种法政
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组载体的构建及表达
- 2010年
- 从绿脓杆菌ATCC27853菌株中提取基因组,PCR扩增PE40基因,与pMD18-T载体连接并转化感受态大肠杆菌JM109中,构建重组质粒pMD-PE40;经鉴定正确后将PE40基因插入抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因重组质粒pMD-ScFv中,构建重组质粒pMD-ScFv-PE40,经酶切、电泳回收目的片段,并亚克隆到表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-ScFv-PE40;鉴定后转化E.coliBL21,IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表明,试验成功构建了重组表达载体pET-ScFv-PE40,目的片段约为1 800 bp;Western blotting证明重组蛋白具有一定的反应原性,为重组免疫毒素的制备及动物保护性试验奠定了基础。
- 郑君王石赵权种法政徐辞
- 关键词：单链抗体原核表达
- 抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因的扩增及序列分析
- 2009年
- 从分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞提取总RNA,以此为摸板,RT-PCR扩增出抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因,琼脂糖凝胶电泳检测显示约350 bp,符合鼠抗体特征。PCR产物与pMD18-T连接后转化JM109,蓝白斑法筛选出阳性重组子。以载体通用引物对阳性重组子进行鉴定,对证明为阳性的重组子测序。结果显示,轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,VH和VL有3个比较明显的CDR区和FR区。
- 种法政徐辞王石郑君赵权
- 关键词：猪囊尾蚴
- 抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因扩增和序列分析
- 猪囊尾蚴病是由猪带绦虫的幼虫(囊尾蚴)引起的一种人畜共患病。我国人体囊尾蚴病分布广泛，严重威胁着广大人民健康。多年来防治本病主要是以药物防治为主，但是由于抗药性的不断出现及药物残留等问题的严重性，限制了其在临床上的应用。...
- 种法政
- 关键词：猪囊尾蚴单克隆抗体基因扩增
- 文献传递
- 抗猪囊尾蚴头节特异性单链抗体的构建及克隆被引量：1
- 2010年
- 首先对猪囊尾蚴头节特异性单链抗体重链可变区基因(Vh)和轻链可变区基因(Vl)进行酶切鉴定,PCR鉴定以及测序分析,然后采用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,将重链可变区基因和轻链可变区基因,通过linker链连接成Vh-linker-Vl单链抗体基因(ScFv)。将此基因与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌J M109,从而进一步克隆并对重组载体pMD-ScFv进行鉴定。结果:成功构建并克隆了抗猪囊尾蚴头节单链抗体,为重组免疫毒素ScFv-PE40的构建?表达及活性测定奠定了良好的基础。
- 郑君赵权徐辞曲溪王石种法政
- 关键词：单链抗体重叠延伸PCR
- 猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析
- 2008年
- 将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因(ScFv)和绿脓杆菌外毒素基因(PE40)的重组质粒pET28-ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和western blot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13.8%。将融合蛋白通过金属Ni2+亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95%以上,可溶性蛋白的回收率约为50%,回收量为5mg/L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钩蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。
- 郑君赵权王石种法政徐辞
- 关键词：重组蛋白纯化活性分析
