清,初筛检出H IV抗体阳性为179例,确证H IV抗体阳性为70例。H IV抗体阳性率高的人群为H IV阳性者的配偶、自愿检测者、性病病人、吸毒者,阳性率分别为7.69%、3.42%、2.83%、2.57%,术前检查者、献血员、劳教人员H IV抗体阳性检出率较低,阳性率分别为0.05%、0.01%、0.10%。70例H IV抗体阳性者中术前检查者、吸毒者、性病病人阳性构成比居前三位,分别为41.43%、21.43%、14.29%,自愿检测者、献血员、劳教人员、H IV阳性者配偶阳性构成比较低,分别为10.00%、7.14%、4.29%、1.43%。结论:温州市H IV感染率在特殊人群中比例较高,虽然一般人群仍处于较低水平但H IV的感染有开始向一般人群扩散的趋势,所以不仅要继续加强监测,同时还应开展健康教育为主的干预,提高我们一般人群自我防范意识,以遏制艾滋病在我市的流行和蔓延。
- 陈栋钭慧芬张宏钗朱传新孙宝昌王震
- 关键词：人免疫缺陷病毒哨点监测
